分-子-生-物-學(xué)實驗報告

分子生物學(xué)實驗報告2011級生物科學(xué)師范組長：組員：從甘薯中克隆ADK基因的核心片段（西南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，重慶400715）摘要：甘薯為我國農(nóng)業(yè)主要栽培作物，并且是分子生物學(xué)實驗室常見材料，本次實驗主要以甘薯葉片（部分為莖）為實驗材料，第一次實驗從材料中提取RNA并反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈，經(jīng)PCR擴增得到大量ADK基因核心片段，電泳檢測膠回收ADK基因核心片段，將其與T載體相連并導(dǎo)入大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞中，擴增之后在加有相應(yīng)抗生素的LB平板上篩選陽性克隆，這對后續(xù)生物信息學(xué)分析等有重要意義。第二次實驗是用CTAB法提取甘薯DNA，PCR擴增再凝膠電泳檢測純度。（提取DNA也能擴增出ADK基因核心片段）關(guān)鍵詞：甘薯、PCR技術(shù)、腺苷酸激酶片段（ADK）、基因克隆、轉(zhuǎn)化Abstract:Sweetpotatoformyagriculturalmaincultivationcrop,andismolecularbiologylaboratorycommonmaterial,thistimesexperimentmaintosweetpotatoleaves(partforstems)forexperimentmaterial,firsttimesexperimentfrommaterialintheextractionRNAandreverserecordedcDNAfirstchain,byPCRspreadincreasedgetlargeADKgenecorefragments,electrophoresisdetectionrubberrecyclingADKgenecorefragments,willitsandtcarrierconnectedandimportEscherichiacoliDH5(feelStatecellinthe,spreadincreasedinplushascorrespondingantibioticsofLBTabletShangfilterpositivecloneThisimportancetosubsequentbioinformaticsanalysis.ThesecondexperimentwasextractedbyCTABmethodDNA,PCRamplificationandgelelectrophoresisandpurityofsweetpotato.(ExtractionofcorefragmentofDNAcanbeamplifiedADKgene)keywords:sweetpotato;PCRtechnologies;AdenylateKinaseGene(adk);geneclone;transformation綜述1.1甘薯2.2方法2.2.1植物RNA的提取及檢測及反轉(zhuǎn)錄植物RNA的提取實驗方法參見總RNA提取試劑盒說明書。反轉(zhuǎn)錄過程如下：1.在離心管中加入2ulRNA，2ul引物，2ulSuperPureDntps,8.5ulRNase-FreeddH2O2.70℃水浴加熱5分鐘后，冰上冷卻2分鐘，再進(jìn)行簡短離心3.加入4ulBuffer，0.5ulRNasin4.加1ulTIANScriptM-MLV,輕輕用移液器混勻注意事項如下：1.第一次離心過后，吸取上清液400ul另一離心管中，呈淡粉色。2.共經(jīng)過7次離心，均為常溫離心，每次離心后加入的試劑不同，需細(xì)心。3.簡短離心的步驟與正常離心不同，控制時間2.2.2PCR擴增adk基因核心片段（1）在2個50ul的PCR反應(yīng)管中依次加入如下組分:PCR反應(yīng)體系：1)MiniQH2O39.5μl2)10×PCRbuffer（含Mg離子）5μl3)10mMdNTPmix1μl4)引物1(10μM)F-ADK 1μl5)引物2(10μM)R-ADK1μl6）Taq(2to5units/ul)0.5μl7)模板(DNA)2μl總體積50.0μl（2）短暫離心混勻各組分后，將PCR反應(yīng)管放入PCR儀。PCR反應(yīng)的程序如下:Ⅰ）94℃4minⅡ）94℃45s；56℃45s；72℃1min（33個循環(huán)）Ⅲ）72℃8minⅣ）4℃保存（3）將PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測，并拍照記錄實驗結(jié)果。2.2.3膠回收adk基因片段和連接T載體及大腸桿菌的培養(yǎng)1）膠回收adk基因片段按照提供的普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒—-離心柱型中所述的方法對已檢測并可使用的adk基因片段進(jìn)行回收1.柱平衡步驟：向吸附柱CA2中加入500ul平衡液BL,12000rpm(～13400×g)離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。2.將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下放入干凈的離心管中，稱取重量。3.向膠塊中加入3倍體積溶膠液PN，因為凝膠重為0.1g，其體積可視為100ul，以此類推。50℃水浴放置10分鐘，期間不斷溫和的上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。4.將上一步所得溶液加入另一個吸附柱CA2中室溫放置2分鐘，12000rpm（～13400×g）離心30～60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CA2放入收集管中。5.向吸附柱CA2中加入700ul漂洗液PW，12000rpm（～13400×g）離心30～60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CA2放入收集管中。6.向吸附柱CA2中加入500ul漂洗液PW，12000rpm（～13400×g）離心30～60秒，倒掉收集管中的廢液。7.將吸附柱CA2放入收集管中，12000rpm（～13400×g）離心2分鐘，盡量出去漂洗液。將吸附柱CA2置于室溫放置數(shù)分鐘，徹底晾干。8.將吸附柱CA2放到一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加30ul洗脫緩沖液EB，水浴37℃2分鐘。12000rpm（～13400×g）離心2分鐘收集DNA溶液。2)連接T載體1.在200ulEP管中加入下列組分：PMD-19TVector0.5ulInsertDNA4.5ulSolutionⅠ5ul2.輕輕混勻，16℃連接30分鐘3）大腸桿菌搖床培養(yǎng)部分同學(xué)在老師指導(dǎo)下已完成2.2.4DNA的提取及大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備1）DNA的提取1、向10ml離心管中預(yù)先加入4mlCTAB抽提液及相應(yīng)量的β-巰基乙醇（2%-3%），65℃預(yù)熱；2、取適量的植物甘薯嫩葉用液氮充分磨成粉末，轉(zhuǎn)入該10ml離心管中，迅速混勻。3、于65℃水浴45min，中途間隔（輕柔）顛倒混勻三次或四次；4、冷至室溫后加入等體積(4ml)氯仿，輕柔顛倒混勻使乳化10min；5、10000轉(zhuǎn)／分離心10min（18-20℃）；6、吸取上清3-4ml于另一干凈的10ml離心管中；7、吸取上清加入與上清液等體積且已于-20℃預(yù)冷的異丙醇，顛倒混勻，室溫放置15分鐘至白色絮狀沉淀出現(xiàn)；8、用玻璃鉤子挑出DNA，放入盛有1ml75%乙醇的1.5mlEppendorf管中9、用75%乙醇中漂洗DNA沉淀，用Tip頭吸干乙醇；10、用1ml75%乙醇再漂洗一次；11、用無水乙醇再漂洗一次；12、沉淀于室溫或60℃以下的恒溫箱中干燥片刻至剛出現(xiàn)半透明；13、用500μlTE溶解沉淀，可用65℃水浴助溶，得DNA粗提物。14、取10μlDNA電泳檢查DNA的質(zhì)量；2）大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備1.將1ml過夜培養(yǎng)菌液移入50mlLB培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)至OD值為0.3-0.62.取培養(yǎng)液3ml轉(zhuǎn)入10ml無菌離心管中，于4℃4000r／min離心10min，去上清3.沉淀用3ml預(yù)冷的0.1MCaCl2懸浮，與冰上放置30分鐘；4.4℃，4000r／min離心10min，去上清；5.沉淀用600μl冰冷的0.1mo1／LCaCl2溶液，小心懸浮細(xì)胞6.分裝3管，每管200μl，冰上放置30分鐘2.2.5連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化、篩選及PCR檢測1.將10μlDNA的連接物加入一管感受態(tài)細(xì)胞中，混勻后放置冰上30分種；2.42℃水浴中熱激恰恰90sec，迅速取出立即放于冰上2min，室溫下放置3-5min；3.加入800ml37℃預(yù)熱的LB液體培養(yǎng)基，混勻后37℃180rpm培養(yǎng)0.5h4.4000rpm離心10min，去800ml上清液，將剩余的200ml菌液混勻；5.用燒烤過的涂布棒將100ml的菌液涂布于加相應(yīng)抗生素的LB固體培養(yǎng)基涂勻，共2個6.置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)2.2.6連接產(chǎn)物的篩選及PCR檢測1.選取平板上合適菌落，標(biāo)記備用（共4個）2.用10μl移液器槍頭對準(zhǔn)所選菌落刮取，置于裝有1ml溶液的EP管中3.將EP管進(jìn)行搖床培養(yǎng)4，PCR檢測3.實驗結(jié)果與分析3.1甘薯RNA的提取及檢測+反轉(zhuǎn)錄圖1-2總RNA的電泳圖（末）圖1-1總RNA的電泳圖（初）圖1-2總RNA的電泳圖（末）圖1-1總RNA的電泳圖（初）結(jié)果分析：RNA極易被RNA酶降解，而RNA酶在自然界中廣泛而豐富的存在，因此要取得本次實驗的成功關(guān)鍵之處在于嚴(yán)格防止RNA酶的污染。此外，為了達(dá)到更佳的效果，實驗選用的材料是甘薯嫩葉，因為其RNA含量豐富，但實驗中能否研磨充分，也會對實驗結(jié)果造成影響。從RNA電泳的結(jié)果來看，我們組在該次實驗中較好地做到了這兩點，因此獲得的條帶不僅區(qū)分度好，亮度也高。在實驗中共進(jìn)行了兩次紫外檢測，首次檢測是在預(yù)期時間后，但發(fā)現(xiàn)RNA條帶跑的不是很開（如圖1-1），分析原因是配制瓊脂糖凝膠時膠濃度比期望濃度大，致使RNA遷移速率減慢，因而電泳時間相對延長。由于在電場中核酸分子的遷移速率取決于分子量大小和空間構(gòu)型，沉降系數(shù)大的RNA跑得慢，故從上到下的條帶分別代表28S、18S、5.8S（如圖1-2）。從電泳獲得的28S和18S兩條主帶的亮度來看，28S和18SRNA比值約為2:1，符合一般真核細(xì)胞RNA比值。3.2PCR擴增adk基因核心片段圖2PCR擴增adk基因的電泳圖圖2PCR擴增adk基因的電泳圖結(jié)果分析：上次實驗中，我們對獲得的甘薯RNA進(jìn)行了反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA。本次實驗利用上次實驗獲得的cDNA進(jìn)行PCR，所用的10×PCRbuffer、taq是北京普博欣公司生產(chǎn)，而引物1、引物2系華大公司生產(chǎn)（1、2組），其他四組用其他公司生產(chǎn)的試劑盒。從擴增結(jié)果來看，效果均不錯（1-4組擴增的是adk基因，5、6組擴增的是adk核心片段，故結(jié)果有所差異）。通過與Marker跑出的條帶對比，擴增的目的基因在1000~750bp之間（Marker各條帶從上到下分別表示2000、1000、750、500、250、100，后面3個不太明顯）。本次實驗每個組共做了2個50μL反應(yīng)體系，但待加完所有試劑后，很多體系的體積明顯不同，分析原因可能是在操作過程中使用移液槍出現(xiàn)問題，或是移液槍本身有誤差。3.3目的基因片段的回收、連接上次實驗我們擴增到了甘薯adk目的基因，并進(jìn)行了電泳，得到了單一目的DNA條帶，本次實驗將該目的DNA條帶切下，進(jìn)行膠回收和T載體連接。實驗進(jìn)行順利。根據(jù)時間安排，本次連接過夜，是連接更加完全。3.4DNA的提取、大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備、連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化3.4.1DNA的提取圖4-1提取DNA結(jié)果圖圖4-2提取DNA的電泳圖圖4-1提取DNA結(jié)果圖圖4-2提取DNA的電泳圖結(jié)果分析：本次提取DNA使用的材料仍是甘薯，所用植物材料的量和研磨是否充分是影響獲得DNA量多少的兩個主要方面，與其他組相比，我們組提取的DNA量比較充足（如圖4-1所示）。將此DNA沉淀溶解后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，得到3條清晰可區(qū)分的帶，從上向下依次代表蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)、DNA、RNA（如圖4-2所示），較其他組而言，我們組DNA條帶亮度高，說明提取的DNA量多。RNA分帶不明顯，說明有部分降解，但未被降解完全。3.5連接產(chǎn)物的篩選及PCR檢測圖5-2PCR菌檢圖圖5-1連接轉(zhuǎn)化后的E.Coli平板圖5-2PCR菌檢圖圖5-1連接轉(zhuǎn)化后的E.Coli平板結(jié)果分析：我們組的兩個加了氨芐抗生素的LB培養(yǎng)基上共長出了4個大腸桿菌菌落（分給了2組一個），這幾個菌落形狀都比較規(guī)則，判斷是由一個大腸桿菌長成，由于它們能夠在加了氨芐抗生素的培養(yǎng)基上長出，說明它們具有氨芐抗性，說明有T載體導(dǎo)入，但無法確認(rèn)該T載體上是否有我們所需的adk目的基因，還需進(jìn)一步菌檢。由PCR菌檢結(jié)果可知（如圖5-2），該3個菌落雖都是轉(zhuǎn)化子，但3號菌落菌檢無條帶，說明3號菌落是假陽性的，而1、2號菌落則是我們所要得到的菌落。整個分子實驗取得成功。取得這樣的結(jié)果，有一部分運氣在里面，但全組成員在此過程中的嚴(yán)謹(jǐn)操作也是必不可少的重要因素。分子生物學(xué)實驗感想四天的分子實驗結(jié)束了，時間看似漫長，卻也如此短暫，回首這四天的實驗經(jīng)歷，有辛苦，有疲憊，但也不乏成就感和喜悅感，在老師的指導(dǎo)下，和同學(xué)們一起完成實驗，這樣的過程總是那樣美好，讓人留戀，當(dāng)然，實驗過程中收獲到的心得體會對于我來說最為寶貴。作為我們一組的記錄員，說實話，工作有些辛苦，但是我覺得很快樂，這份工作很適合我，也正是我喜歡與擅長的方面。從實驗當(dāng)初的迷茫，到實驗最后的嫻熟，我也不得不佩服自己的耐心與細(xì)心，這是我以前沒有發(fā)現(xiàn)的優(yōu)點，希望以后可以得以施展和加強鞏固。由于做記錄員，工作比較繁雜，所以實驗中我只做些簡單的操作，比如離心、計時等，但對于整個實驗流程我還是比較了解的，這也是記錄員的好處吧！在這方面我的收獲還是蠻大的，至少懂得實驗過程是馬虎不得的，有一步失誤，就可能導(dǎo)致整個實驗的失敗。我們組在整個實驗過程中都很順利，包括后面對菌的培養(yǎng)，長出了四組明顯菌落，并且發(fā)現(xiàn)了2個陽性轉(zhuǎn)化子，這種結(jié)果是我們期待的，同樣也是我們沒有想到的，心里別提有多開心了，感覺這四天的努力沒有白費，一切辛苦都是值得的。以上所說的都是我在實驗中的體會，接下來我想說的是實驗過后我的感想，這些感想比實驗中那些匆匆的心情增加了許多反思與積淀。給我留下最深印象的應(yīng)該是周四那天晚上，也就是實驗結(jié)束，曾老師在講臺上給我們講了一些事情的那堂晚課，記得當(dāng)時實驗結(jié)果還沒出來，曾老師給我們講實驗報告該怎么書寫，其中提到了實驗結(jié)果的問題，曾老師說“實驗失敗了并不可怕，這很正常，不要被這件事影響了心情”，之后又舉了很多他經(jīng)歷的實驗失敗，告訴我們要學(xué)會總結(jié)和反思，說實話，有那么一大段時間我都是眼含淚花地聽著他講話，不時地笑一下回應(yīng)，心里很溫暖，他真的是個好老師，懂得怎么教育學(xué)生，很多老師都會采用批評的口吻總結(jié)課堂，那樣的方式我們早就厭倦了，而他卻用不同的方式告訴了我們真理，這讓我很感動，也很崇拜，即使失敗，老師也還在關(guān)照著我們的內(nèi)心，那份感謝不知怎樣用語言來表達(dá)，我想我會永遠(yuǎn)地記得他的教育方式，來教育我的學(xué)生，用那份寬容來對待我身邊的人。曾老師讓我們對他提一些建議，我只想提一點：希望您繼續(xù)溫暖可愛的孩子們，用您一直寬容的心對待您的學(xué)生們！實驗過程中，有老師幫助，同學(xué)的團結(jié)，有工具、藥劑的陪伴，我感到很幸福，很充實，認(rèn)真對待每一件事，每一個人，正確看待自己，定位未來的道路，相信明天會更好。分子生物學(xué)實驗感想本次實驗我們做了RNA的抽提與檢測、RNA逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA及檢測、PCR擴增目的的基因及檢測、目的基因片段的回收與連接、大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備、連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化和篩選及PCR的檢測及DNA的抽提與檢測。此次為期大概四天，實驗中小組成員都想積極參與，但由于實驗不需要太多人動手，部分人不得不只配和其他組員完成任務(wù)。本次實驗成功不僅僅是小組成員間的合作成果，也是全班各小組共同合作的成果。充分體現(xiàn)了實驗需要團隊合作。我們充分利用時間自覺完成實驗，相對而言效率較高，實驗結(jié)果較為成功。經(jīng)過四天的實驗，我們把DNA,RNA的提取，PCR擴增目的基因，電泳，膠回收目的片段，連接—T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，陽性克隆篩選，PCR鑒定連起來做，感覺能把整個實驗串聯(lián)起來，更有利于實驗知識的學(xué)習(xí)，這幾天實驗做下來心里很踏實，老師要求寫的實驗報告很特殊，我們小組合作的方式完成實驗報告，對實驗知識有進(jìn)一步的加深。思路得到了開闊。實驗過程中，我們把看不見的DNA提取出來了，也得到了PCR等的實驗結(jié)果。在理論中很難理解的東西，實驗后理解起來更容易了。經(jīng)過曾令江老師的指導(dǎo)，實驗中反復(fù)操作后，我們對實驗儀器使用技術(shù)提高了。此次分子生物學(xué)實驗采取集中時間按技術(shù)路線流程完成，不僅節(jié)約時間，更是讓我們更深入的熟悉理解技術(shù)操作原理。相比于其他科目的實驗，每周進(jìn)行一小部分實驗操作，沒有很好地連接起來，分子生物學(xué)實驗更利于我們記憶，效率明顯的有大部分提高。再加上曾老師的悉心指導(dǎo)及包容，幫助我們從失敗的結(jié)果中得出的經(jīng)驗及教訓(xùn)，改正錯誤。從老師身上我們也學(xué)到了細(xì)心，耐心，堅持不懈的實驗精神。這次試驗老師才是最辛苦的人。實驗中我們收獲了很多，不但獲得了實驗的相關(guān)知識，讓我們近距離更直觀的理解了課本上的理論知識，也讓我們加強了實驗的操作技能，更加注意實驗的相關(guān)事項。實驗中要十分嚴(yán)謹(jǐn)并且要積極觀察相關(guān)現(xiàn)象。另外，有點小遺憾就是實驗中人數(shù)太多了，器材不夠，很多同學(xué)沒有真正的參與到實驗的具體操作中來。最后，感謝曾令江老師對本次實驗悉心指導(dǎo)與幫助?！披惪俗巍ね聼峥朔肿由飳W(xué)實驗總結(jié)與體會從5月12日開始到5月15日持續(xù)四天沒有嚴(yán)格作息時間的分子生物學(xué)實驗，也是大學(xué)里最后的一門實驗課結(jié)束了，反而有一點失落，不再整天那么忙碌，不習(xí)慣了。實驗中同學(xué)們都和積極，每節(jié)課都能全勤，并且參與實驗，這一門實驗課是我大三學(xué)年上的最實在的實驗課，跟有的實驗是不一樣的，老師全程陪同、指導(dǎo)，有一個基本思路，技術(shù)路線，使得實驗不再那么茫然，不會給一堆新鮮的實驗儀器，PPTl瀏覽一遍然后就把實驗室扔給我們，最后只要交實驗報告就行了。在本次實驗中，我體會到了實驗以人為本，科研都是為人服務(wù)的，雖然科研工作者都要有為科研獻(xiàn)身的精神，但還是要在實驗中采取措施保護工作者，以免去不必要的人身損失，就比如在用液氮里研磨甘薯葉片，操作者都要用棉手套和一次性塑料手套，防止凍傷；DNA提取中，研磨得到的植物組織粉末和經(jīng)65攝氏度預(yù)熱的試劑溫差太大，加入粉末是，離心管口要朝無人的地方；電泳制膠，染色劑用了GV來替代強致癌劑EB等。實驗在不影響實驗結(jié)果時要節(jié)約資金，做了這么多次實驗分子生物學(xué)實驗室我首次見到了好幾個量筒上半部分無刻度的部分損壞但仍然堅守崗位，還在用于實驗，盡管這只是幾只量筒，足以表現(xiàn)出實驗室管理者節(jié)約的原則。小組實驗重于合作，本次實驗我們組雖然全是女生，但是在大家合理分工相互合作下，實驗還是取得了成功，最后挑出的三個菌落，有兩個都是陽性轉(zhuǎn)化體。并且在兩個實驗第一步研磨植物組織，我們組都率先高質(zhì)量完成。作為師范生，我從曾老師身上學(xué)到了要適時給予學(xué)生鼓勵，在第二個實驗。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化步驟后，培養(yǎng)皿置于恒溫培養(yǎng)箱中7攝氏度培養(yǎng)12到14小時，再去挑菌落篩選的時候，有兩個組培養(yǎng)皿中一個菌落也沒有，然后就從其他組挑取單菌落繼續(xù)實驗，但后續(xù)過程中扔不忘去關(guān)心一下自己組的培養(yǎng)基中有沒有再長出菌落，老師說了一番話讓人心里暖暖的，給予了大家鼓勵，老師說他們起碼是關(guān)心本次實驗的，實驗失敗很正常，只要下去思考了失敗的原因可能比實驗成功的同學(xué)收獲更多，一次實驗的成功與否與運氣也有一點點關(guān)系······制膠、點樣、感受態(tài)細(xì)胞的制備、挑菌落、配PCR反應(yīng)體系等等步驟一個也不能馬虎，在第二次實驗點樣用以跑電泳篩選陽性轉(zhuǎn)化體時，我點第三個孔有點抖，差點把孔捅破，因為前兩個加10微升，都從孔里浸出來了，實驗技能有待提高。另外反應(yīng)體系的制備是不能想當(dāng)然的，用的不同產(chǎn)品，配方、濃度不同加的體積也不一樣，需要慎重，自己計算。建議：實驗的每一步操作需要的人并不多，這樣的分組使得一部分同學(xué)不能很好的參與進(jìn)來，因此個人建議3人左右為一組。分子生物學(xué)實驗總結(jié)與體會2014年5月12日，我們班的分子生物學(xué)開始動手做了。我們先對本門課程的實驗進(jìn)行了一個初步的認(rèn)識：以甘薯葉片為實驗材料，首先進(jìn)行甘薯的總RNA的提取，反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，PCR擴增ADK基因核心片段，電泳檢測膠回收ADK基因片段，然后將目的基因ADK與T載體連接，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，隨后進(jìn)行PCR的檢測篩選陽性轉(zhuǎn)化子，后續(xù)的還有測序及生物信息的分析等就不需要我們做了。有了初步的認(rèn)識和技術(shù)流程的熟悉后，我們下午就開始了實驗。第一天實驗做了甘薯RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈。這是第一次做關(guān)于分子生物的實驗，老師講了原理和注意事項之后，整個實驗在進(jìn)行過程中都非常的安靜。以后的實驗上老師對我們的要求也很嚴(yán)格，所以最后我們每個組基本上都有了結(jié)果。當(dāng)然從效果上看，我們組的效果是最好的：我們挑了三個菌落進(jìn)行檢測，實驗結(jié)果出來我們有兩個是陽性的。在本次實驗中我收獲的東西不僅僅是實驗結(jié)果，收獲更多的是實驗時的一些操作方法（如PCR技術(shù)、凝膠的配制等）和與伙伴們的協(xié)調(diào)配合，還有對實驗結(jié)果的分析等（如果一次實驗失敗了，懂得如何分析出失敗的原因）。通過本實驗，讓我真正地清楚了克隆ADK基因的核心片段整個操作流程，記住了很多主要步驟的原理。當(dāng)然，有收獲也有遺憾的地方，比如：在實驗過程中我容易出現(xiàn)“照方抓藥”的情況，自己并不完全的明白我所做的這一個步驟有什么作用，就跟著實驗指導(dǎo)上的步驟跟著做了，缺乏了很多的思考。所以在今后的學(xué)習(xí)中，希望自己能多學(xué)會思考所做的每一步有什么意義。實驗分組中每個組的人太多，每個組都有5個人或以上，但是在做實驗的時候真正能夠操作的也就是那么兩三個人，這樣的話就會有人空閑下來不知道做什么事。如果是交換著今天你做什么，明天我來做剩下的內(nèi)容。那么這樣的實驗又會出現(xiàn)一個問題，實驗者就無法真正的參與到這一個連續(xù)的實驗中?？倳X得自己有一部分操作沒有做，在腦海中就不會對這一整個實驗有一個較好的連續(xù)的整體。所以建議以后的實驗每個組三個人，最多四個人就夠了。在實驗過程中有很多空閑的時間，我希望我們能夠自