小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察

小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察第一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三實(shí)驗(yàn)原理小鼠骨髓細(xì)胞始終保持較強(qiáng)的分裂活性，且細(xì)胞數(shù)量較多。第二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三秋水仙素，可以抑制細(xì)胞分裂時(shí)的紡錘體形成，使處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞停止在中期。注射到動(dòng)物活體內(nèi)，可以收集到較多的中期分裂相的骨髓細(xì)胞。第三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三第四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1.熟悉小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備方法。2.了解小鼠染色體核型。3.認(rèn)識(shí)秋水仙素對(duì)細(xì)胞增殖的作用。器材與試劑內(nèi)容與方法（一）小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備預(yù)處理取材，收集細(xì)胞低滲固定、再固定滴片染色第五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三取材前2～3h，向腹腔內(nèi)注射秋水仙素。注射濃度隨動(dòng)物種類不同而異。秋水仙素的主要作用是使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，增加中期分裂相的比例。

腹腔內(nèi)注射秋水仙素2~3小時(shí)后，頸椎脫臼處死小鼠。第六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三小白鼠骨骼標(biāo)本第七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三第八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三取出小鼠的后肢股骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細(xì)胞的流失。第九頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三用紗布擦股骨上的肌肉組織，清除干凈注射器抽取生理鹽水沖洗骨髓第十頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三收集細(xì)胞：暴露骨髓腔，反復(fù)沖洗骨髓腔獲得骨髓細(xì)胞，收集到離心管中,定容至6ml.第十一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三滴2~3滴于玻片上，吹氣，在酒精燈火焰過火8次，做記號(hào)，涼干，染色滴片：滴片后，將片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分鐘，棄去染液，水洗，晾干，鏡檢。第十二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三第十三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三第十四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三作業(yè)與思考題1、繪制一個(gè)你所觀察到的小鼠骨髓細(xì)胞染色體中期分裂相。2、本實(shí)驗(yàn)中秋水仙素、低滲液、固定液各起什么作用？3、簡述實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意那些關(guān)鍵問題？第十五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三（二）染色體標(biāo)本片觀察1.標(biāo)本片質(zhì)量評(píng)價(jià)（1）細(xì)胞密度合適、均勻；（2）背景干凈，細(xì)胞核和染色體清晰；（3）有較多的分裂相；（4）染色體分散較好。第十六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三細(xì)胞密度第十七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三染色體分散度第十八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三2.染色體形態(tài)特征觀察第十九頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三3.染色體計(jì)數(shù)（100×10）151699+16+15=401082222+8+10=40第二十頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三4.細(xì)胞增殖指數(shù)統(tǒng)計(jì)細(xì)胞增殖指數(shù)=分裂細(xì)胞數(shù)分裂細(xì)胞數(shù)+間期細(xì)胞數(shù)×100%第二十一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞器的觀察一、中心體二、高爾基體第二十二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三一、中心體（4×10）馬蛔蟲子宮橫切片全貌第二十三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三中心體（10×10）第二十四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三中心體（40×10）第二十五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三二、高爾基體（4×10）脊神經(jīng)節(jié)切片第二十六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期三高爾基體（10×10）第二十七頁，共二十九頁，編輯于2023年