基因工程儀器操作系統(tǒng)(二)

基因工程儀器操作系統(tǒng)（二）主講人：高鳳山主要內(nèi)容超凈工作臺培養(yǎng)箱滅菌消毒設(shè)備蛋白表達(dá)系統(tǒng)第一節(jié)超凈工作臺一、普通超凈工作臺二、生物安全柜

一、普通超凈工作臺：

垂直流層、水平流層

超凈工作臺是一種局部凈化設(shè)備，即利用空氣凈化技術(shù)使一定操作區(qū)內(nèi)的空間達(dá)到相對的無塵、無菌狀態(tài)。使用時，必須放置在潔凈的空間。其接種數(shù)量不受無菌空間的限制，操作比較簡便，可以較大幅度地提高工作效率，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。為了保證接種成功率，接種時使用酒精燈，效果更好。

超凈工作臺可分不銹鋼型和全鋼型超凈工作臺運(yùn)作原理及應(yīng)用方法

超凈工作臺的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單自如，較為舒適，工作效率高，預(yù)備時間短，開機(jī)十分鐘以上即可操作，基本上可隨時使用。在工廠化生產(chǎn)中，接種工作量很大，需要經(jīng)常長久地工作時，超凈臺是很理想的設(shè)備。超凈臺由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動力，功率145～260W左右，將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3μm的塵埃、真菌和細(xì)菌孢子等等。超凈空氣的流速為24～30m/min，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。超凈工作臺上部為過濾、送風(fēng)單元，兩側(cè)面是起支撐作用的箱體，中部設(shè)有全鋼、不銹鋼工作臺。工作臺面與過濾、送風(fēng)單元之間為凈化工作區(qū)，側(cè)面設(shè)有照明燈及紫外滅菌燈各一只，輻射波長為2537A，光照度≥300LX。外殼采用316不銹鋼、1.2mm冷軋鋼材質(zhì)(表面酸洗磷化再經(jīng)環(huán)氧樹脂靜電粉末噴涂)。過濾器：初效過濾器采用無紡布制作，高效過濾器由長纖維過濾紙與鋁合金外框構(gòu)成，具有初阻力小、容塵量大過濾效率高、使用壽命長、便于更換等特點(diǎn)。腳輪：螺桿式制動腳輪潔凈等級：100級@≥0.5um（美國聯(lián)邦209E）粒徑：≥0.5um的塵埃，≤3.5粒／升風(fēng)速0.32~0.48m∕s（可調(diào)）菌落數(shù)：≤0.5個/皿?時（Ф90㎜培養(yǎng)平皿）噪音：≤62dB(Decibel)（A）震動半峰值：≤3um垂直雙面流層單人超凈工作臺二、生物安全柜（Biologicalsafetycabinets,BSCs）1.生物安全柜介紹是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時，用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及實(shí)驗(yàn)材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計(jì)的。

當(dāng)操作液體或半液體，例如搖動、傾注、攪拌，或?qū)⒁后w滴加到固體表面上或另一種液體時，均有可能產(chǎn)生氣溶膠。在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細(xì)胞培養(yǎng)瓶、采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移至微量培養(yǎng)板中、對感染性物質(zhì)進(jìn)行勻漿及渦旋震蕩、對感染性液體進(jìn)行離心以及繼續(xù)動物操作時，這些實(shí)驗(yàn)室操作都可能產(chǎn)生感染性氣溶膠。

由于肉眼無法看到直徑小于5μm的氣溶膠以及直徑為5~100μm的微小液滴，因此實(shí)驗(yàn)室工作人員通常意識不到這樣大小的顆粒在生成，并可能吸入或交叉污染工作臺面的其他材料。已經(jīng)表明，正確使用生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的傷害。Bioaer2.生物危害（Biohazard）一種對人體能產(chǎn)生有害因子的生物源性的力量，例如：由植物和動物傳播的微生物、毒素和過敏原感染和毒害人。實(shí)驗(yàn)室生物安全（Biosafety）為防止實(shí)驗(yàn)室的生物危害采取合適的實(shí)驗(yàn)程序和操作，使用必要的防護(hù)設(shè)備保證人員及環(huán)境的安全。２００３年７月１９日，衛(wèi)生部法監(jiān)司在北京召開《生物安全實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證管理專家研討會》呼吁：盡快：建立機(jī)構(gòu)、制訂法規(guī)。落實(shí)：建設(shè)前論證、建設(shè)后驗(yàn)收、使用中監(jiān)督。２００３年１２月３０日，國家科技部召開“全國生物安全實(shí)驗(yàn)室管理工作會議”實(shí)驗(yàn)室生物安全應(yīng)納入法制管理Bioaer根據(jù)：“……實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則”據(jù)所處理的微生物及其毒素的危害程度分為四級，依次為：

一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-1）無致病作用的微生物，如教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等

二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-2相當(dāng)于P2)具有中等潛在危害的微生物。(其中“P”的定義為PhysicalProtecton物理的保護(hù)/Physicalcontainment物理的防護(hù))三級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-3相當(dāng)于P3)呼吸傳播，使人傳染嚴(yán)重甚至是致病微生物及其毒素，傳播途徑明確，目前已有疫苗

四級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-4相當(dāng)于P4)

高度危險(xiǎn)性，通過氣溶膠傳播或傳播途徑不明，目前尚無疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。3.生物安全實(shí)驗(yàn)室的劃分Bioaer一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室無須使用生物安全柜應(yīng)穿工作服，手上皮膚有破損戴手套實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造無特殊要求：有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗，設(shè)洗手池，圍護(hù)結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙，不得鋪設(shè)地毯。實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱，有專門放置生物廢棄物容器的臺（架）Bioaer二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）適用于：

(1)含漱液、血清和血液等樣品的診斷檢測(2)溶液、固定或用其他方法處理滅活的病毒和/或無傳染性病毒基因片段（3）常規(guī)的細(xì)菌和毒素檢測（4）能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理（5）臨床樣品的包裝、分裝（6）離心管和離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的封閉與開啟BioaerBSL-2Laboratory

Bioaer4.使用生物安全柜的場所如下情況使用生物安全柜：（1）致病微生物氣溶膠或?yàn)R出的操作應(yīng)在生物安全柜（Ⅱ級生物安全柜為宜）Bioaer（2）處理高濃度或大容量感染性材料均須在生物安全柜(Ⅱ級安全柜為宜）或物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。（3）上述材料的離心操作如果使用密封的離心機(jī)轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且它們只在生物安全柜中開閉和裝載感染性材料，則可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。Bioaer總結(jié)：生物安全防護(hù)將是今后臨床實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的重要基礎(chǔ)設(shè)施,進(jìn)行傳染性標(biāo)本的操作的臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備生物安全柜今后臨床實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)應(yīng)具備二級實(shí)驗(yàn)室的生物安全性,傳染病專科醫(yī)院或三級綜合醫(yī)院至少要一個城市要有一個P3實(shí)驗(yàn)室Bioaer⑴Ⅱ級生物安全柜至少裝一個高效過濾器對排氣進(jìn)行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化無渦流單向流空氣。正面推拉窗打開一半，上為觀察窗，下為操作窗。外部空氣由操作窗口吸進(jìn)，而不能逸出。既保證工作人員不受侵害，也保證實(shí)驗(yàn)對象不受污染（工作原理見圖）5.生物安全柜原理及分型Ⅱ級生物安全柜BioaerⅡ級生物安全柜Bioaer四大要素：

1.物理屏障

2.高效過濾

3.空氣屏障

4.定向?qū)恿?/p>

Bioaer機(jī)理

HEPAFilters（過濾器）誘捕效應(yīng)靜電效應(yīng)攔截效應(yīng)沉降效應(yīng)擴(kuò)散效應(yīng)小于0.3um的病毒通過HEPAFilter滲透測試結(jié)果顯示，每30,000,000個顆粒中才有1–2個可以通過過濾器Bioaer⑵三級生物安全柜

至少裝一個高效過濾器對排氣凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流單向流空氣。正面上部為觀察窗，下部為手套箱式操作口。箱內(nèi)對外保持負(fù)壓．可確保人體與柜內(nèi)物品全隔絕。Bioaer

三級生物安全柜

如圖：第二節(jié)培養(yǎng)箱內(nèi)容提要一、電熱恒溫培養(yǎng)箱

二、細(xì)胞培養(yǎng)箱

三、厭氧培養(yǎng)箱一、電熱恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱適合于普通的細(xì)菌培養(yǎng)和封閉式細(xì)胞培養(yǎng)，并常用于有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)的器材和試劑的預(yù)溫。電熱恒溫培養(yǎng)箱分為：隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱氣套式電熱恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱結(jié)構(gòu)電熱恒溫培養(yǎng)箱使用與注意事項(xiàng)

電熱恒溫培養(yǎng)箱的常見故障及排除

一、電熱恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱結(jié)構(gòu)隔水式恒溫培養(yǎng)箱的電器結(jié)構(gòu)圖主要由箱體、加熱器、鼓風(fēng)機(jī)和溫控儀等幾部分組成電熱恒溫培養(yǎng)箱使用與注意事項(xiàng)

隔水層的加水溫度設(shè)定溫度顯示值修正上限跟蹤報(bào)警設(shè)定控溫儀的PID（單向可控硅調(diào)節(jié)）自整定控制

隔水層的加水第一次使用時，打開水龍頭低水位指示燈亮且伴有報(bào)警聲，當(dāng)水位逐漸升高，低水位指示燈滅報(bào)警聲消失時，應(yīng)及時關(guān)閉水龍頭。若溢水口有水溢出時,應(yīng)把放水塞頭拔出放水，同時觀察溢水口，沒有水溢出時應(yīng)立即將塞頭塞緊。直至低水位無聲、無報(bào)警、沒水溢出。智能控溫儀的溫度設(shè)定按控溫儀的功能鍵“SET”進(jìn)入溫度設(shè)定狀態(tài)，SV設(shè)定顯示閃爍，再按移位鍵配合加鍵或減鍵，設(shè)定結(jié)束按功能鍵“SET”確認(rèn)。設(shè)定結(jié)束后培養(yǎng)箱進(jìn)入升溫狀態(tài)，加熱指示燈亮。當(dāng)箱內(nèi)溫度接近設(shè)定溫度時，加熱指示燈反復(fù)多次忽亮忽熄，表示控制進(jìn)入恒溫狀態(tài)。電熱恒溫培養(yǎng)箱的常見故障及排除故障現(xiàn)象故障原因排除方法無電源指示1．電源線未插好或斷線2．熔斷器開路1．插好電源插頭、檢查電源線2．更換熔斷器箱內(nèi)溫度不上升1．設(shè)定工作溫度小于環(huán)境溫度值；2．控溫儀損壞3．風(fēng)機(jī)損壞4．電熱絲接點(diǎn)接觸不良或電熱絲斷5．繼電器(或接觸器)觸點(diǎn)接觸不良1.調(diào)整設(shè)定溫度2.更換控溫儀或風(fēng)機(jī)3.旋緊電熱絲接點(diǎn)螺母或更換電熱絲4.清潔繼電器(或接觸器)的觸點(diǎn)設(shè)定溫度與箱內(nèi)溫度相差過大或溫度達(dá)到設(shè)定值后仍大幅度上沖1．溫度傳感器損壞2．過于頻繁地開關(guān)箱門3.物品放置過密4.控制參數(shù)偏差1.更換溫度傳感器2.盡量減少開關(guān)箱門的次數(shù)3.保證熱空氣在工作室內(nèi)正常循環(huán)4.修正控制參數(shù)超溫報(bào)警異常1．設(shè)定溫度過低2．控溫儀損壞1.調(diào)整設(shè)定溫度2.更換控溫儀漏水1.箱體損壞1．送廠家修理二、細(xì)胞培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞，在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境下，使其生長繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種體外培養(yǎng)技術(shù)。Harrison，1907年首次體外培養(yǎng)細(xì)胞成功。細(xì)胞培養(yǎng)三大必備設(shè)施：一個無菌實(shí)驗(yàn)室、一臺超凈工作臺和一個細(xì)胞培養(yǎng)箱。

細(xì)胞培養(yǎng)對生長環(huán)境要求無菌環(huán)境恒定的溫度氣體環(huán)境細(xì)胞培養(yǎng)基二、細(xì)胞培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)箱的工作原理

細(xì)胞培養(yǎng)箱的分類與結(jié)構(gòu)

細(xì)胞培養(yǎng)箱的性能指標(biāo)細(xì)胞培養(yǎng)箱的使用注意事項(xiàng)及常見故障的排除細(xì)胞培養(yǎng)箱的臨床應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)箱的工作原理

細(xì)胞培養(yǎng)箱工作原理圖

細(xì)胞培養(yǎng)箱的工作原理細(xì)胞培養(yǎng)箱氣路原理圖細(xì)胞培養(yǎng)箱的工作原理溫度是通過電熱絲加熱,再通過箱內(nèi)溫度傳感器檢測溫度變化,使箱體內(nèi)的溫度恒定在設(shè)置溫度。箱內(nèi)溫度一般設(shè)定在37℃±0.2℃左右。二氧化碳濃度是通過二氧化碳濃度傳感器來進(jìn)行檢測的。二氧化碳傳感器是用來檢測箱體內(nèi)二氧化碳濃度，將檢測結(jié)果傳遞給控制電路及電磁閥等控制器件，調(diào)節(jié)二氧化碳的濃度。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的分類與結(jié)構(gòu)

加熱方式不同氣套式細(xì)胞培養(yǎng)箱

水套式細(xì)胞培養(yǎng)箱

供氣種類不同二氧化碳培養(yǎng)箱三氣細(xì)胞培養(yǎng)箱滅菌功能不同普通細(xì)胞培養(yǎng)箱高溫滅菌培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)箱的分類：

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)由六部分組成：溫度控制系統(tǒng)氣體控制系統(tǒng)濕度控制系統(tǒng)內(nèi)門加熱系統(tǒng)污染物的控制系統(tǒng)微處理控制和信號顯示系統(tǒng)二氧化碳培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu) 細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)溫度控制系統(tǒng)：保持培養(yǎng)箱內(nèi)恒定的溫度是維持細(xì)胞健康生長的重要因素，箱內(nèi)溫度一般設(shè)定在37℃左右。氣套式細(xì)胞培養(yǎng)箱和水套式細(xì)胞培養(yǎng)箱的加熱結(jié)構(gòu)不同。細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)水套式細(xì)胞培養(yǎng)箱具有一個獨(dú)立的熱水間隔間（即水套），它的溫度是通過電熱絲給水套內(nèi)的水加熱，熱水通過自然對流在箱體內(nèi)循環(huán)流動，熱量通過輻射傳遞到箱體內(nèi)部，再通過箱內(nèi)溫度傳感器來檢測溫度變化，控制電熱絲加熱與否，使箱內(nèi)的溫度恒定在設(shè)置溫度。

氣套式細(xì)胞培養(yǎng)箱的加熱是通過遍布箱體氣套層內(nèi)的加熱器直接對內(nèi)箱體進(jìn)行加熱的，又叫六面直接加熱。具有加熱快，溫度恢復(fù)迅速的特點(diǎn)，特別有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關(guān)的培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)氣體控制系統(tǒng)：二氧化碳培養(yǎng)箱的氣體控制系統(tǒng)為單一的二氧化碳濃度控制系統(tǒng)，三氣細(xì)胞培養(yǎng)箱在二氧化碳培養(yǎng)箱的基礎(chǔ)上增加氧氣濃度控制系統(tǒng)。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)二氧化碳濃度探測可通過兩種控制系統(tǒng)：即紅外傳感器（IR）和熱傳導(dǎo)傳感器（TC）進(jìn)行測量。細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)熱傳導(dǎo)傳感器（TC）監(jiān)控二氧化碳濃度的工作原理是通過測量兩個電熱調(diào)節(jié)器（一個調(diào)節(jié)器暴露于箱體環(huán)境內(nèi)，另一個則是封閉的）之間的電阻變化來實(shí)現(xiàn)的。箱內(nèi)二氧化碳濃度的變化會改變兩個電熱調(diào)節(jié)器間的電阻，從而促使傳感器產(chǎn)生反應(yīng)以達(dá)到調(diào)節(jié)二氧化碳水平的作用。TC控制系統(tǒng)的一個缺點(diǎn)就是箱內(nèi)溫度和相對濕度的改變會影響傳感器的精確度。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)紅外傳感器（IR）比TC系統(tǒng)具備更精確的二氧化碳控制能力。紅外傳感器是通過一個光學(xué)傳感器來檢測二氧化碳水平的，不受溫度和相對濕度改變的影響

。IR系統(tǒng)包括一個紅外發(fā)射器和一個傳感器，當(dāng)箱體內(nèi)的二氧化碳吸收了發(fā)射器發(fā)射的部分紅外線之后，傳感器就可以檢測出紅外線的減少量，而被吸收紅外線的量正好對應(yīng)于箱體內(nèi)二氧化碳的水平，從而可以得出箱體內(nèi)二氧化碳的濃度。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)相對濕度控制系統(tǒng)：培養(yǎng)箱內(nèi)相對濕度的控制是非常重要的，飽和濕度環(huán)境可以避免培養(yǎng)液中二氧化碳逃逸，保持pH值穩(wěn)定，也能防止由于干燥使培養(yǎng)液中水分蒸發(fā)，滲透壓升高，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗。

大多數(shù)的二氧化碳培養(yǎng)箱是通過增濕盤的蒸發(fā)作用產(chǎn)生濕氣的，大型的二氧化碳培養(yǎng)箱是用蒸汽發(fā)生器或噴霧器來控制相對濕度水平的。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)微處理控制系統(tǒng)：

控制高溫自動調(diào)節(jié)和警報(bào)裝置、二氧化碳警報(bào)裝置、密碼保護(hù)設(shè)置、自動校準(zhǔn)系統(tǒng)等的運(yùn)用，就使得二氧化碳培養(yǎng)箱的操作和控制都非常的簡便。

二氧化碳培養(yǎng)箱控制中心細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)污染物的控制系統(tǒng)：污染是導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗的一個主要因素，因而，二氧化碳培養(yǎng)箱設(shè)計(jì)了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生，其主要途徑是在線式持續(xù)滅菌和不定期高溫滅菌。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)細(xì)胞培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)

內(nèi)門加熱系統(tǒng)：

這個系統(tǒng)能加熱內(nèi)門，有效防止內(nèi)門形成冷凝水，以保持培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度和溫度，降低污染。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的性能指標(biāo)細(xì)胞培養(yǎng)箱的性能指標(biāo)：溫度控制精度二氧化碳濃度控制精度及測量系統(tǒng)自動校準(zhǔn)功能濕度控制系統(tǒng)相對濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱的性能指標(biāo)溫度控制精度：多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)箱的溫度范圍為：環(huán)境溫度以上5℃到50℃，溫度控制精度為：±0.1℃。

二氧化碳濃度控制精度及測量系統(tǒng)自動校準(zhǔn)功能：二氧化碳?xì)怏w范圍為：0.2%～20%，二氧化碳?xì)怏w控制精度為：±0.1%，二氧化碳?xì)怏w穩(wěn)定性為：±0.2%，二氧化碳?xì)怏w均勻性為：±0.1%。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的性能指標(biāo)相對濕度：飽和濕度環(huán)境

細(xì)胞培養(yǎng)箱的濕度蒸發(fā)面積越大，越容易達(dá)到最大相對飽和濕度并且開關(guān)門后的濕度恢復(fù)的時間越短。

潔凈級別：常用HEPA過濾或高效紫外在線消毒腔體內(nèi)循環(huán)氣流，使培養(yǎng)箱腔體的潔凈度達(dá)到100級。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的使用注意事項(xiàng)初次使用二氧化碳培養(yǎng)箱一定要加充足的去離子水或蒸餾水，蓋上密封蓋，以減少水套內(nèi)水的蒸發(fā)。注意二氧化碳供氣必須用二氧化碳減壓閥減壓后輸出，且壓力維持在0.1MPa內(nèi)；首次使用及更換氣體后，打開鋼瓶氣體總閥前應(yīng)保證其處于關(guān)閉狀態(tài)防止氣體壓力過大，損毀儀器。當(dāng)環(huán)境溫度與設(shè)定溫度差小于5℃時，應(yīng)用空調(diào)降低周圍環(huán)境溫度，在培養(yǎng)的全過程中，應(yīng)保持環(huán)境溫度沒有明顯的變化。細(xì)胞培養(yǎng)箱的使用注意事項(xiàng)平時盡量避免箱門被頻繁打開，以免二氧化碳濃度、溫度和相對濕度發(fā)生很大的波動。保持細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)干凈，并定期消毒；保持箱內(nèi)相對濕度。日常保養(yǎng)：水套的水位、二氧化碳?xì)馄苛?、二氧化碳的供氣管道和接口有無漏氣現(xiàn)象、機(jī)器除塵等。細(xì)胞培養(yǎng)箱長時間不用時，應(yīng)關(guān)掉儀器，關(guān)機(jī)后將儀器內(nèi)殘留水抽出，清潔腔面，等培養(yǎng)箱干燥后再關(guān)門，防止儀器發(fā)霉

細(xì)胞培養(yǎng)箱的常見故障及排除

一直提示更換HEPA(highefficiancyparticulateaire)濾器（REPLHEPA），更換HEPA濾器后重新設(shè)定儀器二氧化碳濃度或溫度不準(zhǔn)：用溫度計(jì)或二氧化碳濃度檢測儀檢查培養(yǎng)箱，按實(shí)際測定值進(jìn)行校正。二氧化碳濃度或溫度不準(zhǔn)：用溫度計(jì)或二氧化碳濃度檢測儀檢查培養(yǎng)箱，按實(shí)際測定值進(jìn)行校正。

細(xì)胞培養(yǎng)箱的常見故障及排除培養(yǎng)箱有噪音：請客戶檢查是箱內(nèi)噪音還是箱外噪音。箱內(nèi)噪音一般是風(fēng)機(jī)軸承損壞，需更換風(fēng)機(jī)。箱外噪音一般是變壓器質(zhì)量問題。培養(yǎng)箱有漏氣聲：一般情況是使用者將二氧化碳壓力調(diào)得太高，將二氧化碳小濾器沖破。此時要求馬上關(guān)閉氣源，更換小濾器。培養(yǎng)箱不加熱，但HEAT燈亮：溫度探頭壞，需更換。細(xì)胞培養(yǎng)箱的常見故障及排除培養(yǎng)箱不加熱不進(jìn)氣，HEAT燈和INJECT燈不亮：門沒關(guān)好或玻璃內(nèi)門上旋鈕開關(guān)側(cè)邊的門扣上的小金屬彈片斷裂。高溫報(bào)警：檢查室內(nèi)溫度和風(fēng)機(jī)，如室內(nèi)溫度高于32℃，開啟空調(diào)；如室內(nèi)溫度低于32℃且風(fēng)機(jī)正常，那么是溫度探頭損壞。玻璃門上有水珠，其他正常：一般情況是將培養(yǎng)箱直接放在地上，或放在空調(diào)出風(fēng)口，如不存在上述情況，請檢查玻璃門上側(cè)的門加熱器黑色接頭是否接觸良好。三、厭氧培養(yǎng)箱厭氧菌必須在降低氧化還原電位的無氧環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法、氣袋法和厭氧培養(yǎng)箱法等。厭氧培養(yǎng)箱亦稱厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)（AnaerobicSystem），是目前國際上公認(rèn)的厭氧菌培養(yǎng)的最佳設(shè)備。

操作者可以通過培養(yǎng)箱前面附帶的橡膠手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作，使厭氧菌的接種、培養(yǎng)和鑒定等全部工作都在無氧的環(huán)境下進(jìn)行，因而提高了厭氧菌的陽性檢出率。厭氧培養(yǎng)箱三、厭氧培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)箱的厭氧狀態(tài)產(chǎn)生原理

厭氧培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)

厭氧培養(yǎng)箱的使用與注意事項(xiàng)

三、厭氧培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)箱的厭氧狀態(tài)產(chǎn)生原理通過催化除氧系統(tǒng)和自動連續(xù)循環(huán)換氣系統(tǒng)保持箱內(nèi)的厭氧狀態(tài)。自動連續(xù)循環(huán)換氣系統(tǒng)可以最大程度地減少氧氣含量。培養(yǎng)箱與真空泵相連，自動換氣功能可由按鈕控制，通過自動化裝置自動抽氣、換氣，使箱內(nèi)產(chǎn)生厭氧狀態(tài)。

自動連續(xù)循環(huán)換氣系統(tǒng)自動連續(xù)循環(huán)換氣系統(tǒng)催化除氧系統(tǒng)厭氧培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)

為密閉的大型金屬箱，由手套操作箱和傳遞箱兩個部分組成，操作箱內(nèi)還附有小型恒溫培養(yǎng)箱。緩沖室是一個傳遞艙，具有內(nèi)外兩個門。手套操作箱其前面裝有塑料手套，操作者雙手經(jīng)手套伸入箱內(nèi)操作，使操作箱與外界隔絕小型恒溫培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)箱的使用與注意事項(xiàng)

所有要轉(zhuǎn)移的物品被放入緩沖室后，關(guān)閉外門；按下“CycleStart”鈕即可進(jìn)行自動去除緩沖室中的氧氣。經(jīng)循環(huán)換氣的三個氣體排空階段和兩個氮?dú)鈨艋A段，使緩沖室氣體達(dá)98％的無氧狀態(tài)，再經(jīng)緩沖室氣壓平衡，操作箱與緩沖室平衡，厭氧狀態(tài)燈顯示為ON，此時即可將內(nèi)門打開，鈀催化劑將除去余下的少量O2。操作者經(jīng)手套伸入箱內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本接種、培養(yǎng)和鑒定等全部工作。厭氧培養(yǎng)箱的使用與注意事項(xiàng)三層催化劑片：第一層活性炭使用壽命僅為三個月，不可重復(fù)使用；鈀催化劑片使用壽命為兩年，每個星期需再生一次（方法是將其置于160℃標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)爐中烘烤兩個小時）；第三層干燥劑片使用壽命為兩年，每星期需再生兩次（將其置于160℃標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)爐中烘烤兩個小時）。第三節(jié)滅菌消毒一、滅菌的類型

濕熱滅菌是指用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法，由于蒸汽潛熱大，穿透力強(qiáng)，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固。

滅菌干熱滅菌濕熱滅菌干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。二、高壓蒸汽滅菌鍋的工作原理高壓蒸汽滅菌的原理：基于水在煮沸時所形成的蒸汽不能擴(kuò)散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密閉的情況下，隨著水的煮沸，蒸汽壓力升高，溫度也相應(yīng)增高。壓力：100KPa，水蒸氣的溫度：115℃，時間：20min，可殺死各種微生物和它們的孢子壓力：147KPa，水蒸氣的溫度：121℃，時間：15～30min，各種微生物和它們的孢子或芽孢壓力：156KPa，水蒸氣的溫度：180℃，時間：4h，熱原質(zhì)（Pyrogen）:熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖壓力：156KPa，水蒸氣的溫度：250℃，時間：45'，熱原質(zhì)（Pyrogen）:熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖壓力：156KPa，水蒸氣的溫度：650℃，時間：1'，熱原質(zhì)（Pyrogen）:熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖溫度越高，需時越短，熱穿透能力越強(qiáng)。一般認(rèn)定115℃-121.3℃，對培養(yǎng)基的成分不產(chǎn)生破壞。三、儀器的正面結(jié)構(gòu)控制面板上溫度壓力表控制面板上溫控顯示儀控制面板上電源開關(guān)欠壓蜂鳴器排氣閥、安全閥排氣、排水閥四、使用方法開蓋向右轉(zhuǎn)動手輪數(shù)圈，直至轉(zhuǎn)到頂，使蓋充分提起，拉起左立柱上的保險(xiǎn)銷，推開橫梁移開鍋蓋2.通電接通電源，將控制面板上的電源開關(guān)按至ON處，此時欠壓蜂鳴器響，顯示本機(jī)鍋內(nèi)無壓力，（當(dāng)鍋內(nèi)壓力升至0.03MPa時，蜂鳴器自動關(guān)閉），控制面板上缺水位和低水位均亮3.加水將純水直接注入鍋內(nèi)約8升，觀察控制面板上的高水位燈，亮?xí)r方可停止加水，當(dāng)水過多應(yīng)開啟下排水閥放去多余水4.放需滅菌的物品把裝有生理鹽水的三角瓶放在滅菌筐內(nèi)，應(yīng)留有一定間隙，這樣有利于蒸汽穿透，提高滅菌效果5.蓋上鍋蓋將手輪向左旋轉(zhuǎn)數(shù)圈，使鍋蓋向下壓緊鍋體，以確保密封開關(guān)處處于接通狀態(tài)。當(dāng)連鎖燈亮?xí)r，顯示容器密封到位6.設(shè)定溫度和時間按一下確認(rèn)鍵，按動增加鍵，將溫度設(shè)定在121度，再按動一下確認(rèn)鍵，按動增加鍵,設(shè)定時間為20分鐘，最后再按確認(rèn)鍵，溫度和時間設(shè)定完畢7.滅菌第六步結(jié)束