常用細(xì)菌培養(yǎng)基配方

常用抗生素氨芐青霉素ampicillil〕溶解1g10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培育基。羧芐青霉素〔l〕溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最終定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培育基。甲氧西林〔l〕溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最終定容至10ml-20℃貯存。常以37.5ug/ml100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培育基。卡那霉素l〕溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最終定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培育基。氯霉素〔l〕溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中，最終定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長培育基。鏈霉素l〕溶解0.5g10ml。分裝成小份于-20℃貯存。10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培育基。萘啶酮酸cacil〕溶解50mg10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培育基。四環(huán)素l〕100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中10ml。-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培育基。常用培育基LB培育基0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化鈉10g1NNaOH〔～1ml〕調(diào)整pH7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,7g/L。(PH)SOB培育基0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化鈉0.5g1mol/L氯化鉀2.5ml用水補足體積到1L。分成100ml100ml1ml1mol/L氯化鎂。SOC培育基成分、方法同SOB100ml的小份中1ml1mol/L2ml1mol/L葡萄糖〔18g葡萄糖溶于足夠水100ml0.22um的濾膜過濾除菌。TB培育基0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml60100ml170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液〔2.31gKH2PO412.54gK2HPO4100ml。0.22um的濾膜過濾除菌。2×YT培育基0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化鈉4ml1NNaOH〔～1ml〕調(diào)整pH7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,7g/L。YPD培育基0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水補足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸養(yǎng)分缺陷型每升培育基添加1.6gYPD培育基是色氨酸限制型培育基。為了配制平板，需要在高壓滅20g瓊脂粉。培育基〔Medium〕是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽〔包括微量元素〕以及維生素和水等。有的培育基還含有抗菌素和色素。原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培育基在受熱、吸潮后，易被培育基〔如組織培育基，較長時間的貯存，必需放在C的冰箱內(nèi)。常見培育基有：1、細(xì)菌培育基配方一牛肉膏瓊脂培育基0.31.0克，氯化鈉0.5克，瓊脂1.5克，100毫升在燒杯內(nèi)加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號后，10%10%pH7.2～7.6,分裝在各個試管里，加棉花30分鐘。配方二馬鈴薯培育基取穎牛心〔除去脂肪和血管〕250克，用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后，參與500毫升蒸餾水和52pH7.510毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心配方三根瘤菌培育基葡萄糖10克磷酸氫二鉀0.5克碳酸鈣3克硫酸鎂0.2克酵母粉0.4克瓊脂20克水1000毫升1%結(jié)晶紫溶液1毫升先把瓊脂加水煮沸溶解，然后分別參與其他組分，攪拌使溶解后，分裝，滅菌，備用。2、放線菌培育基配方一淀粉瓊脂培育基〔高氏培育基〕2克硝酸鉀0.1克磷酸氫二鉀0.05克氯化鈉0.05克硫酸鎂0.05克硫酸亞鐵0.001克2克水100毫升595使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時參與瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補pH7.2～7.4，分裝后滅菌，備用。配方二面粉瓊脂培育基面粉60克瓊脂20克水1000毫升把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到50030500毫升水，放pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。3、真菌培育基配方一薩市〔Sabouraud’s〕培育基10克瓊脂20克麥芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，參與40克麥芽糖〔或葡萄糖，攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。本培育菌是培育很多種類真菌所常用的。配方二馬鈴薯糖瓊脂培育基2001000毫升，煮沸半小時后，補足水分。1020〔菌的參與葡萄糖，補足水分，分裝，滅菌，備用。pH值調(diào)到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培育放線菌和芽孢桿菌。配方三黃豆芽汁培育基黃豆芽100克瓊脂15克葡萄糖20克水1000毫升洗凈黃豆芽，加水煮沸30分鐘。用紗布過濾，濾液中參與瓊脂，加熱溶解后放入糖，1000毫升，分裝，滅菌，備用。pH7.2～7.4，可用來培育細(xì)菌和放線菌。豌豆80粒瓊脂5克水200毫升801小時，用紗布過濾后，在濾液中參與瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌，備用。4、食用菌菌種培育基配方一馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培育基20%馬鈴薯煮汁1000毫升蔗糖20克瓊脂18克200克，加水1000毫升，煮沸20100020%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中參與瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，補足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培育基對pH值要求不嚴(yán)格，可以不測定。配方二綜合馬鈴薯培育基20%馬鈴薯煮汁1000毫升磷酸二氫鉀3克硫酸鎂1.5克葡萄糖20克維生素10毫克18克先配制20%pH6菌種。5.煙草的培育基在植物組織培育時,通過調(diào)整IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化愈傷組織誘導(dǎo)培育基制備以MS培育基母液為根底,向干凈鋁鍋中挨次參與大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸20010mL,MS培育基后,0.5mg·L-1BA8mL,0.5mg·L-1NAA8mL.然后參與實際配制培育基體積約2/3-3/4,參與40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1NaOH0.5mol·L-1HClpH5.8-6.0.14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,連續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中.煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)取一無菌培育皿,1-2片無菌苗葉片置于無菌培育皿中,并用解2mm2左右的小片,然后將其接種于預(yù)備好的培育基上,每瓶接種5小片,6瓶.241周,然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培育3周直至愈傷組織形成(3瓶).觀看愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果,統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率.器官分化及植株再生培育將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培育基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22C條件下培育3周,統(tǒng)計愈傷組織再生植株狀況.愈傷組織誘導(dǎo)的總體狀況煙草愈傷組織誘導(dǎo)培育4周后,愈傷組織根本形成,即排解因生長時間不夠而未形成愈傷的狀況.具體狀況見表一中所示,6瓶培育物均有愈傷形成,且都未發(fā)生污染,但誘導(dǎo)率幾乎各不一樣.其中,3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為60.0℅,346.7%.由于試驗過程中,外植體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部格外植體的大局部細(xì)胞脫水死亡,使整個試驗的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小.培育基還有:1640培育基特別培育基：—選擇性培育基酵母菌富集培育基葡萄糖5%尿素0.1%硫化銨0.1%磷酸二氫鉀0.25%磷酸氫二鈉0.05%七水合硫酸鎂0.1%0.01%0.05%0.003%pH4.5Ashby無氮培育基富集好養(yǎng)自生固氮菌1%0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%二鑒別培育基EMBE.coli蛋白胨10g5g5g2g伊紅Y0.4g0.065g1000gpH7.2分別海洋微生物的培育基配方2216E培育基配方〔固體培育基〕5克酵母膏1克磷酸高鐵0.01克瓊脂15 20克陳海水1000毫升煮沸氫氧化納〔5%〕PH7.6—7.8其他培育基：1.高氏一號培育基KNO3:1g,NaCl:0.5