第一章分光光分析

學(xué)習(xí)要求1、掌握紫外-可見分光光度分析的特點(diǎn)、基本原理、測定條件的選擇、測定實(shí)驗(yàn)技術(shù)、定性和定量分析方法及有關(guān)術(shù)語。2、掌握紫外-可見分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)，使用、維護(hù)和保養(yǎng)方法。當(dāng)前第1頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)基于物質(zhì)光學(xué)性質(zhì)而建立起來的分析方法稱之為光學(xué)分析法，分為:光譜分析法和非光譜分析法（如比色法、旋光測定法）。

光譜分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通過測量物質(zhì)產(chǎn)生的發(fā)射光、吸收光或散射光的波長和強(qiáng)度來進(jìn)行分析的方法。

光學(xué)分析法概述當(dāng)前第2頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)在光譜分析中，依據(jù)物質(zhì)對光的選擇性吸收而建立起來的分析方法稱為吸光光度法，按所用光的波長不同分為:原子吸收光譜：利用物質(zhì)的氣態(tài)原子對特定波長的光的吸收來進(jìn)行分析的方法。

紅外吸收光譜：分子振動(dòng)光譜，吸收光波長范圍2.51000m（紅外光區(qū)），主要用于有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。

紫外吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長范圍200400nm（近紫外區(qū)），可用于結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。

可見吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長范圍400760nm（可見光區(qū)），主要用于有色物質(zhì)的定量分析。本章主要講授紫外-可見吸光光度法。主要光譜分析法當(dāng)前第3頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)第一節(jié)分光光度分析的基本原理1、物質(zhì)對光的選擇性吸收

光是一種電磁波，具有波粒二象性。光的波動(dòng)性可用波長、頻率、光速c、波數(shù)（cm-1）等參數(shù)來描述：

=c；波數(shù)=1/=/c光是由光子流組成，光子的能量：

E=h=hc/

（h=6.626×10-34J·Sh---Planck常數(shù))光的波長越短（頻率越高），其能量越大。一、朗伯-比耳定律1.1光的特性當(dāng)前第4頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)白光（400-760nm，日光、白熾燈光等）是一種復(fù)合光，它是由各種顏色的光按一定比例混合而得的。利用棱鏡等分光器可將它分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等不同顏色的單色光。可見光波譜單色光：單波長的光(由具有相同能量的光子組成)。當(dāng)前第5頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)白光除了可由所有波長的可見光復(fù)合得到外，還可由適當(dāng)?shù)膬煞N顏色的光按一定比例復(fù)合得到。能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互補(bǔ)色光。黃綠青橙白光青藍(lán)紅紫紅藍(lán)互補(bǔ)色光示意圖當(dāng)前第6頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果物質(zhì)對白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會(huì)顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。物質(zhì)吸收黃光，透過藍(lán)光：CuSO4吸收黃光，顯藍(lán)色。物質(zhì)吸收藍(lán)光，透過黃光互補(bǔ)光:藍(lán)光和黃光1.2物質(zhì)的顏色當(dāng)前第7頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)2、透射比(透過度、透光率)T和吸光度（T：0~1）透射比T:描述入射光透過溶液的程度。吸光度A與透光率T的關(guān)系:A＝－lgT當(dāng)前第8頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)布格爾(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系：A∝l

1852年，比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系：A∝c

綜合考慮，即一束平行單色光通過有色溶液，溶液的吸光度與溶液的濃度和厚度成正比。

3、朗伯—比耳定律當(dāng)前第9頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)

A＝lg（I0/It)=klc

A：吸光度，描述溶液對光的吸收程度；

l：液層厚度(光程長度)，通常以cm為單位；

c：溶液的濃度，單位g·L-1

k：吸光系數(shù)，單位L·g-1·cm-1

朗伯—比耳定律數(shù)學(xué)表達(dá)式吸光系數(shù)k(L·g-1·cm-1）相當(dāng)于濃度為1g/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長下的吸光度。當(dāng)前第10頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)A＝lg（I0/It)=εlc

式中

c：溶液的物質(zhì)的量濃度，單位mol·L-1；

ε：摩爾吸光系數(shù)，單位L·mol-1·cm-1；ε與k的關(guān)系為：

k=ε/M（M為摩爾質(zhì)量）

4、摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)ε在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長下的吸光度。摩爾吸光系數(shù)是物質(zhì)吸光能力的量度，可作為定性分析的參考。其值越大，方法的靈敏度越高。當(dāng)前第11頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)

朗伯—比耳定律是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測定的依據(jù)。應(yīng)用于各種光度法的吸收測量；吸收定律的適用條件1．必須是使用單色光為入射光；2．溶液為稀溶液；3．吸收定律能夠用于彼此不相互作用的多組分溶液。它們的吸光度具有加合性，且對每一組分分別適用，即：

A總=A1+A2+A3…+An=k1lc1+k2lc2+k3lc3…+knlcn4．吸收定律對紫外光、可見光、紅外光都適用。當(dāng)前第12頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對朗伯—比耳定律的偏離。5、偏離朗伯—比耳定律的因素當(dāng)前第13頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)（1）單色光不純引起的偏離實(shí)際上，分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光帶。復(fù)合光可導(dǎo)致對朗伯—比耳定律的正或負(fù)偏離。（2）介質(zhì)不均勻引起的偏離當(dāng)溶液中含有懸浮物或膠粒等散射質(zhì)點(diǎn)時(shí)，入射光通過溶液時(shí)就會(huì)有一部分光因散射而損失掉，使透過光強(qiáng)度減小，測得的吸光度增大，從而引起偏離吸收定律。當(dāng)前第14頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)（3）與測定溶液有關(guān)的因素朗伯—比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用。這只有在稀溶液(c<0.01mol/L)時(shí)才基本符合，當(dāng)溶液濃度較高時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對光的吸收。故朗伯—比耳定律只適用于稀溶液。溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)，使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。當(dāng)前第15頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)分光光度法主要應(yīng)用于測試樣中微量組分，與滴定分析、重量分析法相比，有如下特點(diǎn)：1、靈敏度高下限一般可達(dá)10-4-10-7g/mL2、準(zhǔn)確度高相對誤差1-3%3、操作簡便4、測定快速5、有一定的選擇性6、儀器簡單二、分光光度法的特點(diǎn)及應(yīng)用當(dāng)前第16頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)例題：已知某化合物的相對分子量為251，將此化合物用已醇作溶劑配成濃度為0.150mmol/L溶液，在480nm處用2.00cm吸收池測得透光率為39.8%，求該化合物在上述條件下的摩爾吸光系數(shù)和吸光系數(shù)。解：已知溶劑濃度c=0.150mmol/L，l=2.00cm,T=0.398,由Lambert-Beer定律得：

ε（480nm）=A/cl=-lg0.398/0.150×10-3×2.00=1.33×103(L·mol-1·cm-1)由ε=kM,得K=ε/M=ε/251=5.30(L·g-1·cm-1)當(dāng)前第17頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)第二節(jié)分光光度分析的樣品前處理固體樣品：干法消化、濕法消化、溶劑萃取液體樣品：消除干擾物質(zhì)（離子）當(dāng)前第18頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)第三節(jié)分光光度分析的條件選擇控制溶液吸光度在0.2-0.7之間。一、試樣濃度控制方法：1）控制溶液濃度A>0.7時(shí)，稀釋后測量；A<0.2時(shí)，擴(kuò)大取樣量或濃縮后測量。2）控制液層厚度A>0.7時(shí)，選擇光程小的吸收池；A<0.2時(shí)，選擇光程大的吸收池。

當(dāng)前第19頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)吸收曲線的討論（2）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似，λmax不變。而對于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和λmax則不同。（1）同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同。吸光度最大處對應(yīng)的波長稱為最大吸收波長λmax。二、測定波長的選擇當(dāng)前第20頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)(5)在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據(jù)。(3)吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。(4)不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長下吸光度A有差異，在λmax處吸光度A的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。當(dāng)前第21頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)前第22頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)顯色反應(yīng)----被測組分和某種試劑反應(yīng)后生成有色物質(zhì)的反應(yīng)。通過顯色反應(yīng)，可以加深被測組分的顏色。顯色反應(yīng)的靈敏度用摩爾吸收系數(shù)ε表示。ε

>105：超高靈敏；

(6～10）×104：高靈敏；<2×104：不靈敏。三、顯色條件的選擇當(dāng)前第23頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)靈敏度高---εmax最大；選擇性好---顯色劑只與被測物質(zhì)反應(yīng)。有色化合物組成固定---有定量關(guān)系。顯色產(chǎn)物穩(wěn)定---便于測定。1、顯色劑的選擇無機(jī)顯色劑：硫氰酸鹽、鉬酸銨、過氧化氫等幾種。有機(jī)顯色劑：種類繁多。偶氮類顯色劑：本身是有色物質(zhì)，生成配合物后，顏色發(fā)生明顯變化；具有性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對比度大等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂Ⅲ、PAR等。三苯甲烷類：鉻天青S、二甲酚橙等當(dāng)前第24頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)

吸光度A與顯色劑用量CR的關(guān)系會(huì)出現(xiàn)如圖所示的情況。2、顯色劑用量對一系列濃度相同的試液，加入不同量的顯色劑，分別測定其吸光度，如果在某一濃度范圍內(nèi)所測得的吸光度不變，就可以在此范圍內(nèi)確定顯色劑的用量。顯色反應(yīng)的速度有快有慢，快的幾乎是瞬間完成，顏色很快達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，并且能保持較長時(shí)間。大多數(shù)顯色反應(yīng)的速度是比較慢的，需要一定時(shí)間才能達(dá)到穩(wěn)定。而且有些有色化合物放置過久也會(huì)褪色。適宜的顯色時(shí)間要由實(shí)驗(yàn)來確定。3、顯色時(shí)間當(dāng)前第25頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)1、對溶液中待測組分狀態(tài)的影響很多高價(jià)金屬離子都會(huì)水解，酸度較低時(shí)，不利于顯色反應(yīng)的進(jìn)行。2、對顯色劑本身顏色的影響很多顯色劑都是有機(jī)弱酸，如果控制不好酸度，就會(huì)使指示劑顏色與有色化合物的顏色相近而影響測定。四、pH的選擇酸度對顯色反應(yīng)的影響很大，因?yàn)槿芤核岫戎苯佑绊懼饘匐x子、顯色劑的存在形式和有色化合物的組成、穩(wěn)定性等。比如：用二甲酚橙為顯色劑，它與金屬離子形成的配合物為紅色，它本身在pH<6.3時(shí)為檸檬黃色，而在PH＞6.3時(shí)為紅紫色。所以在pH＞6.3時(shí)，就無法進(jìn)行測定。當(dāng)前第26頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)3、對顯色劑反應(yīng)的影響許多顯色反應(yīng)是配位反應(yīng)，伴隨酸效應(yīng)，故酸度對顯色反應(yīng)影響較大。在相同實(shí)驗(yàn)條件下，分別測定不同pH值條件下顯色溶液的吸光度。選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)所對應(yīng)的pH范圍。一般顯色反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，但是也有一些反應(yīng)要加熱到一定溫度下才能進(jìn)行。而且還有一些有色配合物在室溫下會(huì)分解。五、溫度的選擇當(dāng)前第27頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)

選擇掩蔽劑的原則是：掩蔽劑不與待測組分反應(yīng)；掩蔽劑本身及掩蔽劑與干擾組分的反應(yīng)產(chǎn)物不干擾待測組分的測定。例：測定Ti4＋，可加入H3PO4掩蔽劑使Fe3+(黃色)成為Fe(PO４)23-(無色)，消除Fe3+的干擾；又如用鉻天菁S光度法測定Al3+時(shí)，加入抗壞血酸作掩蔽劑將Fe3+還原為Fe2+，消除Fe3+的干擾。1、控制酸度2、加入掩蔽劑3、選擇合適的條件（濃度、波長）4、分離干擾離子六、干擾離子的影響及清除方法當(dāng)前第28頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)

參比溶液用來調(diào)節(jié)儀器的零點(diǎn)，并可以消除某些比色分析的誤差，測得的的吸光度真正反映待測溶液吸光強(qiáng)度。

參比溶液的選擇一般遵循以下原則：⑴若僅待測組分與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)物在測定波長處有吸收，其它所加試劑均無吸收，用純?nèi)軇ㄋ?作參比溶液；⑵若顯色劑或其它所加試劑在測定波長處略有吸收，而試液本身無吸收，用“試劑空白”(不加試樣溶液)作參比溶液；⑶若待測試液在測定波長處有吸收，而顯色劑等無吸收，則可用“試樣空白”(不加顯色劑)作參比溶液；⑷若顯色劑、試液中其它組分在測量波長處有吸收，則可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測組分掩蔽后再加顯色劑，作為參比溶液。七、選擇合適的參比溶液當(dāng)前第29頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)第四節(jié)分光光度計(jì)的基本構(gòu)造和使用流程一、基本構(gòu)造光源單色器吸收池檢測器顯示0.575光源單色器吸收池檢測器顯示當(dāng)前第30頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)1、光源----有熱輻射光源和氣體放電光源兩類要求：在可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命?？梢姽鈪^(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長范圍在350～1250nm。它是比色計(jì)和分光光度計(jì)的光源。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射150～400nm的連續(xù)光譜。它是紫外分光光度計(jì)的光源。儀器自動(dòng)控制或手動(dòng)選擇單色光波長。當(dāng)前第31頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)常用的色散元件有棱鏡和光柵兩種。棱鏡有玻璃和石英兩種材料。它們的色散原理是依據(jù)不同的波長光通過棱鏡時(shí)有不同的折射率而將不同波長的光分開。由于玻璃可吸收紫外光，所以玻璃棱鏡只能用于350~3200nm的波長范圍，即只能用于可見光域內(nèi)。石英棱鏡可使用的波長范圍較寬，可從185~4000nm，即可用于紫外、可見和近紅外三個(gè)光區(qū)。光柵是利用光的衍射與干涉作用制成的，它可用于紫外、可見及紅外光域，而且在整個(gè)波長區(qū)具有良好的、幾乎均勻一致的分辨能力。2、單色器單色器是能從光源輻射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要功能：產(chǎn)生光譜純度高的光波且波長在紫外可見區(qū)域內(nèi)任意可調(diào)。通常由準(zhǔn)直鏡（聚光鏡）、色散元件、狹縫組成。當(dāng)前第32頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見區(qū)一般用玻璃池。（注意；每次使用要清洗干凈，或者潤洗。）3、吸收池當(dāng)前第33頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號(hào)變成可測的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。4、檢測器光電池----用半導(dǎo)體材料制成的光電轉(zhuǎn)換器。用得最多的是硒光電池。當(dāng)前第34頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)光電管的工作原理---將光強(qiáng)度信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)當(dāng)一定強(qiáng)度的光照射到陰極上時(shí)，光敏物質(zhì)要放出電子，放出電子的多少與照射到它的光的大小成正比，而放出的電子在電場的作用下要流向陽極，從而造成在整個(gè)回路中有電流通過。而此電流的大小與照射到光敏物質(zhì)上的光的強(qiáng)度的大小成正比。這就是光電管產(chǎn)生光電效應(yīng)的原理。光電倍增管----非常靈敏的光電器件，可以把微弱的光轉(zhuǎn)換成電流。其靈敏度比前2種都要高得多。它是利用二次電子發(fā)射以放大光電流，放大倍數(shù)可達(dá)到108倍。當(dāng)前第35頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)5、信號(hào)指示系統(tǒng)（檢流計(jì)、數(shù)字顯示或自動(dòng)記錄裝置）很多型號(hào)的分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī)，一方面可對分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制，另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。當(dāng)前第36頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)二、分光光度計(jì)類型1、簡易分光光度計(jì)721型分光光度計(jì)722型分光光度計(jì)當(dāng)前第37頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)2、紫外-可見分光光度計(jì)當(dāng)前第38頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)紫外分光光度法-----利用被測物質(zhì)的分子、離子以及有機(jī)化合物中的官能團(tuán)（主要為具有不飽和鍵和未成對電子的基團(tuán)。如：C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N—）對紫外光選擇性吸收的特性而建立起來的方法。當(dāng)前第39頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)1、光源

鎢燈或鹵鎢燈——可見光源350~1000nm。氫燈或氘燈——紫外光源200~360nm。當(dāng)前第40頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)2、吸收池玻璃——能吸收UV光，僅適用于可見光區(qū)。石英——不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū)。要求：匹配性（對光的吸收和反射應(yīng)一致）當(dāng)前第41頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)3、單色器色散元件棱鏡——對不同波長的光折射率不同分出光波長（不等距）。光柵——衍射和干涉分出光波長（等距）。4．檢測器將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置。光電池、光電管（紅敏和藍(lán)敏）、光電倍增管、二極管陣列檢測器。當(dāng)前第42頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)三、儀器使用基本流程1、檢查儀器停止?fàn)顟B(tài)2、接通電源，打開儀器開關(guān)3、調(diào)節(jié)波長

穩(wěn)定約20min4、儀器調(diào)零和調(diào)滿5、選擇合適的吸收池、參比溶液6、試樣放入7、測量、讀數(shù)、記錄8、關(guān)機(jī)當(dāng)前第43頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)第五節(jié)分光光度分析方法二、定量分析方法一、定性分析方法1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法2、比較法3、增量法（標(biāo)準(zhǔn)加入法）4、示差法當(dāng)前第44頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)測量有色溶液的吸光度后，常用工作曲線或比較法確定其濃度。1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法

繪制A-C工作曲線配制一系列不同含量的待測組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含待測組分的空白溶液為參比，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。并繪制吸光度—濃度曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（工作曲線），然后再在相同條件下測定試樣溶液的吸光度。由測得的吸光度在曲線上查得試樣溶液中待測組分的濃度，最后計(jì)算得到試樣中待測組分的含量。此法適合所測吸光度皆在0.2-0.7范圍內(nèi)的有色溶液當(dāng)前第45頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)0.710mg/25mL蘆丁含量測定：取樣品3mg稀釋至25mL。當(dāng)前第46頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)2、比較法

同一強(qiáng)度的單色光，通過兩個(gè)厚度相同而濃度不同的有色溶液時(shí)，則兩溶液濃度之比等于其吸光度之比。若標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度是已知的，通過計(jì)算，可以得到試樣的濃度。設(shè)：待測溶液濃度為cx，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs。則：

Ax=εb

cx

As=εbcs得：Ａx/Ａs=εbcx/εb

cs=cx/cs此法適用于所測溶液濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相近時(shí)當(dāng)前第47頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)把未知試樣溶液分成體積相同的若干份，除其中的一份不加入待測組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外，在其它幾份中都分別加入不同量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。然后測定各份試液試液的吸光度并繪制吸光度對加入的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度（增量）作圖，得一標(biāo)準(zhǔn)曲線：由于每份溶液中都含有待測組分，因此，標(biāo)準(zhǔn)曲線不經(jīng)過原點(diǎn)。將標(biāo)準(zhǔn)曲線外推延長至與橫坐標(biāo)交于一點(diǎn)，則此點(diǎn)到原點(diǎn)的長度所對應(yīng)的濃度值就是待測組分的濃度。3、增量法（標(biāo)準(zhǔn)加入法）此法的優(yōu)點(diǎn)是：自動(dòng)扣除背景吸收當(dāng)前第48頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)y2=k(x+x0)+bx0xy當(dāng)前第49頁\共有55頁\編于星期五\7點(diǎn)普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當(dāng)待測組分含量較高時(shí)，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強(qiáng)度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液。

設(shè)：待測溶液濃度為cx，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs(cs<cx)。則：

Ax=εbcx

As=εbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=εb(cx－