防腐劑的測(cè)定

防腐劑的測(cè)定第一頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五防腐劑是指能防止食品腐敗、變質(zhì)，抑制食品中微生物繁殖，延長(zhǎng)食品保存期的物質(zhì)，它是人類(lèi)使用最悠久、最廣泛的食品添加劑。第二頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五防腐劑的種類(lèi)

我國(guó)允許使用的品種主要有：苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對(duì)羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。非允許的防腐劑：硼砂、水楊酸、氯霉素、青霉素

第三頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五防腐劑的測(cè)定方法GB/T5009·29—2003

第一法氣相色譜法第二法高效液相色譜法第三法薄層色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸含量的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸含量的測(cè)定。

第四頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五教學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)薄層層析法薄層色譜法測(cè)定苯甲酸和山梨酸第五頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五原理利用樣品中各組分對(duì)吸附劑吸附能力的不同，發(fā)生了無(wú)數(shù)次吸附和解吸過(guò)程。對(duì)吸附劑吸附能力弱、對(duì)展開(kāi)劑溶解度大的組分隨流動(dòng)相迅速向前移動(dòng)，可較快地隨著展開(kāi)劑遷移到層析板的上端；對(duì)吸附劑吸附能力強(qiáng)的組分移動(dòng)慢，則留在層析板的下端。利用各組分在展開(kāi)劑中溶解能力和被解吸能力的不同，最終將各組分彼此分開(kāi)。

第六頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五實(shí)驗(yàn)流程制板→活化→點(diǎn)樣→展開(kāi)→定性或定量

第七頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五

1、制板――吸附劑均勻地涂在玻璃板上作為固定相，經(jīng)干燥、活化后，稱薄層板。將吸附劑均勻地涂在玻璃板上這個(gè)過(guò)程稱制板。2、點(diǎn)樣――把含有不同組成的被測(cè)樣品，點(diǎn)在涂有吸附劑的薄層板上，稱點(diǎn)樣。3、展開(kāi)――由于物質(zhì)中各組分受到吸附劑的吸附力和溶劑的解吸附力的反復(fù)作用，各組分在層析板上向前遷移過(guò)程稱為展開(kāi)，選用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑，通過(guò)毛細(xì)管作用，逐步浸潤(rùn)層析板，有機(jī)溶劑稱為展開(kāi)劑（流動(dòng)相）。第八頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五定性或定量展開(kāi)后使各組分分離，再根據(jù)比移值和斑點(diǎn)的大小進(jìn)行定性或定量。

第九頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五吸附劑分離效果及層析速度主要取決一吸附劑的粒度的大小。而吸附作用則與顆粒本身的微孔大小有關(guān)。吸附劑的活性：對(duì)于同一吸附劑，若以不同的方法制備處理，其吸附能力也有強(qiáng)弱的變化，一般常以“活性”表示吸附力的強(qiáng)弱。分為五級(jí)：一級(jí)活性最強(qiáng)，五級(jí)活性最弱。一般用二－三級(jí)。

吸附劑的常用種類(lèi)有：硅膠、聚酰胺第十頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五薄層板制備1、平鋪法：用購(gòu)置或自制的薄層涂布器，進(jìn)行制板，涂層既方便又均勻，是科研中常用的方法。2、傾注法：將調(diào)好的漿料倒在玻璃板上，用手搖晃，使其表面均勻平整，然后放在水平的平板上晾干。這種制板方法厚度不易控制。第十一頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五注意事項(xiàng)⑴用濕法制薄層，應(yīng)入在水平的臺(tái)面上，否則由于臺(tái)面不平而使吸附劑糊狀體向低處流動(dòng)，造成薄層厚度不一致。⑵晾干時(shí)應(yīng)放在通風(fēng)良好的地方，無(wú)灰塵，以防薄層被污染。⑶烘干后應(yīng)放在干燥器中冷卻、貯存。第十二頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五活化活化的目的：是為了增加吸食劑的吸附能力，即增加活性。操作：濕法制板都應(yīng)進(jìn)行晾干、烘干干燥。薄層板經(jīng)過(guò)自然干燥后，失去了大部分水分才能進(jìn)行活化處理?；罨臏囟葹?05-110℃。觀察與思考：將含水分過(guò)多的薄層板立即放入烘箱（105-110℃）中活化，會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象？由于水分突然大量蒸發(fā)則造成板面斷裂或龜裂，而使薄層板不能使用。第十三頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五點(diǎn)樣點(diǎn)樣技術(shù)直接影響到分離效果和要檢出靈敏度。點(diǎn)樣儀器：玻璃毛細(xì)管（一般用于定性）、生化用血色素管（一般用于定性），微量注射器（一般用于定量），規(guī)格：20×20cm在薄板一端

1.5厘米處開(kāi)始每隔２厘米作一記號(hào)（鉛筆輕輕點(diǎn)一下，切勿刺破薄層）共六點(diǎn)，用0.5毫米直徑的毛細(xì)管吸取樣品，各樣品按右圖點(diǎn)樣二次（樣品量５－５０微克，點(diǎn)子直徑不超過(guò)２毫米）。

第十四頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五薄層色譜法原理

樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。將樣品提取液濃縮，點(diǎn)于聚酰胺薄層板上，展開(kāi)。顯色后，根據(jù)薄層板上苯甲酸、山梨酸的比移值，與標(biāo)準(zhǔn)比較定性，并可進(jìn)行概略定量。

第十五頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五展開(kāi)

展層至溶劑前沿頂端0.5～１厘米處時(shí)取出薄板（展開(kāi)時(shí)間約１小時(shí)），在溶劑前沿處作記號(hào)并放在空氣中晾干，以除去溶劑。將選擇的展開(kāi)劑倒入層析槽或?qū)游龈字校ㄒ簩痈叨燃s為0.5cm）,待容器內(nèi)溶劑蒸氣達(dá)到飽和后，將點(diǎn)好樣的薄層析放入槽或缸中進(jìn)行展開(kāi)。（注意：點(diǎn)樣的位置必須要在展開(kāi)劑液面之上。）當(dāng)展開(kāi)劑展開(kāi)，其前沿上升到板頂端5-10mm處時(shí)，取出薄層板，用鉛筆劃出前沿的位置、晾干。

第十六頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五顯色

用噴霧器顯色均勻噴霧在薄層上，放烘箱中保持８５℃加溫至層析斑點(diǎn)顯現(xiàn)。此顯色劑可使各種糖呈現(xiàn)出不同顏色。第十七頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五定性根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)糖液層析后所得班點(diǎn)的位置確定混合樣品中所分離出的各個(gè)斑點(diǎn)分別為何種糖。第十八頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五定量用各種顯色方法使斑點(diǎn)出現(xiàn)后，應(yīng)立即用鉛筆或小針劃出斑點(diǎn)的位置，并計(jì)算R值。

化合物移動(dòng)的距離（斑點(diǎn)中心到原點(diǎn)的距離）

R值

＝─────────────────────

溶劑的移動(dòng)的距離（溶劑前沿到原點(diǎn)距離）第十九頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五苯甲酸和山梨酸測(cè)定

（薄層層析法）步驟樣品處理→點(diǎn)樣→展開(kāi)→顯色→定性或半→定量第二十頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五聚酰胺板的制備

稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7ml水，研磨3~5min，立即倒入涂布器內(nèi)制成、0.3mm的薄層板兩塊，室溫干燥后，于80℃干燥1h,取出置于干燥器中保存。

注意事項(xiàng)：聚酰胺薄層板，烘干溫度不能高于80℃，否則聚酰胺變色。注意！第二十一頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五樣品提取操作流程圖：

2.5g樣品→于25ml具塞量筒→加0.5ml鹽酸→用15ml乙醚萃取，振搖1min→用10ml乙醚萃取→合并兩次萃取液→于另一25ml具塞量筒。

思考題：酸化的目的是什么？使苯甲酸鈉、山梨酸鉀轉(zhuǎn)變?yōu)楸郊姿峄蛏嚼嫠?，用乙醚提取?/p>

????第二十二頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五另一25ml具塞量筒→NaCl洗滌兩次→靜止10min→通過(guò)無(wú)水NaSO4層過(guò)濾→于25ml容量瓶→加乙醚定容至25ml。

吸取10.0ml乙醚提取液→分現(xiàn)將置于10ml具塞離心管中→40水浴上揮干→加0.1ml乙醇溶解殘?jiān)鷤溆?。第二十三?yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五思考題1、樣品中如含有二氧化碳、酒精時(shí)應(yīng)如何處理？2、富含脂肪和蛋白質(zhì)的樣品應(yīng)如何處理？答：如含有二氧化碳、酒精時(shí)應(yīng)先加熱除去；富含脂肪和蛋白質(zhì)的樣品應(yīng)除去脂肪和蛋白質(zhì)，以防用乙醚萃取時(shí)發(fā)生乳化。除去的方法同糖精的測(cè)定。

????第二十四頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五測(cè)定點(diǎn)樣：在薄層下端2cm的基線上，用微量注射器點(diǎn)

樣品液，同時(shí)各點(diǎn)

苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。展開(kāi)與顯色：

將點(diǎn)樣后的薄層板放入預(yù)先盛有展開(kāi)劑的展開(kāi)

內(nèi)，展開(kāi)

槽周?chē)N有濾紙，待溶劑前沿上展至10cm，取出揮干，噴顯色劑，斑點(diǎn)成黃色，背景為藍(lán)色。樣品中所含苯甲酸、山梨酸的量與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)比較定量（苯甲酸、山梨酸的比移值依次為）。

第二十五頁(yè)，共二十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五操作技術(shù)要點(diǎn)點(diǎn)樣：少量多次，大小