遺傳病的診斷修改詳解演示文稿

遺傳病的診斷修改詳解演示文稿當(dāng)前第1頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（優(yōu)選）遺傳病的診斷修改當(dāng)前第2頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

第一節(jié)現(xiàn)癥患者診斷

(symptomaticdiagnosis)

當(dāng)前第3頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

一、常規(guī)臨床診斷

1.病史的收集一般病史：患者的一般發(fā)病情況。家族史：本病在家族中的發(fā)病情況。婚姻史：婚齡、有無近親結(jié)婚等。生育史：生育年齡；子女健康狀況；有無流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn)；有無藥物接觸史、放射線接觸史等。

當(dāng)前第4頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)2.癥狀和體征的了解遺傳病的癥狀和體征有和其它疾病的共同性，亦有遺傳病本身的特殊性。除注意遺傳病的特異性征候群，還應(yīng)注意身體發(fā)育、智力發(fā)育、性器官發(fā)育情況。

3.臨床輔助檢查包括實(shí)驗(yàn)室檢查、X線、超聲、心電圖、腦電圖、CT等。

當(dāng)前第5頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)二、系譜分析（pedigreeanalysis）系譜分析往往是由先證者的癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查和其它輔助檢查作出疾病的診斷后，追溯到家系中其他成員，寫出系譜圖。

當(dāng)前第6頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)在繪制系譜過程中要注意：

1.系統(tǒng)、完整*系譜成員應(yīng)調(diào)查三代以上，（包括死者）*凡有近親婚配、死胎、流產(chǎn)和嬰兒死亡等，也須詢問清楚，記錄在系譜中。

2.去偽存真注意區(qū)別病人和家屬所提供信息的真?zhèn)巍?/p>

當(dāng)前第7頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)3.注意新的基因突變沒有家族史的先證者應(yīng)考慮是新的基因突變。

例如：假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良（DMD）約有1/3的病例為新的基因突變引起的。一般認(rèn)為是由于患者母親卵子形成過程中X染色體上DMD基因突變所致。當(dāng)前第8頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)對(duì)系譜的分析要注意區(qū)別：1.孟德爾遺傳病

包括AD遺傳病、AR遺傳病、XD遺傳病、XR遺傳病、YL疾病等。系譜分析對(duì)這類疾病的分析非常有用，分析時(shí)要考慮到某些疾病的遺傳異質(zhì)性、不規(guī)則外顯、外顯不全和延遲顯性等情況，可能會(huì)造成一些臨床假象，由于遺傳的異質(zhì)性可能將不同的遺傳病誤認(rèn)為同一種遺傳病進(jìn)行分析。當(dāng)前第9頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

2.非孟德爾遺傳病

(1)線粒體遺傳病：線粒體基因突變所致的遺傳病只通過母系遺傳，女性患者的子女都可能患病。線粒體遺傳病表現(xiàn)為晚發(fā)、進(jìn)行性加重。(2)多基因病：

其家族性聚集性可能類似于孟德爾遺傳，但不嚴(yán)格遵循孟德爾分離規(guī)律。當(dāng)前第10頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病

(1)基因組印記部分來自雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不是等同的，這些等位基因在傳遞上符合孟德爾規(guī)律，但在表達(dá)方面受傳遞的雙親性別影響，因而產(chǎn)生母源印記或父源印記時(shí)，在系譜分析中要加以注意。當(dāng)前第11頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

1.父系印記基因:來自父系的等位基因的表達(dá)被抑制來自母系的等位基因表達(dá)(mono-allelic)2.母系印記基因:來自母系的等位基因的表達(dá)被抑制來自父系的等位基因表達(dá)(mono-allelic)基因印記當(dāng)前第12頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

(2)動(dòng)態(tài)突變

在孟德爾遺傳疾病中，突變后的基因在世代傳遞中穩(wěn)定存在，但在三核苷酸重復(fù)序列擴(kuò)展所致的遺傳病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復(fù)單元的數(shù)目發(fā)生改變。當(dāng)前第13頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（一）染色體檢查又稱核型分析（karyotapeanalysis)，即通過血液或組織培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本，進(jìn)而顯帶、顯微攝影，分組排列對(duì)比分析。是確診染色體病的主要方法。隨著顯帶技術(shù)的應(yīng)用以及高分辯率染色體顯帶技術(shù)的出現(xiàn)和改進(jìn)，能更準(zhǔn)確地判斷和發(fā)現(xiàn)更多的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常綜合征，還可以發(fā)現(xiàn)新的微畸變綜合征。三、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查當(dāng)前第14頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)當(dāng)前第15頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)1.標(biāo)本來源：現(xiàn)癥病人外周血和身體的各種組織。2.染色體檢查適應(yīng)證：

(1)智能低下、生長(zhǎng)遲緩或伴有其他先天畸形者。

(2)夫婦中有染色體異常，如平衡結(jié)構(gòu)重排、嵌合體等。

(3)家族中已有染色體異?；蛳忍旎蝹€(gè)體。

(4)多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫。

(5)原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者。(6)35歲以上的高齡孕婦。

(7)有兩性內(nèi)外生殖器畸形者。當(dāng)前第16頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（二）性染色質(zhì)檢查

利用發(fā)根鞘細(xì)胞，皮膚或口腔上皮細(xì)胞，絨毛和羊水細(xì)胞檢查X染色質(zhì)或Y染色質(zhì)。用于兩性畸形或性染色體數(shù)目異常疾病的診斷。優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)單，有一定價(jià)值，但確認(rèn)仍需依靠染色體檢查。當(dāng)前第17頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)1.X染色質(zhì)檢查用于由于X染色體數(shù)目異常而引起的性染色體畸變綜合征檢測(cè)。如：Turner綜合征X染色質(zhì)為陰性。

Klinefelter綜合征X染色質(zhì)為陽(yáng)性。2個(gè)X染色質(zhì)當(dāng)前第18頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)2.Y染色質(zhì)檢查利用熒光染料鹽酸喹吖因等染料進(jìn)行Y染色質(zhì)的數(shù)目檢查。這種檢查適用于具有一個(gè)或一個(gè)以上Y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群。如正常男性只有一個(gè)Y小體，而XYY男性有2個(gè)Y小體。

可用于性別的鑒定。當(dāng)前第19頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（三）染色體原位雜交

應(yīng)用生物素、地高辛或熒光染料標(biāo)記的特異性DNA探針與玻片上的細(xì)胞中期染色體或間期核的DNA進(jìn)行雜交檢測(cè)。在這些核酸不改變?cè)瓉斫Y(jié)構(gòu)的情況下，研究核酸片段的位置、相互關(guān)系，因此稱為原位雜交。

當(dāng)前第20頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)熒光原位雜交（FISH）：

用生物素、地高辛配基等標(biāo)記物標(biāo)記的DNA探針進(jìn)行原位雜交后，用熒光標(biāo)記的生物素親和蛋白和抗親和蛋白的抗體進(jìn)行免疫檢測(cè)和放大，使探針雜交的區(qū)域發(fā)出熒光，這種原位雜交稱為熒光原位雜交?？赏瓿煞钦扼w的檢測(cè)。

當(dāng)前第21頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)四、生物化學(xué)檢查單基因遺傳病往往是由于基因突變導(dǎo)致酶和蛋白質(zhì)的改變或缺如，使一些器官的發(fā)育和正常的代謝發(fā)生改變，并在臨床上表現(xiàn)出一系列癥狀。因此，酶和蛋白質(zhì)的定性和定量分析可反映基因結(jié)構(gòu)的改變，是診斷單基因病的主要方法之一，由于主要采用生化手段故稱之為生物化學(xué)檢查。

當(dāng)前第22頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)生化檢查主要是對(duì)由于基因突變引起的蛋白質(zhì)和酶結(jié)構(gòu)或功能活性的檢測(cè)。此外還包括反應(yīng)底物、中間產(chǎn)物或終產(chǎn)物和受體的結(jié)合能力檢查。該方法特別適用于分子病、先天性代謝缺陷、免疫缺陷等遺傳病的檢查。該方法所用的材料主要有血液、活檢組織、尿、糞、陰道分泌物、脫落細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞等。當(dāng)前第23頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（一）酶和蛋白質(zhì)的分析

利用血液和特定的組織、細(xì)胞對(duì)酶的活性和蛋白質(zhì)的含量進(jìn)行檢測(cè)。主要方法有：電泳技術(shù)，酶活性檢測(cè)，層析技術(shù)，免疫技術(shù)，氨基酸順序分析技術(shù)等。（二）代謝產(chǎn)物的檢測(cè)

利用血液、尿液和羊水對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)和量的檢測(cè)。主要方法有：血液濾紙片法，顯色反應(yīng)。當(dāng)前第24頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)第二節(jié)癥狀前診斷（pre-symptomaticdiagnosis）

指在遺傳病的臨床癥狀出現(xiàn)前所作的診斷。是針對(duì)一些常染色體顯性(AD)遺傳病的雜合子個(gè)體的一種診斷方法。這些個(gè)體往往發(fā)病年齡延遲，并已經(jīng)生育后代，有1/2的可能性將致病基因傳給子代，造成子代發(fā)病。如果能在雜合子個(gè)體生育之前或出現(xiàn)癥狀之前就作出診斷，可以避免他將致病基因傳遞給后代，減少遺傳病的發(fā)病率。當(dāng)前第25頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

常染色體顯性雜合子個(gè)體的癥狀前診斷方法有三種：1．家系分析法和風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)2．生化檢查3．基因分析新生兒篩查（neonatalscreening）也是一種癥狀前的診斷。是對(duì)已出生的新生兒進(jìn)行某些遺傳病的診斷，是出生后預(yù)防和治療某些遺傳病的有效方法。當(dāng)前第26頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)第三節(jié)產(chǎn)前診斷（prenataldiagnosis）

產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷（intrauterinediagnosis）是對(duì)胚胎或胎兒在出生前是否患有某種遺傳病或先天畸形作出準(zhǔn)確的診斷。

當(dāng)前第27頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)一、產(chǎn)前診斷的適應(yīng)征1．35歲以上的高齡孕婦或夫婦一方有明顯致畸因素接觸史；2．夫婦之一有染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常者；或曾生育過染色體病患兒的孕婦；3．已知或推測(cè)孕婦是AR或XR攜帶者；曾生育過某種單基因遺傳病患兒的孕婦；當(dāng)前第28頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)4．曾生育過先天畸形（尤其是神經(jīng)管畸形）的孕婦；5．有原因不明的自然流產(chǎn)，畸胎，死產(chǎn)及新生兒死亡的孕婦。6.有遺傳病家族史，又系近親結(jié)婚的孕婦。當(dāng)前第29頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)二、產(chǎn)前診斷的方法㈠儀器診斷包括：①X線檢查②超聲波檢查③胎兒鏡檢查㈡細(xì)胞學(xué)方法（染色體檢查；染色質(zhì)檢查）

㈢生化方法（蛋白質(zhì)或酶檢查；代謝產(chǎn)物檢查）

㈣分子生物學(xué)方法（基因分析）利用限制酶酶切技術(shù)、分子雜交技術(shù)、PCR技術(shù)等分子生物學(xué)手段，對(duì)羊水細(xì)胞、絨毛或其他胎兒組織中提取的DNA進(jìn)行基因診斷。當(dāng)前第30頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)三、產(chǎn)前診斷的標(biāo)本及采集技術(shù)可用于檢測(cè)的標(biāo)本：羊水上清液、羊水細(xì)胞絨毛臍帶血、孕婦外周血中胎兒細(xì)胞孕婦血清和尿液受精卵、胚胎組織

當(dāng)前第31頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)㈠羊膜穿刺術(shù)（amniocentesis）

羊膜穿刺術(shù)一般在妊娠16～18周時(shí)進(jìn)行。因?yàn)榇藭r(shí)羊水量多、胎兒浮動(dòng)，穿刺時(shí)容易進(jìn)針，且不易傷及胎兒。取材最好是在B超監(jiān)視下進(jìn)行。對(duì)抽取的羊水及其中的胎兒脫落細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，分析染色體以及生化和基因的檢測(cè)。當(dāng)前第32頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)㈡絨毛吸取術(shù)

（chorionicvillusaspirationsampling,CVS）

絨毛吸取術(shù)一般可在妊娠早期7～9周時(shí)進(jìn)行。取樣最好在B超監(jiān)視下進(jìn)行。通過該技術(shù)獲得絨毛，可作為胎兒性別鑒定、核型分析、生化檢查和DNA分析。當(dāng)前第33頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)㈢臍帶穿刺術(shù)（cordocentesis）

臍帶穿刺術(shù)可在B超監(jiān)視下進(jìn)行。用一細(xì)針經(jīng)孕婦腹壁進(jìn)入胎兒的臍帶，抽取胎兒臍靜脈血。一般在孕中期（妊娠18周）進(jìn)行。臍血可作染色體或血液學(xué)各種檢查，亦可用于因羊水細(xì)胞培養(yǎng)失敗、DNA分析無法診斷而能用胎兒血漿或血細(xì)胞進(jìn)行生化檢測(cè)的疾病、或在錯(cuò)過絨毛和羊水取樣時(shí)機(jī)時(shí)進(jìn)行。當(dāng)前第34頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)㈣孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞分離

孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞是一項(xiàng)非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷技術(shù)，并易于被孕婦接受。孕婦外周血中的胎兒細(xì)胞至少有3種，即滋養(yǎng)葉細(xì)胞、有核紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。目前許多學(xué)者都致力于解決胎兒細(xì)胞的識(shí)別、富集和如何排除母血的“污染”等。此方法將以簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)在遺傳病的預(yù)防中發(fā)揮作用。當(dāng)前第35頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)四、植入前診斷（preimplantationdiagnosis）

植入前診斷是利用微操作技術(shù)和DNA擴(kuò)增技術(shù)對(duì)胚泡植入前進(jìn)行檢測(cè)。植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantationgeneticdiagnosis,PGD）是指用分子或細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)體外受精的胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，確定正常后再將胚胎植入子宮。

當(dāng)前第36頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)獲得植入前胚胎的主要方法：子宮沖洗體外授精植入前診斷的基本技術(shù)：（1）胚胎組織微活檢：目前多采用在6～8個(gè)細(xì)胞期，通過顯微操作技術(shù)取出1～2個(gè)細(xì)胞進(jìn)行染色體或基因的檢查。當(dāng)前第37頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（2）PCR技術(shù)：?jiǎn)渭?xì)胞PCR技術(shù)主要用于單基因遺傳病的診斷。采用引物延伸預(yù)擴(kuò)增技術(shù)，以隨機(jī)引物對(duì)單個(gè)細(xì)胞基因組進(jìn)行全基因擴(kuò)增，使單個(gè)細(xì)胞的多位點(diǎn)分析成為可能。熒光PCR也是常用的技術(shù)。（3）FISH技術(shù)：該技術(shù)利用熒光標(biāo)記的特定探針與固定在玻片上的卵裂球細(xì)胞核進(jìn)行雜交，在顯微鏡下鑒定染色體是否存在單體、三體等異常。當(dāng)前第38頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)第四節(jié)基因診斷

（genediagnosis）

采用分子生物學(xué)方法在DNA水平或RNA水平對(duì)某一基因進(jìn)行分析，從而對(duì)特定的疾病進(jìn)行診斷。

當(dāng)前第39頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)基因診斷的特點(diǎn):(1)針對(duì)直接病因診斷。(2)特異性強(qiáng)，靈敏度高。(3)適應(yīng)性強(qiáng),診斷范圍廣，因基因探針可為任何來源、任何種類，其探針序列可為未知或已知，待檢測(cè)的目的基因可為一個(gè)特定基因或基因組合。(4)目的基因是否處于活化狀態(tài)均可，無組織和發(fā)育特異性，因此可用于檢測(cè)一些具有組織表達(dá)特異性和分化階段表達(dá)特異性的基因。當(dāng)前第40頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)基因診斷的樣本：可以是任何有核細(xì)胞，包括：(1)外周血白細(xì)胞、口腔黏膜細(xì)胞。(2)活檢標(biāo)本、石蠟包埋的組織塊。(3)沉淀細(xì)胞（唾液、痰液、尿液）。(4)羊水細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、進(jìn)入母體循環(huán)的胎兒細(xì)胞。當(dāng)前第41頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（一）基因診斷的基本技術(shù)

分子雜交技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)

DNA序列測(cè)定技術(shù)

基因芯片技術(shù)當(dāng)前第42頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)1.分子雜交技術(shù)

（molecularhybridization）

原理：雙鏈DNA在加熱到一定溫度以上或在堿性溶液中會(huì)變性成為兩條單鏈，互補(bǔ)的兩條DNA單鏈在一定條件下結(jié)合成為雙鏈。即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。當(dāng)前第43頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

因此，當(dāng)一段已知基因的核酸序列作為探針，與變性后的單鏈DNA接觸時(shí)，如果兩者的堿基完全配對(duì)，它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈，從而表明被測(cè)基因組DNA中含有已知的基因序列。

當(dāng)前第44頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

基因探針（probe）：

是一段帶有標(biāo)記的，與待測(cè)基因有關(guān)的核苷酸序列。探針種類:基因組探針（genomicprobe）cDNA探針（cDNAprobe）

寡核苷酸探針（oligonucleotideprobe）

當(dāng)前第45頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)雜交方法：斑點(diǎn)雜交Southern雜交Northern雜交Western印跡雜交原位雜交寡核苷酸探針雜交當(dāng)前第46頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)2.聚合酶鏈反應(yīng)

（polymerasechainreaction，PCR）

聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)是在體外迅速的選擇擴(kuò)增特定的靶DNA的方法。又稱體外DNA克隆技術(shù)。

PCR的原理：（1）按靶DNA片段的5′和3′端的堿基順序各合成兩條引物（長(zhǎng)約20個(gè)堿基的寡核苷酸）；（2）將待測(cè)DNA變性后，加入四種單核苷（dNTP），引物和耐熱DNA聚合酶（Taq酶）；當(dāng)前第47頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（3）反應(yīng)液進(jìn)行熱循環(huán)，每一周期經(jīng)過變性（92～95℃），復(fù)性（40～60℃）和延伸（65～72℃）三個(gè)階段產(chǎn)生倍增的DNA。一般進(jìn)行20～40個(gè)周期。PCR原理示意圖當(dāng)前第48頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)Maxan和Gilbert首先建立了化學(xué)方法，Sanger建立了DNA測(cè)序的酶學(xué)方法。最新的DNA自動(dòng)測(cè)序法以不同熒光色素標(biāo)記的四種不同脫氧核苷酸為原料進(jìn)行酶促合成反應(yīng)，經(jīng)過凝膠電泳分離，應(yīng)用激光分析及計(jì)算機(jī)處理就能直接讀出堿基順序。極大地推進(jìn)了生命科學(xué)的發(fā)展和人類基因組計(jì)劃的進(jìn)程，而且測(cè)序的長(zhǎng)度可以達(dá)到1000bp以上。3.DNA測(cè)序技術(shù)(DNAsequencing）當(dāng)前第49頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

DNA測(cè)序（DNASequencing)是檢測(cè)未知突變和已知突變基因的最基本和最重要的實(shí)驗(yàn)手段。

DNA熒光自動(dòng)測(cè)序法示意圖

當(dāng)前第50頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)基因芯片技術(shù)是近年來發(fā)展十分迅速的大規(guī)模、高通量分子檢測(cè)技術(shù)。其基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律地排列固定于支持物上，形成矩陣點(diǎn)。現(xiàn)在的技術(shù)可以做到在1cm2上排列成千上萬個(gè)“點(diǎn)”。4.基因芯片技術(shù)(genechip)當(dāng)前第51頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)記分子，然后按堿基配對(duì)原理進(jìn)行雜交，再通過熒光檢測(cè)系統(tǒng)等對(duì)芯片進(jìn)行掃描，并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)每一探針上的熒光信號(hào)做出比較和檢測(cè)，得出所要的信息?；蛐酒ぷ髁鞒淌疽鈭D

當(dāng)前第52頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（二）基因診斷的途經(jīng)1.直接診斷——檢測(cè)突變基因直接診斷是直接檢測(cè)致病突變的基因。它通常使用基因本身或緊鄰的DNA序列作為探針，或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以探查基因無突變、缺失等異常及其性質(zhì)，這稱為直接基因診斷，它適用已知基因異常的疾病。當(dāng)前第53頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,或者對(duì)致病基因以及分子機(jī)制已完全了解,或者對(duì)致病基因以及分子機(jī)制部分了解但已知其中規(guī)律,可應(yīng)用此途徑。當(dāng)前第54頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)2.間接診斷——基因連鎖分析當(dāng)致病基因雖然已知但其異常尚屬未知或突變類型較多時(shí)；或致病基因本身尚屬未知時(shí)，但被檢測(cè)基因有緊密連鎖的DNA多態(tài)標(biāo)記，可以通過對(duì)受檢者及其家系進(jìn)行連鎖分析，以推斷前者是否獲得了帶有致病基因的染色體。

當(dāng)前第55頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性位，特別是基因突變部位或緊鄰的多態(tài)性位點(diǎn)作為標(biāo)記。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP等技術(shù)均可用于連鎖分析。當(dāng)前第56頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些異常大體可分為基因缺失和突變兩大類型。根據(jù)對(duì)基因異常類型的了解，可以采用不同的診斷方法。當(dāng)前第57頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)

遺傳的基因診斷方法基因異常方法探針、引物或限制酶基因缺失基因組DNA印跡雜交缺失基因的探針

PCR擴(kuò)增引物包括缺失或在缺失部位內(nèi)點(diǎn)突變

RFLP分析突變導(dǎo)致其切點(diǎn)消失的限制酶ASO雜交正常和異常的ASO探針

PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析引物包括突變部位（RFLP、SSCP、DGGE）基因已知基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性基因內(nèi)或旁但異常不明（RFLP、SSCP、AMP-FLP）側(cè)序列探針或引物連鎖分析基因未知與疾病連鎖的多態(tài)性，與疾病連鎖的多態(tài)如SSCP、AMP-FLP連鎖分析，位點(diǎn)探針或引物

RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析當(dāng)前第58頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)（三）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用1.對(duì)單基因病的基因診斷（1）點(diǎn)突變型遺傳病的基因診斷①鐮狀細(xì)胞性貧血的基因診斷

當(dāng)前第59頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)鐮狀細(xì)胞貧血(HbS)：第5～7位密碼子MstⅡ：CCTNAGGA：CCTGAGGAGS：CCTGTGGAGAAASSS1.2Kb

0.2Kb1.40Kb1.20Kb0.20Kb當(dāng)前第60頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)ASOHybridizationPKU,ARNormalprobeMutationprobe當(dāng)前第61頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)②無過氧化氫酶血癥（acatalasemia)

是一種常染色體隱性遺傳病，患者過氧化氫酶活性只有正常人的0.2%～0.4%，雜合體血液中過氧化氫酶活性則處于中間水平。過氧化氫酶基因由13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子組成。應(yīng)用32P標(biāo)記PCR反應(yīng)中底物方法，擴(kuò)增第4個(gè)外顯子和內(nèi)含子附近的203bp片段，應(yīng)用SSCP法可清楚地判斷患者和雜合體。

PCR-SSCP法檢測(cè)無過氧化氫酶血癥

當(dāng)前第62頁(yè)\共有71頁(yè)\編于星期日\(chéng)16點(diǎn)aa/aaaa/-aa/a-a-/----/-14kb10kb10kb4kbBamHIBamHI左側(cè)：16號(hào)染色體上攜有數(shù)目不同的基因右側(cè)：a基因探針雜交的結(jié)果1)

-地貧基因缺失的診斷正常貧血癥