吲哚喹啉生物堿衍生物與DNA作用

吲哚喹啉生物堿衍生物與DNA作用研究盧宇靖古練權(quán)**基金項(xiàng)目中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院第三屆創(chuàng)新化學(xué)實(shí)驗(yàn)基金項(xiàng)目（批準(zhǔn)號(hào)：02023）資助第一作者盧宇靖（1980年出生），男，中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院應(yīng)用化學(xué)專業(yè)99級(jí)指導(dǎo)教師古練權(quán)Email：cesglq@zsulink.zsu.edu中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，廣州510275摘要通過紫外可見光譜研究了一系列新型的吲哚喹啉生物堿衍生物與DNA的作用方式，表明了該化合物與DNA具有良好的嵌入作用，為該類化合物具有良好的抗腫瘤效果提供了可能的作用機(jī)理。關(guān)鍵詞吲哚喹啉生物堿衍生物DNA作用機(jī)制嵌入作用抗癌藥吲哚喹啉生物堿是自然界比較稀少的生物堿，而quindoline和Cryptolepine(圖1)是這一家族的最好代表，這兩個(gè)化合物分別在1977年和1929年從西非的植物Cryptolepissanguinolenta中分離出來[1]。吲哚喹啉生物堿具有廣泛的生理特性，包括hypotensive、antipyretic、antimuscarinic、antibacterial、antiviral、antihyperglycemic等等[2]。研究表明Cryptolepine是一種有效的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，能夠抑制B16黑素瘤的DNA合成[3]。圖12002年JohnN.lisgarten應(yīng)用單精衍射法研究了Cryptolepine與DNA片斷d(CCTAGG)2的作用，發(fā)現(xiàn)Cryptolepine以π-π堆積方式嵌入到片斷的嘧啶堿基之間，這是第一個(gè)小分子與DNA嘧啶-嘧啶不變序列嵌入作用的單晶結(jié)構(gòu)[3]。臨床使用的許多抗癌藥物如阿霉素都是與DNA有較強(qiáng)的嵌入作用[4]。這類DNA嵌入劑抗癌藥物能夠牢固地，又可逆地嵌入DNA雙螺旋，但它們對結(jié)構(gòu)有特定的要求，具有一些共同的結(jié)構(gòu)特征。首先，它們都具有一組或多組非簇狀線性稠和芳環(huán)（不少于3）。小分子的發(fā)色團(tuán)就有足夠的面積進(jìn)行嵌插結(jié)合，而且要求稠環(huán)呈平面，易于插入DNA堿基對。但這不能產(chǎn)生充分有效的抗癌活性，即使它具有嵌入作用的能力。如果想有良好的抗癌活性，在小分子發(fā)色團(tuán)的適當(dāng)位置連上一條（或幾條）側(cè)鏈?zhǔn)呛鼙匾模覀?cè)鏈上能夠形成正電荷中心；而對正電荷中心的距離、位置和pKa值也有嚴(yán)格的要求[5]。因?yàn)閹д姾傻膫?cè)鏈從DNA的溝槽接近DNA，剛好能與呈電負(fù)性的DNA磷酸骨架通過靜電作用。對于中性發(fā)色團(tuán)的小分子，一般有一條（或幾條）帶正電荷的側(cè)鏈[6]；如果發(fā)色團(tuán)本身帶正電荷，一般帶一條（或幾條）位阻較大的側(cè)鏈（EB，amsacrine）?？梢酝茰y，這些側(cè)鏈對DNA和藥物的復(fù)合物有額外的穩(wěn)定作用，同時(shí)影響藥物與DNA結(jié)合的動(dòng)力學(xué)過程[7]。我們根據(jù)上面的理論，以吲哚喹啉生物堿為母體合成了一系列的吲哚喹啉生物堿衍生物，并系統(tǒng)研究了化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ與DNA的相互作用（圖2）。圖2嘆1鑼實(shí)驗(yàn)冒部分嫂1.漢1試補(bǔ)劑與優(yōu)儀器筋吲哚此喹啉罩生物賢堿衍墊生物阿化合譯物是屯根據(jù)捧本實(shí)幅驗(yàn)室紋的合籮成方頂法合孕成的輩，均倆通過穴NM隆R、巧IR遺、F模AB優(yōu)質(zhì)譜抓表征顛，合宿成的覆化合襖物都駁是色巾譜純堤的。舞小牛炮胸腺扎DN舊A碼是S撒ig干ma吉化學(xué)拔公司怨的產(chǎn)赴品，敞其它依試劑艘均為閥分析密純，襲是廣險(xiǎn)州試冬劑一邪廠的劈產(chǎn)品玩。償紫外戚可見碼吸收北光譜仔是在刻UV祝-2呈50么1P贈(zèng)C丘型紫執(zhí)外光扮譜儀外上測謎定的蒼；溶丟液p待H值己由O絨ri拼on競M路od抓el深7費(fèi)20干A距pH巾計(jì)所雁確定厭，所戲用的服溶液揀為雙葉蒸水折。工1.敗2.慎稈實(shí)驗(yàn)梁方法研1.訂2.緒1舞溶液秘的配必置賣（卻1進(jìn)）暫0匯.1益M商p麗H敢7.仗4籠Tr書is宵-H貧Cl暢緩沖循溶液途配置扒：向棟50危0此mL扛0則.1劃M奶三字-羥爽甲基蠅-胺劉基甲暖烷水剝?nèi)芤褐芯徤温稳渭?款.1散M傳H加Cl役水溶饑液，澡混勻歪，用根pH瞧計(jì)調(diào)貨節(jié)溶槍液p簡H值塘至7流.4舌。旨（2遮）果DN扣A旦溶液剩的配頑置：嗓稱取致適量玉的小毫牛胸答腺D扛NA巴溶于女緩沖產(chǎn)溶液倉中，體抽濾木，濾痛液按幸需要皂稀釋虛到一派定濃朱度，暑測量矩26挪0n將m和鑰28稿0n皺m處勒吸收纏值，妙經(jīng)U慎V譜特檢驗(yàn)它A襖26日0/削A2賭8綁0＝棚1.瞞8箭~1銷.9睬，表陳明基福本上下不含僚蛋白模質(zhì)，懷純度告符合蟻要求溉。D艘NA芹濃度艙以堿屬基對手摩爾掉濃度竹計(jì)，嫂測量探DN惹A在算26饅0n者m處另的吸鳳收光污度，蜜然后糾根據(jù)晉26添0恰nm儉的吸所光系詢數(shù)6杯60骨0M陰-1旁c毯m-拖1來輕確定滑DN麗A報(bào)濃度梳為1休.1湊02鏡×逗10念-3張mo勢l/故L億（3部）貴樣品評溶液由：稱誕取一智定量及各種命待分搬析樣周品成彎鹽后摩用緩?fù)鼪_溶眠液定歐容。確1.足2.簡2吸參收光引譜滴沃定遭在紫索外可零見光理譜儀趕中，盒向參疾比池姜中加蹲入緩返沖溶學(xué)液，倆在樣紅品池武中加來入同惹樣體社積的輛5蹄×宿10躬-5去mo斧l悉L-勇1的算樣品乏溶液鍛。用刊微量輝進(jìn)樣喂器每蜘次往卷參比局池和辨樣品奉池加上入相議同體預(yù)積的份DN雅A溶濁液，究使D添NA蒼與樣辯品濃們度比提值不次斷增比加，笨直至堵飽和錫，樣準(zhǔn)品的腿吸收煌峰不滔再減歇色。嗓2踩結(jié)果求與討夏論自2.偏1化告合物潛溶液蠟性質(zhì)芳2.等1.器1湯化合手物不碧同濃扭度時(shí)鳴的存俊在形屆式蜻化合不物具胸有一桌組或道多組引稠和左芳環(huán)付，它詢們在垮一定網(wǎng)濃度爺時(shí)可疫能通路過布π班－益π襖堆積鋒而形廢成二遵聚或線多聚地，所廁以我挪們應(yīng)取用吸香收光帳譜滴急定進(jìn)離行觀碎察。較在紫洲外光鴨譜儀笑中，揪向參群比池摧中加布入一長定的烈緩沖擦溶液銳，在版樣品釋池中也加入跡一定互體積歲的樣最品溶搖液，跟不斷國增加抵樣品汽的濃恒度，景直到洽飽和胖，樣福品的犯吸收扇峰不布色。夠數(shù)據(jù)許處理娘可知抵化合超物在弦c跡≥導(dǎo)4.鈴64陳×虎10亦-5更m堤ol款L慚-1育時(shí)親以雙訂分子渣形式警存在關(guān)，在桐c<鹿4.督64歲×斑10做-5萌m匯ol符L蒜-1爆時(shí)桐以單揀分子詢形式賊存在關(guān)，可取以保憂證在范測試際條件裝下，跪濃度左2化×論10陶-5晌m茂ol杰L壯-1判，組該化洽合物乏以單敵分子辛存在膽，使外得測犁試條瑞件下保真實(shí)奏反映決了該屈化合投物與限D(zhuǎn)N擋A的制作用甲。如望果小桶分子或以雙佛分子總形式杠存在盡，D衛(wèi)NA欣要先困拆分蟻小分捕子，宇能量恰耗損慈，放棄應(yīng)出貢的吸凡收光緒譜就惑有變接化?？脠D短3楊(儉a)納化競合物災(zāi)I自板身隨肌濃度化增加靜的吸矮收光唐譜（求p欄H為限7.春4）槽;或(b奸)重化合復(fù)物I澤摩敘爾消堡光系輪數(shù)與退濃度浮對數(shù)搞圖予2.脆1.郊2化幣合物藥不同狗pH以值的誤存在命形式嶼化合衣物不鈴?fù)琾炸H值鄭的可看見光鵝譜可遷以從著圖4擱數(shù)據(jù)婆處理倒可知婆，化峰合物閃Ⅰ余、池Ⅱ溜、言Ⅲ徒、害Ⅳ振的p掀K蟲a值著分別公為8弊.3倒、8蚊.1次、8渾.2傍、8惱.3鎮(zhèn)，說安明化習(xí)合物毀在生熟理p凡H即弓測定巾?xiàng)l件設(shè)下,蓬以鹽鑼的形訊式存似在。圖圖4(a)(b)(c)(d)化合物I、II、III、IV在不同pH下的吸收光譜圖(e)化合物IV吸光度對pH圖門2.躍2幾葡種化城合物飯與D擺NA盯分子千相互隸作用止由于錫紫外美-可充見吸像收光遵譜法碗是研諒究小機(jī)分子頓與D震NA圓相互健作用鍋機(jī)理姑的最極常用早、方老便的違方法錄之一訂。通蝕常，駕吲哚螞喹啉孝生物賢堿衍井生物綢小分案子在經(jīng)紫外火區(qū)有燃一定傘的電良子吸糖收。捎當(dāng)小賢分子撿與D地NA臟結(jié)合偏后，儉其電耕子結(jié)努構(gòu)會(huì)膊受到寄DN民A的去擾動(dòng)盯，導(dǎo)稼致小著分子寫所處愉的環(huán)勵(lì)境發(fā)肝生變義化，荒小分遣子與彈DN亡A的緊結(jié)合栗強(qiáng)弱兆可通菊過光滾譜變鋸化的典幅度毫反映跨出來冤。一盡般來辭說，蘆當(dāng)小倉分子寬以嵌拉入?？偸脚c錘DN易A作默用時(shí)制，其倡吸收虜光譜港會(huì)出亞現(xiàn)一影定的賴減色炸效應(yīng)廳和峰搞位紅堅(jiān)移現(xiàn)誦象。柿這是旺因?yàn)槔^插入金的的猾小分仔子與宇DN沃A的夠堿基界對發(fā)掘生殊π掌電子碎堆積幻后，匙使其越π*識(shí)空軌輸?shù)琅c菠堿基降的攻π垂電子狀軌道劈發(fā)生警偶合棉，能們級(jí)下傘降，四從而撫導(dǎo)致耕π→位π*辮躍遷惕能減牢少，慣產(chǎn)生限紅移健現(xiàn)象盲。同撿時(shí)，棵偶合論后的痕π塑軌道抵因部然分填截充電兇子，岡使躍筍遷幾醫(yī)率減詢少，待產(chǎn)生渾減色運(yùn)效應(yīng)粉。減線色效銳應(yīng)與拼小分矩子插琴入程可度有需關(guān)，壞減色格效應(yīng)榜越明倡顯，葡吸收記峰紅望移越采大，洗表明快插入陽程度躺越大降。妙圖5柳區(qū)化合泰物展Ⅰ旨(a當(dāng))、動(dòng)Ⅱ組(b工)、建Ⅲ即(c拴)、勿Ⅳ路(d薦)活與小隨牛胸分腺D虹NA譯相附互作文用的攤吸收扒光譜鏡圖招化合提物與卻DN粘A作美用的種吸收鍋光譜治如圖那5所關(guān)示。破作用豪后的甘相關(guān)縮數(shù)據(jù)敗見表栽1。擇從圖復(fù)中可貸見，究化合翻物溶桂液中陳加入霸DN顧A后善都出侵現(xiàn)不阻同程蓄度的竟擾動(dòng)淺，化懼合物簡的吸祝收光栽譜都報(bào)出現(xiàn)目了減悠色效盾應(yīng)，可較強(qiáng)概的紅績移現(xiàn)鞋象。旗這些慨光譜節(jié)變化虎特征果表明旦化合品物是誦以嵌題入模午式與耐DN方A作意用的攀。亭為了撕定量撫的比銀較化鈔合物利與D染NA摟結(jié)合塌的強(qiáng)阻弱，川我們順通過按化合突物光抗譜滴伏定實(shí)霉驗(yàn)，界以最徒大波蒙長峰獨(dú)吸光昏度的乞變化損，按捏照下越列方制程式腦計(jì)算割了化昨合物閥與D攝NA揉的結(jié)候合常稀數(shù)K既b汽[8耽]逃。敲澆腸絕鄙幻幟鵲冷尼[印DN巧A]健/(搶ε謝a狀-危ε鄰f擇)=芝[D艙NA歷]/堂(疊ε移b非-獎(jiǎng)ε酸f更)+拳1/痛Kb險(xiǎn)(慣ε柄b祖-仔ε翅f增)辮式中驗(yàn)[D符NA塑]表秋示D診N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