第一章革蘭氏陽性球菌

第二篇細菌學各論夏春教授當前第1頁\共有40頁\編于星期五\21點陸承平主編當前第2頁\共有40頁\編于星期五\21點嗜水氣單胞菌研究豬鏈球菌當前第3頁\共有40頁\編于星期五\21點自我介紹教授、博士、碩士生共25名。（已畢業(yè)研究生12人）當前第4頁\共有40頁\編于星期五\21點主要研究1主要組織相容性復(fù)合體I3動物基因工程干擾素4疾病診斷與防治技術(shù)基礎(chǔ)研究應(yīng)用基礎(chǔ)2功能基因的克隆與鑒定(MHCI)（結(jié)合我國養(yǎng)殖業(yè)需要的應(yīng)用基礎(chǔ)）當前第5頁\共有40頁\編于星期五\21點策略連續(xù)性獨立性科、屬、種的特性重要致病性細菌：

培養(yǎng)特性、致病機制及診斷方法

鑒別診斷致病菌融會貫通、舉一反三當前第6頁\共有40頁\編于星期五\21點第一章革蘭氏陽性球菌微球菌科鏈球菌科消化菌科微球菌科葡萄球菌、鏈球菌科鏈球菌引起化膿性炎癥。當前第7頁\共有40頁\編于星期五\21點在公共衛(wèi)生及獸醫(yī)臨床上具有重要意義。當前第8頁\共有40頁\編于星期五\21點第一節(jié)葡萄球菌屬

（Staphylococcus）廣泛存在于自然界、空氣、水、土壤、人及動物體表、天然孔道等多數(shù)是不致病的腐物寄生菌。葡萄球菌能引起皮膚黏膜、多種組織器官的化膿性炎癥，是最常見的化膿性球菌，還可引起敗血癥，有的可引起食物中毒、毒性休克綜合征等疾病。當前第9頁\共有40頁\編于星期五\21點一、生物學性狀（一）形態(tài)與染色1，球形或略呈橢圓形，直徑0.5-1.2μm,平均0.8μm2，典型的排列呈葡萄串狀，在膿汁或液體培養(yǎng)基中生常呈雙球或短鏈狀3，無鞭毛、無芽胞，幼齡培養(yǎng)物可見莢膜，革蘭氏染色陽性。4，青霉素等藥物的影響下可誘導(dǎo)成L型。當前第10頁\共有40頁\編于星期五\21點1，營養(yǎng)要求不高，在普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基上生長良好。2，兼性厭氧或需氧。3，最適生長溫度為37℃，pH為7.44，肉湯培養(yǎng)基37℃，24h呈均勻混濁生長，管底稍有沉淀。5，普通瓊脂平板上形成圓形、隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、不透明菌落，直徑1-2mm。菌落起初呈白色，隨后因種不同發(fā)展成金黃色、白色或檸檬色。6，部分菌株形成β溶血.（二）培養(yǎng)特性當前第11頁\共有40頁\編于星期五\21點觸酶陽性、多數(shù)菌株能分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。致病菌株能分解甘露醇。(三)生化反應(yīng)當前第12頁\共有40頁\編于星期五\21點1,葡萄球菌A蛋白(SPA)存在于細菌細胞壁的一種表面蛋白，90%以上的金黃色葡萄球菌菌株有此抗原。SPA是一種單鏈多肽，與胞壁肽聚糖共價結(jié)合.可與人、豚鼠、小鼠、犬、豬、貂等多種哺乳動物的IgGFc片段結(jié)合。2,多糖抗原

具有型特異性，存在于細胞壁。（四）抗原結(jié)構(gòu)當前第13頁\共有40頁\編于星期五\21點根據(jù)色素、生化反應(yīng)等不同，分為金黃色葡萄球菌(S.aureus)表皮葡萄球菌(S.epidermidis)腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)（五）分類與分型當前第14頁\共有40頁\編于星期五\21點分類─────────────────────────────────主要性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生性葡萄球菌─────────────────────────────────菌落色素金黃色白色白色或檸檬色血漿凝固酶+--甘露醇發(fā)酵+--溶血素+--耐熱核酸酶活性+--磷壁酸核糖醇型+-（甘油型）+（兼有）磷壁酸甘油型-++嗜菌體分型多數(shù)能不能不能蛋白A（SPA）+--致病性強弱或無無─────────────────────────────────當前第15頁\共有40頁\編于星期五\21點凝固酶陽性菌株凝固酶陽性菌株3，分型（1）血清學分型玻片凝集4個組，30多個亞型（2）嗜菌體分型2，根據(jù)有無凝固酶當前第16頁\共有40頁\編于星期五\21點二、致病性葡萄球菌的毒力因子包括毒素、酶和莢膜、胞壁肽聚糖等。

1.葡萄球菌溶血素(staphylolysin)主要是α溶血素一種異質(zhì)性蛋白質(zhì)，不耐熱，生物學活性廣泛，對多種哺乳動物紅細胞有溶血作用。對白細胞、血小板、肝細胞、成纖維細胞、血管平滑肌細胞等均有損傷作用。α溶血素是一種外毒素，具有良好的抗原性，經(jīng)甲醛脫毒后可制成類毒素。2.殺白細胞素(leukocidin)稱為Panton—Valentine(PV)殺白細胞素，只攻擊中性粒細胞和巨噬細胞。當前第17頁\共有40頁\編于星期五\21點3.腸毒素(enterotoxin)按抗原性不同，分為A、B、C1、C2、C3、D、E和F8個血清型。除F型現(xiàn)改名為TSST-1，可引起TSS外，均可引起急性胃腸炎即嘔吐為主要癥狀的食物中毒。4.表皮剝脫毒素(efoliativetoxin,exfoliatin),引起剝脫性皮炎。具有抗原性，可被甲醛脫毒成類毒素。有A、B兩個血清型。5.毒素休克綜合征毒素-1（TSST-1）6.凝固酶：血漿蛋白凝固7.溶纖維蛋白溶酶、耐熱核酸酶、透明質(zhì)酸酶、脂酶等.當前第18頁\共有40頁\編于星期五\21點1.標本的采集

不同病型采取不同的標本?；撔圆≡畈扇∧撝B出液，敗血癥采取血液，腦膜炎采取腦脊液；食物中毒則分別采集剩余的食物、嘔吐物和糞便。2.直接涂片檢查3.分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)、普通平板培養(yǎng)、血液瓊脂平板、高鹽甘露醇培養(yǎng)基4.鑒定

致病性葡萄球菌的鑒定主要根據(jù)產(chǎn)生凝固酶和耐熱核酸酶；產(chǎn)生金黃色色素，有溶血性和發(fā)酵甘露醇也是致病株的參考指標。四、微生物學檢查法當前第19頁\共有40頁\編于星期五\21點葡萄球菌腸毒素的檢查

嘔吐物、糞便或剩余食物作細菌分離鑒定的同時，接種至肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)后取濾液注射至6-8周齡的幼貓。若在注射后4小時內(nèi)發(fā)生嘔吐、腹瀉、體溫升高或死亡等現(xiàn)象者，提示有毒素存在的可能。免疫學方法檢測葡萄球菌腸毒素，ELISA法可檢出ng水平。DNA基因探針檢測是否為產(chǎn)腸毒素菌株。

當前第20頁\共有40頁\編于星期五\21點第二節(jié)鏈球菌屬(streptococcus)

一、生物學性狀1.形態(tài)與染色球形或卵圓形，直徑0.6-1.0um。呈鏈狀排列，鏈長短不一。無芽胞、無鞭毛。當前第21頁\共有40頁\編于星期五\21點2，培養(yǎng)特性大多數(shù)兼性厭氧，少數(shù)為專性厭氧。營養(yǎng)要求復(fù)雜，普通培養(yǎng)基上生長不良，需補充血液、血清、葡萄糖等。在血清肉湯中易形成長鏈，管底呈絮狀沉淀。在血液瓊脂平板上形成灰白色、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細小菌落。不同菌株溶血不一。

當前第22頁\共有40頁\編于星期五\21點3.生化反應(yīng)

分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。有些鏈球菌可耐受65g/L的NaCl和膽汁。當前第23頁\共有40頁\編于星期五\21點4.抗原結(jié)構(gòu)

主要有3種核蛋白抗原（P抗原）

無特異性、各種鏈球菌均相同，并與葡萄球菌有交叉。多糖抗原

(C抗原)

群特異性抗原，是細胞壁的多糖組分蛋白抗原表面抗原

主要為M蛋白，具有型特異性，抗吞嗜。

當前第24頁\共有40頁\編于星期五\21點5.分類

最為常用的兩種分類方法：1根據(jù)溶血現(xiàn)象分類⑴甲型溶血性鏈球菌菌落周圍有1-2mm寬的草綠色溶血環(huán)，稱甲型溶血或α溶血。這類鏈球菌多為條件性致病菌。⑵乙型溶血性鏈球菌菌落周圍形成一個2-4mm寬、界限分明、完全透明的無色的溶血環(huán)，稱為乙型溶血或β型溶血。這類鏈球菌的致病力強。⑶丙型鏈球菌不產(chǎn)生溶血素，菌落周圍無溶血環(huán)，也稱為不溶血性鏈球菌。無致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾引起感染。當前第25頁\共有40頁\編于星期五\21點2根據(jù)抗原構(gòu)造的分類

按鏈球菌細胞壁中多糖抗原（C多糖）不同，根據(jù)蘭氏(Lancefield)血清學分類，可分為A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、Ｔ、Ｕ、Ｖ共20個血清群。因表面蛋白質(zhì)抗原不同，有分若干個型。蘭氏(Lancefield)分類當前第26頁\共有40頁\編于星期五\21點當前第27頁\共有40頁\編于星期五\21點二、致病性

1.致病物質(zhì)

溶血素胞壁脂磷壁酸（LTA）,纖維粘連蛋白結(jié)合蛋白(FBR)與生物膜具有高度的親和力，是該菌能定居在機體皮膚和呼吸道黏膜等表面的主要侵襲因素。M蛋白侵入機體后M蛋白的抗吞噬作用非常重要。一旦病菌大量繁殖則產(chǎn)生溶血素、致熱外毒素等毒性物質(zhì)透明質(zhì)酸酶、鏈激酶、鏈道酶等侵襲性物質(zhì).當前第28頁\共有40頁\編于星期五\21點2.致病

無乳鏈球菌（S.agalactiae）停乳鏈球菌(S.dysgalactiae)乳房鏈球菌(S.uberis)馬腺疫鏈球菌(Streptococcusequi)獸疫鏈球菌(S.zooepidemicus)豬鏈球菌(S.suis)化膿鏈球菌(S.pyogenes)肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)當前第29頁\共有40頁\編于星期五\21點致乳房炎的鏈球菌無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌：三種鏈球菌是牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎的病原菌之一，其中最常見的是無乳鏈球菌。鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌當前第30頁\共有40頁\編于星期五\21點

馬鏈球菌獸疫亞種（舊稱獸疫鏈球菌）：可致多種家畜的炎癥及敗血病，包括馬的創(chuàng)傷感染、敗血癥、子宮炎、流產(chǎn)、功駒臍帶炎；牛乳腺炎、子宮炎；豬敗血癥、關(guān)節(jié)炎；羊敗血癥、心包炎、胸膜炎、肺炎；雞敗血癥等。

馬鏈球菌馬亞種（舊稱馬腺疫鏈球菌）：是引起馬腺疫的病原體。感染馬下頜淋巴結(jié)形成膿灶。

肺炎鏈球菌(又名肺炎球菌、肺炎雙球菌)：常引起人大葉性肺炎或腦膜炎，亦可致幼畜肺炎或敗血癥。當前第31頁\共有40頁\編于星期五\21點三、微生物學診斷標本的采集根據(jù)臨床疾病類型的不同，采集適當?shù)臉吮尽?/p>

當前第32頁\共有40頁\編于星期五\21點2，檢驗方法

膿汁、咽拭或炎性分泌物⑴直接涂片，革蘭氏染色鏡檢。免疫熒光。⑵分離培養(yǎng)在涂片前先接種2份血平板，分別做需氧和厭氧培養(yǎng)，37％℃24-48小時觀察菌落形態(tài)和溶血情況。然后涂片染色鏡檢。（不能在麥康凱平板上生長）⑶生化特性糖類分解試驗在本屬細菌中鑒別價值不大，可供參考。當前第33頁\共有40頁\編于星期五\21點⑷鑒定試驗為進一步檢查鏈球菌有無致病性可做下列鑒定試驗鏈激酶試驗A群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶，激活血液中血漿素原使其變成血漿素，血漿素可溶解纖維蛋白，對測定鏈球菌的致病性有一定的意義。一般血漿溶解時間越短，則該菌產(chǎn)生的鏈激酶越多。馬尿酸鈉水解試驗B群溶血性鏈球菌有馬尿酸水解酶。牛乳美藍試驗鹽耐、受試驗桿菌肽敏感試驗七葉苷分解試驗cAMP試驗SXT敏感試驗沉淀試驗?zāi)懼芙庠囼灐⒕仗前l(fā)酵試驗及optochin試驗當前第34頁\共有40頁\編于星期五\21點血液標本取血液分別接種硫酸鎂肉湯做需氧培養(yǎng)或庖肉培養(yǎng)基中厭氧培養(yǎng)。經(jīng)過37℃24小時或72小時培養(yǎng)，β-溶血性鏈球菌呈沉淀生長，且有自下而上的溶血；α-溶血性鏈球菌呈草綠色熒光；糞鏈球菌呈渾濁生長，厭氧鏈球菌在庖肉培養(yǎng)基內(nèi)生長。挑取肉湯培養(yǎng)物作涂片檢查，并轉(zhuǎn)移至血液平板上培養(yǎng)，做鑒定試驗。熒光抗體快速診斷鏈球菌當前第35頁\共有40頁\編于星期五\21點免疫防治

不同型之間的交叉保護力很弱或者沒有。

豬、羊鏈球菌疫苗當前第36頁\共有40頁\編于星期五\21點豬鏈球菌形態(tài):直徑1~2um單個或雙個培養(yǎng):α或β溶血