臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)1第一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六前言“工欲善其事，必先利其器”第二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第一章概述技術(shù)和儀器在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的重要作用

項(xiàng)目、方法和儀器的評估指標(biāo)

檢驗(yàn)技術(shù)基本知識

第三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第一節(jié)技術(shù)和儀器在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的重要作用技術(shù)和儀器的重要作用：技術(shù)和儀器是實(shí)驗(yàn)室工作人員的主要工具技術(shù)和方法

儀器實(shí)驗(yàn)室工作者臨床檢驗(yàn)診斷第四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六選擇合適的技術(shù)和項(xiàng)目是實(shí)驗(yàn)室的重要工作：疾病診斷項(xiàng)目檢測方法選擇:WHY?第六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六HOW?疾病項(xiàng)目方法選擇原則:項(xiàng)目選擇:方法選擇:實(shí)用性與可靠性①利用項(xiàng)目評估指標(biāo)，了解項(xiàng)目的特性，優(yōu)、缺點(diǎn)；②參考國內(nèi)外項(xiàng)目應(yīng)用資料，特別注意權(quán)威學(xué)術(shù)團(tuán)體制訂的指南、準(zhǔn)則，如有國家標(biāo)準(zhǔn)更好；③現(xiàn)有的儀器是否適合該項(xiàng)測試；④臨床需要。第七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六選擇合適的儀器是確保實(shí)驗(yàn)室水平和質(zhì)量的保證：儀器類型選擇和型號的選擇首先要收集多方面資料，了解各種相似機(jī)器的特性和原理、應(yīng)用范圍，儀器的敏感性、特異性、重復(fù)性，運(yùn)用速度應(yīng)和實(shí)際工作相適應(yīng)(保留一定的潛在能力，如比當(dāng)前工作能力多20％)；其次從公司和其他用戶處了解故障率，維修工程師的水平和最短維修期，機(jī)器價格，培訓(xùn)情況，試劑是否開放等第八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六了解實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的最新發(fā)展動態(tài)，使實(shí)驗(yàn)室始終處于先進(jìn)水平實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展:：

l．從技術(shù)角度看實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的基本趨勢是能測定的物質(zhì)越來越多，由宏觀到微觀，由宏量到微量，更準(zhǔn)確、更本質(zhì)地反映生命科學(xué)的規(guī)律。２．從儀器角度看隨著生物物理技術(shù)、光電信號轉(zhuǎn)化技術(shù)的發(fā)展，特別是計算機(jī)的運(yùn)用，大量新型儀器進(jìn)入了實(shí)驗(yàn)室，檢測自動化、微量化、多樣化。第九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六自動化的優(yōu)點(diǎn):①提高工作效率20％～50％②減少人為的差錯③改進(jìn)方法④降低試劑用量、成本⑤加快檢測周期(TAT)⑥試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化⑦可以使用一些手工方法無法做到的精密試驗(yàn)，如連續(xù)監(jiān)測法等第十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第二節(jié)項(xiàng)目、方法和儀器的評估指標(biāo)評估指標(biāo)分三個層次：評價項(xiàng)目的指標(biāo)確定項(xiàng)目后選擇具體方法和儀器的指標(biāo)常規(guī)工作的質(zhì)量控制指標(biāo)第十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六一、項(xiàng)目的評估指標(biāo):評估對象：臨床應(yīng)用價值，即檢驗(yàn)項(xiàng)目對臨床某種疾病或臨床異常情況的診斷、病程監(jiān)測、療效評估、預(yù)后判斷的能力。1．金標(biāo)準(zhǔn)2．敏感性(sensitivity，靈敏度)3．特異性(specificity)4．預(yù)測值(predictivevalue，PV)5．準(zhǔn)確度(accuracy6．受試者工作曲線(receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC)第十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六金標(biāo)準(zhǔn)與診斷試驗(yàn)定義:

金標(biāo)準(zhǔn)：通過活檢、尸檢、外科手術(shù)、隨訪等所作出的決定性診斷，公認(rèn)最可靠，即確診試驗(yàn)。診斷試驗(yàn)：指一般臨床實(shí)驗(yàn)檢查方法，費(fèi)用低、操作簡單，對病人無損害，快速等優(yōu)點(diǎn)。

第十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六診斷試驗(yàn)和金標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用：診斷試驗(yàn)金標(biāo)準(zhǔn)臨床上診斷：提供病人患病或不患病的可能性金標(biāo)準(zhǔn)診斷試驗(yàn)診斷結(jié)果為患者和非患者診斷試驗(yàn)的性能評價：診斷結(jié)果為患者和非患者測得其陰性或陽性結(jié)果拿不準(zhǔn)進(jìn)行各種分析第十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六ROC的作用:

1．用于確定醫(yī)學(xué)決定值

2．比較項(xiàng)目的優(yōu)劣，ROC的右側(cè)面積越大，該標(biāo)志診斷價值越大第十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六二、方法、儀器和試劑的評估指標(biāo)評估對象：方法（儀器和試劑）本身穩(wěn)定性和可靠性1．精密度2．準(zhǔn)確度3．分析靈敏度(最低檢測限)4．分析范圍5．分析干擾(方法的特異性)6．受試者工作曲線和醫(yī)學(xué)決定值7．性價比第十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六1．精密度定義：通過重復(fù)性試驗(yàn)計算測定結(jié)果間的一致性，強(qiáng)調(diào)的是隨機(jī)誤差1、按正態(tài)分布的計量資料的不精密度通常用標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)(CV％)來表示2、計數(shù)資料的精密度往往用觀察符合率和卡帕(Kappa)值來表示表示：第十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六2(ad－bc)(a＋b)(b＋d)＋(a＋c)(c＋b)Kappa指數(shù)＝

真陽性＋真陰性符合率＝————————————————×100%

真陽性＋假陽性＋真陰性＋假陰性計量資料計數(shù)資料第二十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六批內(nèi)是將評價樣品隨機(jī)插入患者標(biāo)本中被檢測，在一批內(nèi)連做20次；收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。批間是每天做一次評價樣品，累積20次結(jié)果。收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。測定：第二十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六2．準(zhǔn)確度定義：待測物的測定值與其真值的一致性程度，強(qiáng)調(diào)的也是誤差不準(zhǔn)確度＝總誤差＝分析過程的隨機(jī)誤差＋分析過程的系統(tǒng)誤差

表示（實(shí)際工作中）：不精密度不正確度第二十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六測定：

對一分析物重復(fù)多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏倚即為測定的不正確度．回收試驗(yàn)、干擾試驗(yàn)、線性范圍試驗(yàn)系統(tǒng)誤差：總誤差：對比試驗(yàn)第二十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六3．分析靈敏度(最低檢測限)靈敏度（sensitivity，S）定義：是指檢測信號變化量（Δy）與被測物變化量（Δx）的比值，又稱為敏感度檢測限（DL、D或LOD）定義：在給定的置信水平上能夠檢出被測物的最小濃度或最小質(zhì)量，又稱檢出限、檢測低限、檢出低限。第二十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六4．分析范圍分析測量范圍(AMR)，分析方法能直接測定樣本中的待測物質(zhì)而不需稀釋或濃縮或其他的預(yù)處理臨床可報告范圍(CRR)，樣本可通過稀釋或濃縮或其他的預(yù)處理，以擴(kuò)展其準(zhǔn)確測定的范圍5．分析干擾(方法的特異性)干擾試驗(yàn)第二十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六干擾試驗(yàn)實(shí)例原理：

將可能引起干擾的物質(zhì)配成一系列濃度的溶液加到病人樣品中成為若干個干擾樣本，在原樣品中加入相同量的無干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎(chǔ)樣品，均用候選方法測定，各干擾樣本與基礎(chǔ)樣品結(jié)果之差表示一定濃度下該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾值（偏差）。

第二十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六試劑：

1.樣品收集無肝炎病毒污染、無溶血、無脂濁的人（或動物）血清，采用候選方法測定其濃度，并用生理鹽水稀釋至3.0mmol/L2.尿酸校準(zhǔn)液

濃度為：4.5mmol/L和9.0mmol/L。3.其他試劑

GOD-POD法測定血糖試劑

第二十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六操作步驟：1.樣本制備：原樣品：混合血清基礎(chǔ)樣品：混合血清0.9ml+蒸餾水0.1ml

干擾樣本1：混合血清0.9ml+4.5mmol/L尿酸0.1ml

干擾樣本2：混合血清0.9ml+9.0mmol/L尿酸0.1ml2.血糖濃度測定對以上各樣品按GOD-POD法雙份測定，結(jié)果取平均吸光度值、平均濃度值。第二十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六計算：第二十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六干擾試驗(yàn)習(xí)題某血糖測定樣本濃度為6.5mmol/L，通過干擾試驗(yàn)求得每mmol/L的尿酸的平均干擾值為-0.7，求當(dāng)尿酸濃度為0.4mmol/L時，該法測得的恒定系統(tǒng)誤差值以及血糖標(biāo)本的實(shí)際濃度。第三十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六回收試驗(yàn)?zāi)康模河脕砜疾旌蜻x方法對加入到常規(guī)分析樣品中的純分析物含量進(jìn)行準(zhǔn)確測定的能力，其目的是檢測候選方法的比例系統(tǒng)誤差（PE），以恒量該方法的準(zhǔn)確度。意義：測得的比例系統(tǒng)誤差（PE）值隨被測物濃度的增加而增加。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容第三十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六原理：

將濃度已知的含被測物的各校準(zhǔn)液加入至病人樣品（原樣品）中成為一系列分析樣品（回收樣品），在原樣品中加入相同體積的無被測物的溶劑作為基礎(chǔ)樣品，用候選方法對這些樣品進(jìn)行同步測定，計算回收率、平均回收率，考察候選方法的比例系統(tǒng)誤差。一般項(xiàng)目的平均回收率應(yīng)在95％～105％之間。第三十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六試劑：

1.樣品收集無肝炎病毒污染、無溶血、無脂濁的人（或動物）血清，采用候選方法測定其濃度，并用生理鹽水稀釋至3.0mmol/L。2.葡萄糖校準(zhǔn)液濃度分別為：36.0mmol/L、70.0mmol/L。3.其他試劑GOD-POD法測定血糖試劑第三十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六操作步驟：1.樣品制備：原樣品：混合血清基礎(chǔ)樣品：混合血清0.9ml+蒸餾水0.1ml

回收樣品1：混合血清0.9ml+36.0mmol/L葡萄糖校準(zhǔn)液0.1ml

回收樣品2：混合血清0.9ml+70.0mmol/L葡萄糖校準(zhǔn)液0.1ml2.血糖濃度測定按照GOD-POD法對以上各樣品進(jìn)行雙份檢測，結(jié)果取平均吸光度值、平均濃度值。第三十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六計算：1.計算公式：第三十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六如果某回收率為98％，原樣本的測定值為10.0mmol/L，求該法的比例系統(tǒng)誤差，比例系統(tǒng)誤差值，用該法測得原樣本的準(zhǔn)確值。

回收試驗(yàn)習(xí)題第三十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六6．受試者工作曲線和醫(yī)學(xué)決定值醫(yī)學(xué)決定水平，就是臨床按照不同病情給予不同處理的指標(biāo)閾值醫(yī)學(xué)決定值,根據(jù)不同的目的，研究健康(或稱非病理的)與病理的分界水平受試者工作曲線第三十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六三、常規(guī)工作中的質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)質(zhì)量監(jiān)控的目的：

質(zhì)量控制方法的核心：由檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差的質(zhì)量控制規(guī)則組成為了監(jiān)測和評估實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量，排除檢測過程中導(dǎo)致不滿意的原因質(zhì)量監(jiān)控的內(nèi)容：

分析前、分析中、分析后質(zhì)量控制第三十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六

圖全面質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)保證體系分析后質(zhì)量評估分析中質(zhì)量控制

病人準(zhǔn)備檢查病人申請檢驗(yàn)標(biāo)本采集標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本處理人員素質(zhì)工作環(huán)境實(shí)驗(yàn)用水實(shí)驗(yàn)室管理儀器質(zhì)量保證方法選擇與評價試劑選擇與評價建立操作規(guī)程室內(nèi)質(zhì)控及分析標(biāo)本分析測定臨床醫(yī)師反饋信息室內(nèi)復(fù)查保留標(biāo)本隨時復(fù)查運(yùn)送報告病人投訴室間質(zhì)評登記填發(fā)報告分析前質(zhì)量保證分析中質(zhì)量控制第三十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六1．室內(nèi)質(zhì)控指標(biāo)(Internalqualifycontrol，IQC)由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性。首先，選擇好質(zhì)控物其次，室內(nèi)質(zhì)控要求每天至少檢測一次質(zhì)控物，然后把結(jié)果繪制在質(zhì)控圖上。最后,根據(jù)質(zhì)控規(guī)則判斷分析結(jié)果在控或失控Ｌevey-Ｊennings質(zhì)控Westgard多規(guī)則質(zhì)控法第四十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六Ｌevey-Ｊennings質(zhì)控d均數(shù)+2S-2S+3S-3S正常分布Ｌevey-Ｊennings質(zhì)控圖第四十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六趨勢性變化漂移精度變化-S質(zhì)控圖的常見的幾種常見的失控表現(xiàn)-3S+3S+2S-2Sd均數(shù)第四十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六Westgard多規(guī)則質(zhì)控①12S警告規(guī)則：當(dāng)同一批兩個水平的質(zhì)控血清中的任意1份測定值超出±2S范圍，為“警報”信號。②13S失控規(guī)則：當(dāng)同一批兩個水平的質(zhì)控血清中的任意1份測定值超過±3S界限，為“失控”。提示存在隨機(jī)誤差。③22S失控規(guī)則：同一批兩個水平的質(zhì)控品結(jié)果同方向超出±2S限值，或同一質(zhì)控品連續(xù)兩次質(zhì)控結(jié)果超出±2S限值為“失控”，多由系統(tǒng)誤差造成。④R4S失控規(guī)則：同一批中兩個水平的質(zhì)控結(jié)果之差超出4S范圍，其中一個超出＋2S限值，另一個超出－2S限值，為“失控”，屬隨機(jī)誤差過大。⑤41S規(guī)則：當(dāng)1份質(zhì)控血清的測定結(jié)果連續(xù)4次同方向超過＋1S或－1S界限，或同一批兩個水平的質(zhì)控血清的測定結(jié)果同時連續(xù)2次同方向超過＋1S或－1S界限時，為“失控”，一般由系統(tǒng)誤差所至。⑥10規(guī)則：當(dāng)1份質(zhì)控血清測定結(jié)果連續(xù)10次偏于均值一側(cè)時，或同一批兩個水平的質(zhì)控血清的測定結(jié)果同時連續(xù)5次偏于一側(cè)時，為“失控”，是系統(tǒng)誤差所至。第四十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第四十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六3．注意臨床反饋意見2．室間質(zhì)控(exmnalqualifyassessment，EQA)由第三方機(jī)構(gòu)，采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評價實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室本身不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，幫助其校正，使其結(jié)果具有可比性。PT方案VIS評分法第四十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第三節(jié)檢驗(yàn)技術(shù)基本知識化學(xué)物質(zhì)的基本要求標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)室基本用品第四十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六一、化學(xué)物質(zhì)的基本要求1、純水天然水自來水實(shí)驗(yàn)用純水經(jīng)簡單的物理、化學(xué)方法處理，除去懸浮物質(zhì)和部分無機(jī)鹽經(jīng)蒸餾、離子交換、活性炭吸附、超濾等處理，除去雜質(zhì)(懸浮物,膠體物質(zhì),溶解物質(zhì))第四十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六表2-1美國NCCLS等級純水的規(guī)定及用途(1985)級別Ⅰ級Ⅱ級Ⅲ級pH未定未定5.0～8.0電阻率(MΩ·cm,25℃,最大量)102.01.0硅(mgSiO2/L,最大量)0.050.11.0微生物含量（每毫升最大菌落數(shù)）10103未定硅（mgSiO2/L，最大量）0.050.11.0微粒0.2μm微孔膜過濾未定未定有機(jī)物質(zhì)活性碳過濾未定未定用途原子吸收，火焰光度，熒光，電解質(zhì)，酶，高效層析，電泳，參比液，緩沖液。一般實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，器皿沖洗。器皿洗滌，要求不高的定性試驗(yàn)。第四十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六2．試劑的純度要求第四十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六

1.一級優(yōu)級純（G.R）又稱保證試劑，綠色標(biāo)簽，該級別純度最高、雜質(zhì)含量最低，適用于科研和配制校準(zhǔn)溶液

.

2.二級分析純（A.R）又稱分析試劑，紅色標(biāo)簽，該級別純度較高、雜質(zhì)含量較低，適用于定性和定量分析.

3.三級化學(xué)純（C.P），藍(lán)色標(biāo)簽，該級別質(zhì)量略低于二級品，適用于一般定量分析和定性試驗(yàn)

.4.四級實(shí)驗(yàn)試劑（L.R），黃色標(biāo)簽，該級別試劑質(zhì)量較低、但比工業(yè)用高，適用于一般定性實(shí)驗(yàn)

.普通生化檢驗(yàn)準(zhǔn)確的定量分析或配制校準(zhǔn)溶液

第五十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六二、標(biāo)準(zhǔn)品1．原始參考品是一種可以直接稱量、檢測、配制成任何濃度溶液的物質(zhì)，可用以定標(biāo)，國際理論應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IntematlonalUnionofPureandAppliedChemistry，IUPAC)認(rèn)為其純度達(dá)99．98％2．二級參考品由原始標(biāo)準(zhǔn)品在特定的方法下標(biāo)定的物質(zhì)，由于物質(zhì)純度，只能以標(biāo)準(zhǔn)物溶液形式存在3．標(biāo)準(zhǔn)參考品由美國國立標(biāo)準(zhǔn)化和技術(shù)學(xué)院(NationalIstituteofS