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毛細(xì)管電泳法的特點(diǎn)和的構(gòu)造第一頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日1.毛細(xì)管電泳具備如下優(yōu)點(diǎn):(1)高效塔板數(shù)目在105-106片/m間,當(dāng)采用CGE時(shí)
毛細(xì)管電泳色譜圖,塔板數(shù)目可達(dá)107片/m以上;(2)快速一般在十幾分鐘內(nèi)完成分離;(3)微量進(jìn)樣所需的樣品體積為nL級(jí);(4)多模式可根據(jù)需要選用不同的分離模式且僅需一臺(tái)儀器;(5)經(jīng)濟(jì)實(shí)驗(yàn)消耗不過(guò)幾毫升緩沖溶液,維持費(fèi)用很低;(6)自動(dòng)CE是目前自動(dòng)化程度較高的分離方法。第二頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日2.毛細(xì)管電泳的缺點(diǎn)
(1)由于進(jìn)樣量少,因而制備能力差;(2)由于毛細(xì)管直徑小,使光路太短,用一些檢測(cè)方法(如紫外吸收光譜法)時(shí),靈敏度較低;(3)電滲會(huì)因樣品組成而變化,進(jìn)而影響分離重現(xiàn)性。第三頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日3.與傳統(tǒng)電泳技術(shù)相比,具備的特點(diǎn)(1)分離效率高(2)分離模式多:毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜、毛細(xì)管等電聚焦、毛細(xì)管等速電泳等。(3)應(yīng)用范圍廣:既能分析有機(jī)和無(wú)機(jī)小分子,又能分析多肽和蛋白質(zhì)大分子;既能用于帶電離子的分離,又能用于中性分子的測(cè)定。(4)最小檢出限低(5)分析成本低(6)樣品用量少(7)儀器簡(jiǎn)單(8)環(huán)境友好第四頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日4.與高效液相色譜相比,具備的特點(diǎn)
毛細(xì)管電泳高效液相色譜流體流動(dòng)形式平流,峰展寬小層流,峰展寬大組分分子移動(dòng)電滲流和電泳流的共同作用有壓力流帶動(dòng)組分分子的擴(kuò)散擴(kuò)散小,不存在傳質(zhì)阻力,柱效高有擴(kuò)散,存在傳質(zhì)阻力,柱效低組分分離依據(jù)遷移速率的差異依據(jù)分配系數(shù)的差異生物大分子的分離適合不適合第五頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日毛細(xì)管電泳(CE)與質(zhì)譜(MS)聯(lián)用技術(shù)(CE-MS)第六頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日能快速分離微體積樣品中的化合物,及其高效分離和基于分子量鑒定化合物的能力,使它成為分析復(fù)雜生物樣品的一種非常有價(jià)值的方法。另外,在各種廣泛的諸如毛細(xì)管區(qū)域電泳,毛細(xì)管等電點(diǎn)調(diào)焦,和在線等速電泳等技術(shù)已經(jīng)和MS結(jié)合。這些優(yōu)點(diǎn)使得CE-MS在分析復(fù)雜生物混合物中廣泛使用。CE-MS已經(jīng)成功地廣泛應(yīng)用于復(fù)雜化合物地分析包括氨基酸,蛋白質(zhì)消化,蛋白質(zhì)混合物,單個(gè)細(xì)胞,寡核苷酸,和各種小分子相關(guān)的制藥工業(yè)。第七頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日CE-MS的分類(lèi)第八頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日CE-MS在線結(jié)合的儀器主要包括三個(gè)部分:即CE系統(tǒng),CE-MS接口和MS檢測(cè)器。
目前,成功地應(yīng)用于CE-MS接口中的離子化技術(shù)有連續(xù)流-快原子轟擊(CF-FAB)、離子噴霧(IS)、電噴霧(ESI)、大氣壓化學(xué)電離、基質(zhì)輔助激光解吸離子化和等離子體解吸離子化技術(shù)等。其中電噴霧電離是最常用、最成熟的技術(shù)。第九頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日CE-MS的結(jié)構(gòu)第十頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日電噴霧技術(shù)用來(lái)產(chǎn)生MS分析的所需的離子技術(shù),特別適用于與大分子的質(zhì)譜分析,采用ESI,大分子在離子化過(guò)程中不會(huì)碎裂。第十一頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日電噴霧技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)第十二頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日接口技術(shù)接口技術(shù)是實(shí)現(xiàn)CE-MS聯(lián)用的關(guān)鍵所在。CE-MS聯(lián)用分為在線聯(lián)用和離線聯(lián)用。CE-MS離線聯(lián)用的關(guān)鍵是對(duì)已分離樣品的有效收集,并不涉及真正意義上的聯(lián)用接口技術(shù);而且與離線聯(lián)用相比,CE-MS在線聯(lián)用具有樣品損失少、自動(dòng)化程度高、分析速度快等優(yōu)點(diǎn),其應(yīng)用要比離線聯(lián)用廣泛得多。CE-MS在線聯(lián)用需要設(shè)計(jì)合適的接口,能夠?qū)⒁逊蛛x的樣品全部轉(zhuǎn)移到質(zhì)譜儀中,同時(shí)實(shí)現(xiàn)樣品快速高效的離子化,同時(shí)接口對(duì)技術(shù)要求很高。第十三頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日CE-ESI-MS接口主要分為鞘液接口和無(wú)鞘液接口兩種。第十四頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日鞘液接口技術(shù)鞘液接口技術(shù)是最早出現(xiàn),其優(yōu)點(diǎn)在于通過(guò)提高樣品流速使得噴霧更加穩(wěn)定,有利于形成穩(wěn)定的電流回路,同時(shí)可改變CE運(yùn)行緩沖液的組成,使其滿(mǎn)足ESI源的檢測(cè)要求。主要有低流速(low-flow)鞘液接口,多通道的CE-ESI-MS聯(lián)用鞘液接口。Chang等設(shè)計(jì)了低流速鞘液接口,他們將毛細(xì)管末端套在裝有鞘液的離心管中,鞘液低速流出與CE流出物混合,離心管中插入一鉑絲作為電極以構(gòu)成電流回路;低流速可以降低鞘液的稀釋作用,同時(shí)鉑絲構(gòu)成電流回路可以避免因流速低所造成的斷流。第十五頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日無(wú)鞘液接口技術(shù)無(wú)鞘液接口技術(shù)由于不存在任何稀釋效應(yīng)而逐漸受到研究者的青睞。液接型接口是無(wú)鞘液接口技術(shù)中比較特別的一種。與其他無(wú)鞘液接口相比,液接型接口可以通過(guò)液接液體來(lái)改變CE運(yùn)行緩沖液的組成,使其滿(mǎn)足電噴霧離子源的要求。與鞘液接口相比,液接型接口不存在鞘液的稀釋作用,但這種接口會(huì)存在液體死體積問(wèn)題。第十六頁(yè),共十七頁(yè),編輯于2023年,星期日芯片CE
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