實(shí)驗(yàn)三口服葡萄糖耐量試驗(yàn)范玉平

實(shí)驗(yàn)三口服葡萄糖耐量試驗(yàn)范玉平

2（一）血糖的來(lái)源、去路和調(diào)節(jié)血糖的來(lái)源、去路和調(diào)節(jié)3.89～6.113二、血糖濃度的調(diào)節(jié)1、肝臟調(diào)節(jié)作用:

雙向調(diào)控功能：從器官水平通過(guò)神經(jīng)-激素的作用，使肝細(xì)胞內(nèi)各種糖代謝的酶活性改變。升糖調(diào)節(jié)1：具有活性很高的葡萄糖-6-磷酸酶，可促進(jìn)肝糖原水解，補(bǔ)充和升高血糖。升糖調(diào)節(jié)2：肝臟具有活性高且易誘導(dǎo)的糖異生酶類，禁食或饑餓時(shí)能將非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化為糖（占55-90%）。降糖調(diào)節(jié)：促進(jìn)組織攝取葡萄糖，促進(jìn)肝糖原和脂肪合成、和抑制肝糖原分解、抑制糖異生。4２、激素調(diào)節(jié)作用降低血糖濃度的激素

①胰島素②胰島素樣生長(zhǎng)因子

升高血糖濃度的激素①胰高血糖素②腎上腺素③生長(zhǎng)激素④皮質(zhì)醇

⑤甲狀腺激素5３、神經(jīng)調(diào)節(jié)作用部位

1、下丘腦2、自主神經(jīng)（交感和副交感神經(jīng)）

方式：

1、直接作用于肝臟；

2、調(diào)節(jié)激素的分泌而影響血糖。內(nèi)臟神經(jīng)迷走神經(jīng)6高血糖癥與糖尿病低血糖癥酮癥半乳糖血癥

糖代謝紊亂7(一)高血糖癥與糖尿?。?、高血糖癥:空腹血漿血糖（FPG）＞6.11

mmol/L（130mg/dl）生理性：包括飲食性（高糖飲食）或情感性（情緒緊張，腎上腺分泌增加）病理性：見(jiàn)于糖尿??；內(nèi)分泌腺（甲狀腺、腎上腺皮質(zhì)或髓質(zhì)、胰島細(xì)胞功能亢進(jìn)）；顱內(nèi)壓升高刺激血糖中樞；嘔吐、腹瀉、高熱等引起的脫水。尿糖：若血糖濃度高于腎糖閾值9.0mmol/L，出現(xiàn)尿糖。8２、糖尿病（diabetesmellitus,DM）

定義：是一種慢性、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病，系胰島素相對(duì)或絕對(duì)不足，或利用缺陷引起。9

糖尿?。╠iabetesmellitus,DM）

臨床特征：血糖持續(xù)升高，甚至出現(xiàn)糖尿。長(zhǎng)期患有糖尿病常有脂類、蛋白質(zhì)代謝紊亂以及眼、腎的微血管病變及神經(jīng)病變等并發(fā)癥。嚴(yán)重者還可出現(xiàn)水、電解質(zhì)紊亂及酸堿平衡紊亂，表現(xiàn)為高脂血癥，酮癥酸中毒等，重者可致死亡。1011發(fā)病機(jī)制：

1、胰腺β細(xì)胞的自身免疫性損傷2、機(jī)體對(duì)胰島素的作用產(chǎn)生抵抗DM的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目：

血糖測(cè)定、尿糖測(cè)定、OGTT、血清糖化血紅蛋白和糖化血清蛋白測(cè)定、胰島素與胰島素抗體測(cè)定、Ｃ肽測(cè)定、胰島素釋放試驗(yàn)以及相關(guān)代謝產(chǎn)物測(cè)定。

12糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)：13（二）低血糖癥

1、概念：低血糖癥

是指血糖濃度低于3.89mmol/L（葡萄糖氧化酶法）時(shí)臨床出現(xiàn)一系列因血糖濃度過(guò)低引起的癥候群。發(fā)病原因：來(lái)源＜去路①激素效應(yīng)：升血糖激素缺乏，降血糖激素過(guò)剩。②肝病變：肝功嚴(yán)重?fù)p傷致肝糖原減少和糖異生嚴(yán)重障礙。③長(zhǎng)期饑餓或劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)代謝率增加，血糖消耗過(guò)多。14（三）酮癥1、概念：酮體：乙酰乙酸、β-羥丁酸及丙酮三者統(tǒng)稱為酮體20%78%2%酮血癥：酮體形成過(guò)多引起血中含量增高，稱為酮血癥。酮體形成過(guò)多的原因糖尿?。禾菙z取不足：脂肪動(dòng)員糖原貯積病：脂肪動(dòng)員堿中毒：代償15（四）半乳糖血癥1、概念：

半乳糖血癥是機(jī)體不能轉(zhuǎn)化利用半乳糖及其中間代謝產(chǎn)物的一種常染色體隱性遺傳病，主要特征為血和尿中半乳糖增高。2.臨床表現(xiàn)：酶缺乏導(dǎo)致半乳糖和半乳糖-1-磷酸沉積在肝臟、腎臟、眼晶狀體和紅細(xì)胞中，引起相應(yīng)的病變。16血糖測(cè)定測(cè)定血糖的標(biāo)本以血漿最為方便，測(cè)得結(jié)果最可靠。一般情況下全血葡萄糖濃度比血漿低10％-15％，毛細(xì)血管血樣與靜脈血樣二者的測(cè)定值在空腹時(shí)無(wú)區(qū)別，但餐后1小時(shí)血樣，二者可相差2.27±0.66mmol/L。測(cè)血糖的血漿可取空腹、進(jìn)食一小時(shí)或隨機(jī)取血，一般采用空腹血樣本。17

血糖測(cè)定一、測(cè)定方法

無(wú)機(jī)化學(xué)法有機(jī)化學(xué)法酶法18（一）無(wú)機(jī)化學(xué)法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的還原性（二）有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法、聯(lián)苯胺法、氨基聯(lián)苯法等Cu2+OH-Cu+Glu磷鉬酸顯色鄰甲苯胺+Glu葡萄糖基胺希夫氏堿藍(lán)綠色化合物縮合脫水分子重排特異性差干擾因素多（三）酶法（1）己糖激酶法（HK）（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）19

葡萄糖＋ATP

ＨＫ葡萄糖-６-磷酸＋ADP

葡萄糖-6-磷酸＋NADP＋G-6-PD６-磷酸葡萄糖內(nèi)酯+NADPH

NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加與標(biāo)本中的葡萄糖濃度成正比。原理：評(píng)價(jià)：本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動(dòng)化分析，為葡萄糖測(cè)定的參考方法，但是試劑較貴。１、己糖激酶法（ＨＫ法）

20

操作簡(jiǎn)單，特異性較高，是血糖測(cè)定的首選方法．但溶血（血紅蛋白）、四環(huán)素、尿酸、Vc、膽紅素、

GSH可引起測(cè)定結(jié)果負(fù)偏差。2、葡萄糖氧化酶法(GOD)原理：

葡萄糖＋O2+2H2OGOD

葡萄糖酸內(nèi)酯＋Ｈ2O2

2Ｈ2O2+4-氨基安替比林+酚POD

紅色醌類化合物+Ｈ2O+O2

評(píng)價(jià)21二、血糖測(cè)定的臨床意義（一）生理性高血糖見(jiàn)于情緒激動(dòng)時(shí)交感神經(jīng)興奮促使腎上腺素等分泌增加，也可見(jiàn)于一次性食入大量糖。

22（二）病理性高血糖1.糖尿病*血糖測(cè)定是糖尿病最簡(jiǎn)單的篩查試驗(yàn)*糖尿病治療效果評(píng)價(jià)*血糖水平監(jiān)控有利于糖尿病患者調(diào)整飲食攝入量和胰島素注射量，對(duì)降低其長(zhǎng)期并發(fā)癥有積極作用。233.顱內(nèi)壓增高:4.脫水引起的高血糖嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。2.內(nèi)分泌腺功能障礙甲狀腺功能、腎上腺皮質(zhì)及髓質(zhì)功能亢進(jìn)等引起的升高血糖的激素分泌過(guò)多出現(xiàn)高血糖。24

葡萄糖耐量試驗(yàn)概念適應(yīng)癥操作方法葡萄糖耐量曲線臨床意義

糖耐量試驗(yàn)25一、糖耐量和葡萄糖耐量試驗(yàn)（一）糖耐量

正常人由于體內(nèi)有一套完善的調(diào)節(jié)血糖濃度的機(jī)制，即使一次攝入大量的葡萄糖，血糖濃度也僅暫時(shí)升高，不出現(xiàn)糖尿，且于2h內(nèi)恢復(fù)到正常血糖水平，此即為耐糖現(xiàn)象。若調(diào)節(jié)功能失調(diào)，口服或靜脈注射一定量的葡萄糖后，血糖急劇升高，在一定時(shí)限內(nèi)不能恢復(fù)到原有水平，此種現(xiàn)象稱為糖耐量降低。反之給予大量葡萄糖后，血糖升高不明顯，或緩慢地輕度上升，稱糖耐量增加。26口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）靜脈葡萄糖耐量試（IGTT）（二）葡萄糖耐量試驗(yàn)

葡萄糖耐量試驗(yàn)是指口服或注射一定量葡萄糖后，每間隔一定時(shí)間測(cè)定血糖水平進(jìn)行分析。臨床常用OGTT，OGTT是一種葡萄糖負(fù)荷試驗(yàn)，用以了解機(jī)體對(duì)葡萄糖的調(diào)節(jié)能力。靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)是測(cè)定糖尿病患者胰島素分泌的反應(yīng)性和能力的試驗(yàn)，但不適用于臨床常規(guī)診斷。271、空腹血糖水平在臨界值（6～7mmol/L)而又疑為糖尿病患者；2、空腹或餐后血糖濃度正常，但有發(fā)展為糖尿病可能的人群；3、以前糖耐量異常的危險(xiǎn)人群；4、妊娠性糖尿病的診斷；5、臨床上出現(xiàn)腎病、神經(jīng)病變和視網(wǎng)膜病而又無(wú)法做出合理解釋者；6、作為流行病學(xué)研究的手段。OGTT試驗(yàn)適應(yīng)癥：二、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)28

試驗(yàn)前三天，受試者每日食物中糖含量不應(yīng)低于150g，且維持正?；顒?dòng)．影響試驗(yàn)的藥物應(yīng)在三天前停用，受試前應(yīng)空腹10～16h.

坐位取血后5分鐘內(nèi)飲入250ml含75g無(wú)水葡萄糖的糖水，妊娠婦女用量為100g，兒童按1.75g/kg體重給予，不超過(guò)75g。糖后每隔30分鐘取血1次，共4次。必要時(shí)可延長(zhǎng)時(shí)間，可長(zhǎng)達(dá)服糖后６小時(shí)。于采血同時(shí)，每隔1小時(shí)留取尿液作尿糖試驗(yàn)。整個(gè)過(guò)程不可吸煙、喝咖啡、喝茶或進(jìn)食。OGTT方法：ＷHＯ標(biāo)準(zhǔn)化

29參考范圍：

空腹血糖＜6.1mmol／Ｌ；服糖后30～60分鐘血糖升高達(dá)峰值，一般＜10mmol／Ｌ；服糖后２小時(shí)內(nèi)恢復(fù)至空腹血糖水平。同時(shí)測(cè)定上述各時(shí)間的尿糖均為陰性。

30臨床意義

糖尿病性糖耐量空腹血糖濃度≥7.0mmol/L，服糖后30～60min血糖急劇升高，峰值超過(guò)10mmol/L，并出現(xiàn)尿糖；隨后血糖濃度恢復(fù)緩慢，2h后仍高于空腹水平。

31臨床意義糖耐量受損空腹血糖濃度＜7.0mmol/L，但2h血糖≥7.8mmol/L，＜11.1mmol/L為糖耐量減退（IGT）；空腹血糖濃度≥6.1mmol/L，但＜7.0mmol/L，2h血糖＜7.8mmol/L為空服血糖損害（IFG）。

32曲線繪制：一般應(yīng)有5次測(cè)定結(jié)果。以測(cè)定血糖的時(shí)間為橫坐標(biāo)（空腹時(shí)為0h），血糖濃度為縱坐標(biāo)，繪制曲線。33（三）口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）3435三、妊娠期糖尿病*診斷方法：

在孕24～28周內(nèi)，口服50g葡萄糖后，測(cè)定1小時(shí)血糖濃度,若在7.8mmol/L以上者，則提示妊娠性糖尿病的可能性，應(yīng)作OGTT：測(cè)定空腹血糖濃度，糖負(fù)荷量100g，然后每小時(shí)檢測(cè)一次血糖濃度，連續(xù)3小時(shí)。*診斷標(biāo)準(zhǔn)：空腹＞5.8mmol/L、1h＞10.5mmol/L、2h＞9.2mmol/L、3h＞8.0mmol/L，2個(gè)結(jié)果超過(guò)以上檢測(cè)值，方可診斷為妊娠性糖尿病。36三、妊娠期糖尿病指在妊娠期間任何程度的糖耐量減退或糖尿病發(fā)作，不論是否使用胰島素或飲食治療，也無(wú)論分娩后這一情況是否持續(xù)。在分娩6周后，應(yīng)復(fù)查血糖水平和糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)重新確定。37四、糖尿病診斷程序7.87.87.838實(shí)驗(yàn)三口服葡萄糖耐量試驗(yàn)

(葡萄糖氧化酶法)39實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握葡萄糖氧化酶法測(cè)定血清(漿)葡萄糖的原理及測(cè)定的一些注意事項(xiàng)。2熟悉口服葡萄糖耐量試驗(yàn)曲線的繪制及臨床意義。40葡萄糖氧化酶法測(cè)定血清(漿)葡萄糖的反應(yīng)原理葡萄糖+2H2O+O2

GOD

葡萄糖酸+2H2O2

H2O2+4-AAP+苯酚POD紅色醌化物+H2O生成物顏色深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比。

41實(shí)驗(yàn)儀器及試劑試管、移液管、分光光度計(jì)、恒溫水浴箱酶試劑：葡萄糖氧化酶（GOD）、過(guò)氧化物酶（POD）、4-氨基安替比林（4-AAP）酚試劑：苯酚標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：100mg/dL(5.55mmol/L）42操作步驟加入物 空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本管蒸餾水（ul）20 ————標(biāo)準(zhǔn)液（ul）—— 20——-樣本（ul）————20酶工作液（ml)3.03.03.0混勻，37℃孵育20min，以空白管調(diào)零，505nm波長(zhǎng)處測(cè)定各管吸光度值(A)。43計(jì)算

血糖濃度（mmol/L)=A樣/A標(biāo)×標(biāo)準(zhǔn)液濃度

(5.55mmol/L)單位換算：葡萄糖mmol/L×18=葡萄糖mg/dL44實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1.分離血清要求使用未溶血樣品，否則測(cè)定結(jié)果偏大。2.要求在30min內(nèi)分離血清，糖酵解在全血中以7%/h進(jìn)行。3.樣本在4℃-8℃