中藥復(fù)方室細(xì)胞與分子實驗操作指南

中藥復(fù)方研究室細(xì)胞與分子實驗操作指南（2023.9）侄目帝圍錄TOC\o"1-2"\u漁第一縱章捷細(xì)胞睛實驗撥操作寒吸取炎的液癢體不鍛宜過歲多直，牢否則尖計數(shù)悉不準(zhǔn)掠，磚要靠差蓋玻外片下勞毛細(xì)雖管作證用將棗液體鴨填充朱到小桃室中菜。暴細(xì)胞依一定紐要吹頃打均趨勻后算才可臘計宜數(shù)。懸3滲.渾悼試劑揀的配殊制：請膀4經(jīng)％臺迎盼藍(lán)汁母液糖：攀稱取港4芹克續(xù)臺盼迎藍(lán)，喪加入共少量總蒸餾榜水研腐磨，誠加雙真蒸水狂至免10俱0管毫升綢，用從濾紙齡過濾叢，階4推℃等保存鏡。佳使用潮液：綱使用濟(jì)時，盯用P槍BS暢稀釋核母液京至0忙.4旗％即早可?？?xì)胞因復(fù)蘇蠢與凍以存桑細(xì)胞貓復(fù)蘇津（快暑速復(fù)仆蘇）掀取一植25濕0m乘l燒致杯臂或一折廢液勒缸辯裝上惜38騾~哄39收℃息溫水裂；花從頸-7例0坦℃揀或液孩氮罐明中迅鐵速取站出所弊需細(xì)燥胞紋凍存果管帳，放睜入溫竟水中紗，快漏速搖歌晃，授使其蒼盡可輔能快譽(yù)的融委化（傅最好鐮控制通在致1m以in爆左右遣）史；初完全姿融化助后，振立即裝從水鋤中取喇出，士10而00貴rp跌m，伙離心蹦5m砍in赤；還凍存荒管外尚面用踏75斥%酒供精噴姑灑并獲擦拭嫌，移墓至超掩凈臺畝中煮；癥在片酒精朝燈火勸焰上四灼燒盲后，些小心偽揭掉須凍存柔管上嗚的膠載布但，獅將凍聯(lián)存管舞中上墳清液夕倒掉冒，加當(dāng)入培嚷養(yǎng)基順，輕娛輕吹鞏打；胖再將堤細(xì)胞孤懸液善轉(zhuǎn)移納至培托養(yǎng)瓶蛾中，意加入扎充足挑的培壽養(yǎng)基源，吹仔打均雁勻，粉孵箱摸培養(yǎng)饒。朽細(xì)胞護(hù)凍存童（慢宋凍哪4幕℃餓冰礦箱3冰0m購in暴，罷-2膜0碎℃霧放置取2h松，眠-7肌0皇℃疏存放軋）而取奮對數(shù)革生長鑰期的染細(xì)胞袋（細(xì)悅胞密缸度約蚊為9劈0%報左右磁）表，用將PB聚S清殃洗一惱遍瘦，霞加入挨消化胸液，算消化林，異含血幫清培使養(yǎng)基娛終止更消化打后，振離心五。糟在超淡凈臺撞中，憤倒掉踢上清撿液，挽加入毅凍存訂液（灘培養(yǎng)際基：獄血清斯：D載MS飽O=令7:注2:講1）廚，拉吹打驗均勻轎，將剝細(xì)胞駐懸液踩轉(zhuǎn)移容至凍敗存管穴中（敲體積御不宜播過滿汽）賽。斯用膠戶布封變好凍耳存管首接口睡處偽，在蠅凍存佩管中姨表明貼細(xì)胞忠名稱搏、細(xì)退胞代呢數(shù)、鉆凍存加日期升、操宏作人基名字悲。伯將如凍存裙管撤放乒入湯4依℃故冰箱魚30楊mi豪n沿，再狀轉(zhuǎn)移叫至矛-2需0叫℃檢，放舟置言2h毒，最謀后轉(zhuǎn)云移至嫁-7普0佩℃依存放首（有見條件插的話胳，在三-7來0吊℃頸過夜港后，旁可將轉(zhuǎn)細(xì)胞顫轉(zhuǎn)移驅(qū)至液伸氮中織長期走保存黃）。娃也可嶄將凍姓存管匙用棉澤花包爪裹后理，直斬接放牌入肉-7顆0王℃比。總骨之，社凍存則時掌段握一準(zhǔn)個原舅則，罷慢凍賺（賤降溫動速度野為殖1煉～德3款℃爪/m避in始）忠。坡MT愁T法巾測定纏細(xì)胞袋活力傅或細(xì)境胞增握殖種MT魯T儲示存液鑼：孝用宇PB豈S配桂置所5m廟g/扔ml道M雹TT陪，0笨.2盤2你μ靈m濾貞膜過壁濾除顫菌后要，襪4拳℃鑼保存文。柱MT膀T工撈作液沙：迷用無聲血清隆培養(yǎng)材基按摘照1沖：1邀0稀非釋后嶺使用案。勤操作今流程飽：宅去除板或不捉去除隊原培皇養(yǎng)液病黑哄壤按照默1：尾10帥的比秋例加摩入M葬TT何(如誼90干μ縱L培鴨養(yǎng)基洲，1我0攪μ亞LM僵TT腳)睜前兔在倡培養(yǎng)促箱中卸孵育烘1-潤4小暈時（忘視細(xì)隱胞類嫁型及或密度凳而定導(dǎo)）詠塵隨去除圾染色巷液痛棋陳加瓶入1模00咬或1毯50叫μ拍L輩DM倘SO苗顏窩真振蕩露器振溫蕩1軌0m癢in弦使結(jié)總晶溶頂解滲叮塞核炭酶寺標(biāo)儀培檢測拐注意毒事項襪：慎MT報T的巧檢測銜波長歌有息單波聞長4興90載，5價70衰或很雙波俗長5辰70述-6留50較等，腔如選鼠擇單避波長壤則最鐘好市提前舊對本惹底進(jìn)告行掃社描擦；歪如所厭測細(xì)碰胞為待懸浮姨細(xì)胞曾或貼右壁不番牢，華則應(yīng)與離心遠(yuǎn)（1煩00訊0r覆pm阻,夏1飾0-躲2三0m丈in偵）后子再去糠除染仿色液齡，加打入D毒MS姻O;液加入很DM復(fù)SO槐振蕩拆后，部請及駛時測醉定，舒否則神顏色政會越桐來越跨深，夕影響為測定板結(jié)果弱。餃第二潔章辭分子磨實驗提操作咱PC叮R引幻物設(shè)予計與急實驗含操作狡引物圓設(shè)計鑄PC科R鮮引物屢設(shè)計芹的榴目的咳是為滴了超找到悼一對喇合適右的核恐苷酸資片段訊，使贊其能律有效慎地擴(kuò)須增模晨板管DN淺A曉序列竊。因徒此，氧引物油的優(yōu)腦劣直匙接關(guān)床系到塞PC執(zhí)R護(hù)的特爽異性盜與成捐功與芹否。叼要設(shè)王計引薪物首吼先要零找到綁DN就A份序列趁的保棉守區(qū)灰。同樣時應(yīng)縱預(yù)測賽將要鎮(zhèn)擴(kuò)增鬼的片等段單蔬鏈?zhǔn)怯X否形功成二休級結(jié)疑構(gòu)。吵如這傻個區(qū)鹿域單鋒鏈能招形成壺二級囑結(jié)構(gòu)寒，就巖要避惹開它梅。如沃這一墊段不想能形山成二亭級結(jié)跟構(gòu)，趣那就課可以輛在這姻一區(qū)勤域設(shè)社計引制物。斧現(xiàn)在怎可以吊在這斑一保狹守區(qū)舌域里拌設(shè)計帆一對考引物用。一砍般嗚引物獲長度糾為殘15說~3蜜0朱堿基芹，傾擴(kuò)增劣片段爭長度象為瞎10鉗0~容60憶0往堿基辱對吧。偷引物景確定送以后窗，可尼以對泉引物餡進(jìn)行勸必要鬧的修負(fù)飾珠，例鐵如娘可以歐在引迷物的黃5′撤端加石酶切陵位點神序列腥；標(biāo)軋記生瘦物素饒、熒免光素片、地技高辛趁等，糧這對貍擴(kuò)增吊的特投異性您影響問不大駁。但鑼3望’含端絕或?qū)Σ唤B能進(jìn)役行任險何修考飾，與因為敗引物賞的延辰伸是鋒從裕3′肉端開滔始的六。這城里還權(quán)需提唱醒的車是球3′佛端不司要終巷止于精密碼嚼子的秘第聞3劉位，膀因為券密碼誓子第先3稈位易遍發(fā)生登簡并共，會召影響能擴(kuò)增晃的特它異性秧與效葡率。術(shù)綜上緣所述帝可以陣歸納柴十條軋PC秀R含引物群的抗設(shè)計注原則前：?、龠|引物盆應(yīng)用德核酸具系列月保守拐區(qū)內(nèi)返設(shè)計續(xù)并具偶有特窄異性今。艱②膀產(chǎn)物唱不能內(nèi)形成溫二級桿結(jié)構(gòu)餐。惜③草引物駐長度球一般會在茶15列~3嶺0昆堿基奪之間螺。界④親G謠+C粘含量夕在刻40果%~蘭60犁%叨之間虹。素⑤診堿基馬要隨禍機(jī)分括布。譯⑥萌引物端自身槐不能仔有連余續(xù)鼠4長個堿居基的手互補(bǔ)裹。鑒⑦慢引物五之間友不能壩有連慎續(xù)筆4資個堿處基的紗互補(bǔ)框。纏⑧另引物懂5′云端可紹以修跨飾。簡⑨寒引物奔3′鴨端不菊可修狹飾。朗⑩會引物瑞3′蹲端要壇避開禁密碼潑子的凡第涼3兩位。污引物月設(shè)計兵一般罩可以鍵先參千考文接獻(xiàn)中因的。都如果舞根據(jù)保文獻(xiàn)程中的車引物騾及條底件擴(kuò)夫增不螞出來色，再作自行栽設(shè)計旺，首允先引網(wǎng)物的烤全序尤列可畫以從恒Pu較b范me壞d網(wǎng)匙站丘上獲屯得，焦再利賢用軟牲件P唉ri露me楚r屆5.清0，霉參照代上述時設(shè)計腎原則闖，進(jìn)決行設(shè)歌計，弓設(shè)計繁好的份引物以再到航Pu龜bm燥ed恨網(wǎng)站恨上利楚用B罪L(fēng)A漁ST練進(jìn)行駕驗證立。連準(zhǔn)備危工作昌試劑渾配制誦1語‰渡DE敞PC燙水的宅配制艷：1籃00釣0m炮l去儲離子船水中擇加入妄1m盟lD頭EP魚C，吸靜放相使其爛完全縫溶解米，室癥溫保董存。唇如果投用于廈RN注A稀令釋或真逆轉(zhuǎn)疫錄實控驗，仰1負(fù)‰眠DE友PC仗水應(yīng)眼高壓丟滅菌富，爬4詢℃浪保存蔬。屬75襯%乙竹醇溶藏液（青RN萬A提采取時緩現(xiàn)配狡）嘗：7紡.5恥ml趣無水鄉(xiāng)乙醇念+2惹.5霉ml通1呼‰異DE屢PC怨水。絕50監(jiān)×謙電泳母緩沖貢液（燥TA碗E）項：尺先配灣制0鴨.5折mo考l/自L，圣pH灣8.拋0的高ED吸TA相溶液惑：將膏37游.2欄g和E撥DT泄A課-N臣a昏2騙加虹入1酒60鋤ml笨蒸餾耍水中韻，折攪拌堅。用葬Na純OH遇調(diào)節(jié)冊溶液歲至8犁.0確，再傭用蒸教餾水夜定容席至2斥00翠ml景。哀再配穿制5闊0?！令漈A賭E溶并液：夾在4桌00輔ml渠蒸餾協(xié)水中脈溶解英12尸1g跟Tr貫is掏堿，陡加入到28辦.嚼5峰5m脆l(xiāng)冰魂醋酸凡和5血0m玩l我0.衫5m遮ol庫/L脫E劍DT堂A他溶液押，最撇后用輩蒸餾機(jī)水定涉容至拍50擱0m爹l，賓室溫洲存放倍。簽瓊脂股糖溶抬液：蛛瓊脂阻糖凝己膠可詠以灌臣制成臺不同艇大小材和孔洽徑。柴凝膠躁的濃委度與舊被分趙離的昨DN討A片挨段成際反比傭，凝期膠的夫濃度瓦越低掏，能特被分解離的親DN態(tài)A就跌越大興。怕PC粱R產(chǎn)鍬物大藝小與爛電泳味分析讓中瓊郵脂糖紅濃度越產(chǎn)物痛大小禽/飛Kb背瓊脂云糖濃守度/夜%粉5懇~林60內(nèi)0.鎖3寄1需~躬20仰0.鎖6賤0.巷8劃~診10利0.避7揮0.茶5胳~犁7六0.米9啊0.漿9蛇~勞6側(cè)1.出2垮0.旬2籍~杜3棄1.億5慶0.秧1蹤~額2徒2.會0青瓊脂創(chuàng)糖溶凈液的林配制柴（2怕%）極：取共1g夸瓊脂員糖，殲倒入露錐形院瓶中脾，加回入5犯0m裹l株1璃×割TA缺E緩截沖液事，電剃爐或評微波靠爐中村煮至所沸騰轎。待灑融化兔的瓊嚴(yán)脂糖邀溶也影稍微叔冷卻雅，加英入E曲B溶耍液，腫充分術(shù)混勻躲。將卻熱的錯凝膠路液倒艇入已繼放置崖好梳掙子的漠電泳項板中種，室澆溫放席置3貸0m襪in稼左右猛后進(jìn)品行電雙泳。稻加樣羅緩沖儲液（同6皆×府Lo此ad糟in衡g單Bu迷ff離er楊）：走具體錫可參趴照《桿分子應(yīng)克隆奉》書恨上。妻0.類25償%溴蝦酚藍(lán)打+4阻0%嫁（m蘭/V際）蔗悄糖溶宣液。充實驗扔器具桌的處傘理與壓準(zhǔn)備動塑料籠制品熔（土槍頭隔，e舒pp唱en觸do哄rf渴管態(tài)，叼PC賞R薄專壁罵管鉗）：狠將塑疫料制證品逐俘個浸膊泡于銳1效‰遵DE富PC兼水中錘（必早要時俯小槍哲頭需細(xì)要用冊吸管律等工撈具打決入D嬌EP撓C水軍），刻浸泡霧過夜欠，然技后撈符出，稈高壓走滅菌素，昆80悅℃酷烘箱滋中烘狡干，稿試驗奉時再描將槍軌頭放確入槍剃頭盒偽。行玻璃踏制品置洗凈撿后泡退酸過棄夜，疊自來豬水、足蒸餾彩水及略雙蒸惹水洗握凈后貢，在熄1炮‰貢DE壯PC趕水中鉗浸泡器過夜盤，烘貌干后現(xiàn)，用扔錫箔醋紙包高裹，寧18或0繡℃障烘烤蝦8h接。炭金屬繼制品苗洗凈策后，論錫箔擦紙包臨裹，白18話0慮℃代烘烤重8h服。粗RN撿A提燥取舊(參抱照T忠RI媽zo諸l園試劑摧盒)犧細(xì)胞組（決1×喜10靜7備）吩加入幫TR秒Iz炊ol尚1陣ml晚室溫未靜置士5m篩in依，轉(zhuǎn)躺移到真1.桿5m輕l型的遇ep恥pe品nd奶or樣f還管中半加入微氯仿順20把0μ蜻l拍用力確振搖腦15角s罵，室穗溫放宜置押2?！?m淹in撕4?！婷?，議12險00這0r淘pm蜂，丘15帥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