沉降菌測(cè)試方法

--沉降菌測(cè)試方法1、把ф90mm×15mm硼硅酸玻璃培育皿包在報(bào)紙里，放入恒溫烤箱中18022、取*克培育基放入*克蒸餾水，放入高壓消毒鍋中加熱溶化，冷至45℃15ml。33348假設(shè)培育基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可采樣用。制備好培育皿宜在2—8℃環(huán)境中保存。4100級(jí)層流罩中放置31000001000020.53348小時(shí)，采樣點(diǎn)0.8m—1.5m5、將培育皿舉起用肉眼直接計(jì)數(shù)，用記號(hào)筆點(diǎn)記然后用5—10倍放大鏡2222淀物區(qū)分。6靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必需掌握在規(guī)定值，測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測(cè)試狀態(tài)選擇須符合生產(chǎn)要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。7、測(cè)試人員必需穿戴符合環(huán)境干凈度級(jí)別工作服，靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室測(cè)試人210030min8、平均菌落數(shù)計(jì)算：M+M+M1 2 31M1

M Mn.........2n2n—培育皿總數(shù)M—11M—22M—nn用平均菌落數(shù)推斷干凈空氣中微生物。干凈室平均菌落數(shù)必需低于所選定100110000≤310000010*干凈室平均菌落數(shù)超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)，則必需對(duì)此區(qū)域先進(jìn)展消毒，然后重采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格。人員進(jìn)出干凈生產(chǎn)區(qū)的一般程序：換脫洗換脫洗穿工手氣或吹干鞋外手潔作消閘空淋凈套凈服毒室氣室生出人員進(jìn)出無(wú)菌操作干凈生產(chǎn)區(qū)程序：

單旁門(mén) 產(chǎn)無(wú)潔菌凈操生作產(chǎn)區(qū)無(wú)潔菌凈操生作產(chǎn)區(qū)進(jìn) 洗 氣氣出 換 脫 脫

穿 手 穿 換 手臉 閘吹醫(yī)療器外干凈內(nèi)測(cè)：

消 無(wú) 無(wú) 消室淋套 衣 菌 毒 菌 菌 毒腕 或室監(jiān)測(cè)工程 技術(shù)指標(biāo)內(nèi) 外監(jiān)測(cè)法 監(jiān)頻次100級(jí) 10000級(jí) 100000級(jí) 30000級(jí) 衣溫度〔℃〕 18℃—28℃ 1次/班相對(duì)濕度% 45~65 1次/班水平層流風(fēng)速m/s ≥0.4 —————— JC垂直層流 1次/月≥0.3換氣次數(shù) ——≥20 ≥15 ≥12 1次/月靜壓差Pa 不同級(jí)別干凈室及干凈室與非干凈室之間≥5干凈室與室外大氣≥101/月沉降菌數(shù)≤1 ≤3≤10≤15GB/T16294-1996 1/周附錄C〔資料性附錄〕干凈室〔區(qū)〕沉降菌技術(shù)要求干凈室〔區(qū)〕沉降菌技術(shù)要求澳大利亞TGACGMPEUCGMPl美國(guó)FDACGMP藥品生產(chǎn)質(zhì)量治理規(guī)(2023816(20232〔20239〔1998修訂〕φ90mmCFU/4haφ90mmCFU/4haφ90mmCFU/4ha沉降菌/皿，0.5h100A＜1A＜1＜1≤1-B≤5B≤5≤3〔1000-10000C≤50C≤50≤5≤3100000D≤100D≤100≤50≤10干凈度級(jí)別干凈度級(jí)別為培育皿暴露時(shí)間不超過(guò)4h，以平均菌落數(shù)表示。100操作，防止微生物污染。1180℃，22蒸餾水，煮沸，搖勻，分裝至適宜的容器中，瓶塞封口，滅菌。硫乙醇酸鹽流3348改進(jìn)馬丁培育基〔真菌247215ml，分裝幾個(gè)皿來(lái)計(jì)算，滅菌。0.9%730.9%氯化鈉試管中搖勻，作1010-7，然后從10-5、10-6、10-71ml，分別放入標(biāo)號(hào)5*、6*、7*100cfu4、操作時(shí)，應(yīng)用適當(dāng)?shù)南疽簩?duì)供試品外表或外包裝擦拭消毒后，以無(wú)菌方法取容物。取供試品3只接種于足以浸沒(méi)供試品的適量培育基中。一只瓣膜11ml,作陽(yáng)性比照，122支試管作空白比照。硫乙醇酸鹽流體培育基置33℃2448514假設(shè)供試品管勻澄清，判供試品符合規(guī)定；假設(shè)供試品管中任何一管顯渾濁并有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。細(xì)菌毒素試驗(yàn)步驟：1、預(yù)備工作：移液管：0.1ml11ml10試管：10ml×4240ml22試驗(yàn)所用器皿需經(jīng)處理除去可能存在的外源性毒素，玻璃器皿置電熱枯燥180210ml×4110EU鱟試劑 同一批號(hào)3支瓣膜浸提介質(zhì)：細(xì)菌毒素檢查水L

=8.6〔ml〕8.6×3=25.8〔ml〕把細(xì)菌毒素檢查水4支外表擦凈翻開(kāi)，倒入燒杯中，用移液管取25.8ml337℃恒溫培育箱中，1.52注：V-浸提介質(zhì)體積，單位為毫升〔ml〕L-產(chǎn)品細(xì)菌毒素限值，單位為細(xì)菌毒素單位每毫升〔EV/ml〕λ-所用鱟試劑靈敏度標(biāo)示值，單位為細(xì)菌毒素單位每毫升〔EV/ml〕2、細(xì)菌毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌毒素檢查水1ml溶解，在旋渦混合器上混150.1ml0.9ml檢查水在旋渦混勻器上混勻30秒鐘。10.5ml0.5ml300.1ml0.9ml供試液在旋渦混勻器上混勻30秒鐘。30.5ml0.5ml303、把80.1ml細(xì)菌毒素檢查水，在旋渦器上混勻，其中222支作陽(yáng)性比照管，20.1ml0.1ml0.1ml0.1ml37±160±2然后取出觀看結(jié)果，試管在孵育期間應(yīng)防止任何振動(dòng)。4、結(jié)果推斷：將試管從水浴箱中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180假設(shè)管形成凝膠，并且凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性〔＋堅(jiān)實(shí)，變形并從管壁滑脫者為陰性〔－供試品陽(yáng)性比照管均為陽(yáng)性，試驗(yàn)有效，否則無(wú)效。假設(shè)陰性比照管為陽(yáng)性，說(shuō)明鱟試劑或檢查水或試驗(yàn)器具受污染；假設(shè)陽(yáng)性比照管為陰性，說(shuō)明鱟試劑或標(biāo)準(zhǔn)毒素已失效，或鱟試劑靈敏度及標(biāo)準(zhǔn)毒素效價(jià)標(biāo)示不準(zhǔn)確或標(biāo)準(zhǔn)毒素稀釋有誤。供試品陽(yáng)性比照管為陰性，說(shuō)明反響體系有抑制反響干擾因素存在。一、氯化物1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1mol/L1.6987g分析純硝酸銀，定溶至100ml中，避光保存，貼標(biāo)簽。2、取樣，量取50ml2份〕倒入試管中，加51ml二、硫酸鹽1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取5±0.5g100ml容量2、分析：取樣50ml22ml得發(fā)生渾濁。三、鈣鹽1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液：3.5g100ml250ml22ml不得發(fā)生渾濁。四、二氧化碳1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.3g100ml1225ml225ml11五、易氧化物13.31050ml，151000ml2搖勻，標(biāo)定其濃度。②稀硫酸：取分析純硫酸〔98%〕57ml57ml1000ml，放涼再用〕2、標(biāo)定：取在1050.2250ml10ml25ml，65℃，30秒鐘不褪；當(dāng)?shù)味ńK了時(shí)，溶液溫度應(yīng)不低于55℃，每1ml高錳酸鉀滴定液〔0.02mol/L〕相當(dāng)于6.70mg草酸鈉，依據(jù)本液消耗量與草酸鈉取用量，算出本液濃度，即得。貯藏：置玻璃塞棕色玻璃瓶中，密閉保存。3、分析：取樣100ml2份〕加稀硫酸10ml，煮沸后，加高錳酸鉀滴定液〔0.02M〕0.10ml10六、氨1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液①納氏試劑：稱(chēng)取60g氫氧化鉀，溶于約250ml外稱(chēng)取20g100ml10拌，到消滅少量朱紅色沉淀不易溶解時(shí)，停頓滴加飽和二氯化汞溶液，然后把該溶液緩慢注入上述已冷卻的氫氧化鉀溶液中，邊注入邊攪拌，并用無(wú)氨水稀釋至400ml，然后靜置過(guò)夜。最終將該溶液上清液至聚乙烯塑料瓶中，常溫避光保存。②氯化銨溶液：稱(chēng)取分析純氯化銨0.0315g，定溶至1000ml〔0.0032g100ml〕容量瓶中，轉(zhuǎn)入中保存，貼標(biāo)簽。250ml，2ml151.5ml48ml2ml0.00003%〕七、重金屬1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液PH=3.5〕稱(chēng)取分析純醋酸銨25g，加蒸餾水25ml用鹽酸液[2mol/L0.0073g100ml定溶)]準(zhǔn)確調(diào)整PN3.5〔電位計(jì)100ml，倒入待用。②硫代乙酰胺溶液：稱(chēng)取硫代乙酰胺4g，加水溶解成100ml，置冰箱中保存。臨用前取混合液[由1mol/L氫氧化鈉〔氫氧化鈉4克＋100ml蒸餾水〕15ml，5.0ml20ml]5.0ml1.0ml20③鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱(chēng)取1100.1598g1000ml5ml50ml100ug/ml。臨用前，準(zhǔn)確量取鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液稀釋至所需濃度。2、分析：取樣40ml2ml2ml，搖238ml2ml2ml酰胺2ml，比照顏色；40ml0.00005%〕八、不揮發(fā)物：1200ml2105℃枯燥箱中。3403400.32、用移液管量取100ml樣品水，放入恒重的蒸發(fā)皿中，水分在水浴鍋上蒸干，同時(shí)做蒸餾水平行樣。3、第一次：把蒸發(fā)皿放進(jìn)枯燥箱中烘烤340鐘，天平稱(chēng)重，記錄。240重，記錄。4、殘?jiān)?jì)算公式：W=[(W12－W11)－(W02－W01)]×1000W-蒸發(fā)殘?jiān)|(zhì)量mgW11-未參與檢驗(yàn)液蒸發(fā)皿質(zhì)量gW12-參與檢驗(yàn)液蒸發(fā)皿質(zhì)量gW01-未參與空白液的蒸發(fā)皿質(zhì)量gW02-參與空白液的蒸發(fā)皿質(zhì)量g九、酸堿度1、配制標(biāo)準(zhǔn)試劑:0.05mol/L0.05mol/L40=2g=0.2g/100ml0.2g100ml。200ml變色圍：PH4.2-6.34-6溴百里香藍(lán)：稱(chēng)取溴百里香酚藍(lán)0.1g，加3.2ml200ml變色圍：PH6.0-7.6〔黃-藍(lán)〕210ml，2滴，不得顯紅色，取樣10ml，5PHPH參比電極的酸度計(jì)進(jìn)展測(cè)定。酸度計(jì)應(yīng)定期進(jìn)展計(jì)量檢定，并符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定。測(cè)定前，應(yīng)承受以下標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器，也可用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)治理部門(mén)發(fā)放標(biāo)示PH0.01PH1、儀器校正用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液115℃±52-310.21g1000ml〔25℃PH=4.00115℃±52-3二鈉3.55g與磷酸二氫鉀3.40g，加水使溶解并稀釋至1000ml(25PH=6.86⑶硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：精細(xì)稱(chēng)取硼砂3.81g(留意，防止風(fēng)化)加水使溶解并稀釋至1000ml置聚乙烯塑料瓶中，密塞，防止空氣中二氧化碳進(jìn)入〔25℃PH=9.182、本卷須知：PH3個(gè)PH單位標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，并使供試液的PH⑵取與供試液PH儀器示值與表列數(shù)值全都。⑶儀器定位后，再用其次種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液核對(duì)儀器示值，誤差應(yīng)不大于±0.02PH液的表列數(shù)值相符。重復(fù)上述定位與斜率調(diào)整操作，至儀器示值與標(biāo)準(zhǔn)緩沖液規(guī)定數(shù)值相差不大于0.02PH單位，否則，需檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。⑷每次更換標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或供試液前，應(yīng)用純化水充分洗滌電極，然后將水吸盡，也可用所換的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或供試液洗滌。PH5.5-7.0。243、操作：15溶液。⑵測(cè)定前，分別用鄰苯二甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液4.0校正后，用蒸餾水清洗探頭，用濾紙毛邊輕輕沾一沾。用磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液6.869.18合格。之后用蒸餾水清洗探頭，把裝滿飽和溶液的探頭帽蓋上，拔掉電源，將電極放回盒中。環(huán)氧乙烷殘留量分析-比色分析法1、原理：環(huán)氧乙烷在酸性條件下水解成乙二醇，乙二醇經(jīng)高碘酸氧化生成甲醛，甲醛與品紅-亞硫酸試液反響產(chǎn)生紫紅色化合物，通過(guò)比色分析可求得環(huán)氧乙烷含量。2、溶液配制：0.1mol/L0.9ml100ml高碘酸溶液〔5g/L0.5g100ml100g/L10.0g100ml品紅-亞硫酸試液：稱(chēng)取0.1g堿性品紅，參與120ml1020ml2ml50ml30ml，0.5ml乙二醇，快速參與瓶中，搖勻，準(zhǔn)確稱(chēng)重。兩次稱(chēng)重之差即為溶液中所含乙二醇的含量。加水至刻度，混勻計(jì)算其濃度：C=m×501000C-乙二醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液濃度，克/升m-溶液中乙二醇質(zhì)量，克1.0ml1000ml3、模擬使用浸提法：⑴浸提介質(zhì)：用水作為浸提介質(zhì)。37℃浸提。1⑷浸提外表：器械與藥液或血液接觸外表。4、試驗(yàn)步驟：⑴取5支納氏比色管，分別準(zhǔn)確參與0.1mol/L鹽酸2ml，再準(zhǔn)確參與0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml10.1mol/L2ml5g/L〕0.4ml，搖勻，放置1然后分別滴加硫代硫酸鈉溶液至消滅黃色恰好消逝，再分別參與品紅-亞硫酸試液0.2ml，用蒸餾水稀釋至10ml，搖勻，35℃-37℃條件下放置1小時(shí)，于560nm2.0ml于納氏比色管中，以測(cè)得吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試液相應(yīng)的體積。5、結(jié)果計(jì)算：環(huán)氧乙烷殘留量用確定含量或相對(duì)含量表示環(huán)氧乙烷確定含量：W =1.775VCMEO 1W -單位產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷確定含量EOM-單位產(chǎn)品質(zhì)量C-乙二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液深度1V-標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出供試液相應(yīng)體積環(huán)氧乙烷相對(duì)含量：C =1.775VC×103EO 1C -單位產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷相對(duì)含量EOC-乙二醇溶液濃度1V-標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出供試液相應(yīng)體積化學(xué)試驗(yàn)室平安制度：1、試驗(yàn)室人員要生疏試驗(yàn)室及四周環(huán)境，清楚水電開(kāi)關(guān)位置，懂得消防器具使用方法，一旦發(fā)生事故，應(yīng)實(shí)行相應(yīng)措施。2、試驗(yàn)室各類(lèi)化學(xué)試劑要依據(jù)其性質(zhì)分類(lèi)，定置存放，標(biāo)記清楚，擺放整齊，用量嚴(yán)格依據(jù)規(guī)定量。3、各種試劑、容器要帶有書(shū)寫(xiě)清楚標(biāo)簽，防止拿錯(cuò)、用錯(cuò)，吸取各溶液時(shí)要用橡皮吸球，嚴(yán)禁用嘴吸，易燃、易爆試劑要遠(yuǎn)離火源，使用腐蝕性藥品應(yīng)留神，防止沾在衣服或皮膚上。4、試驗(yàn)室排風(fēng)設(shè)備應(yīng)保持通暢。5、試驗(yàn)完畢后，應(yīng)準(zhǔn)時(shí)洗滌所用器皿，整理好試驗(yàn)用品。6、試驗(yàn)后認(rèn)真整理試驗(yàn)記錄，處理試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)。7、離開(kāi)試驗(yàn)室前，務(wù)必進(jìn)展水電門(mén)窗平安檢查，鎖好門(mén)方可離開(kāi)。生物檢測(cè)室平安制度：1、試驗(yàn)用過(guò)培育基、試管、吸管用品須經(jīng)有效消毒處理前方可丟棄或清洗。2、操作儀器時(shí)不得超負(fù)荷、超量使用。凡有過(guò)熱、冒煙、特別氣味和特別聲音等現(xiàn)象應(yīng)馬上切斷電源，停頓運(yùn)行，查找緣由。3、試驗(yàn)儀器設(shè)備啟動(dòng)后，工作人員要堅(jiān)守崗位，凡連續(xù)工作儀器設(shè)備須專(zhuān)人看管。4、每日上班后檢查冰箱、恒溫箱工作狀況，下班檢查水、電、門(mén)、窗，確保平安。5、試驗(yàn)室應(yīng)備小型滅火器，每人應(yīng)會(huì)使用。生物室藥典一部 高壓消毒鍋恒溫培育箱2臺(tái) 旋渦混合儀恒溫水浴箱 電熱鼓風(fēng)枯燥箱冰箱