非小細(xì)胞肺癌文獻(xiàn)一篇

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LiquidChromatography/MassSpectrometryMethodsforMeasuringDipeptideAbundanceinNon-SmallCellLungCancer褚曉芳使用液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)分析非小細(xì)胞肺癌患者組織中二肽豐度的變化主要內(nèi)容肺癌簡(jiǎn)介實(shí)驗(yàn)流程樣品處理LC/MS分析MS/MS分析MS數(shù)據(jù)分析質(zhì)量控制統(tǒng)計(jì)分析主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)結(jié)果肺癌相關(guān)二肽數(shù)據(jù)庫(kù)產(chǎn)生肺癌組織中二肽的識(shí)別MS/MS二肽譜圖不同分析條件下二肽的識(shí)別肺癌組織中二肽的靶標(biāo)分析結(jié)論驗(yàn)證研究意義及不足肺癌簡(jiǎn)介在美國(guó)，肺癌死亡率在所有癌癥中最高，2012年共有165000死于肺癌。在全世界范圍內(nèi)，估計(jì)肺癌影響超過(guò)100萬(wàn)人。肺癌中80%是非小細(xì)胞肺癌目前，肺癌早期及進(jìn)展階段仍沒(méi)有靈敏度高的診斷手段肺癌相關(guān)的代謝組學(xué)研究較少肺癌相關(guān)研究肺癌早期的代謝組學(xué)研究表明在腫瘤樣本中有許多代謝物發(fā)生表達(dá)的改變?cè)诓煌熌退幮缘姆伟┘?xì)胞系中，膽堿、脂肪、乳酸、甘氨酸水平有明顯的改變?cè)诎Ａ_替尼治療或進(jìn)行切除手術(shù)的患者中，同側(cè)細(xì)支氣管肺泡癌發(fā)生病變?cè)诜伟┗颊哐搴徒M織樣本的混合物中，有48種代謝物在組織和肺癌不同進(jìn)展階段有明顯改變二肽對(duì)真核生物的作用二肽在蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、增長(zhǎng)及發(fā)展中其重要作用二肽水平通過(guò)肽轉(zhuǎn)運(yùn)體中的膜蛋白調(diào)節(jié)肽轉(zhuǎn)運(yùn)體廣泛存在于大腦、胰腺、腸、腎臟等器官中主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)流程樣品處理LC/MS分析MS/MS分析MS數(shù)據(jù)分析質(zhì)量控制統(tǒng)計(jì)分析樣品處理Testingset:9名確診為肺癌惡性腺瘤的男性樣本:

①有代表性的肺癌組織切片

②與腫瘤組織相鄰的正常組織切片

③距原發(fā)腫瘤＞3cm處的正常組織切片樣品處理Validationset10名確診為肺癌惡性腺瘤的男性樣本:

①有代表性的肺癌組織切片②距原發(fā)腫瘤＞3cm處的正常組織切片樣品狠處理Va事li智da煉ti缺on叼s均et6名確饅診為封肝癌恢的患律者目的:證明綠在非陳小細(xì)除胞肺斗癌患逃者中介找到席的代碌謝物須標(biāo)志物邪具有病特異描性所有瞇樣品郵在分吹離后呀快速抱冷凍30貴-6胸0m練in，處箱理前測(cè)在-8揀0℃保雖存樣品鄉(xiāng)豐處理組織更提?、賹⒈I分離瞎的組叔織稱有重后嫁用不湯銹鋼雁珠同根質(zhì)化梁，頻禍率為20次/s，持源續(xù)30攝s②加遺入標(biāo)目準(zhǔn)溶汁劑混趁合物賭重復(fù)4次同料質(zhì)化頓過(guò)程③用僻蒸汽袍離心愉蒸發(fā)預(yù)濃縮百器干詞燥氯附仿-甲醇-水層叼中的次極性泥代謝蘋物④將技干燥田后的桂樣品撫復(fù)溶對(duì)于水樣品銹處理⑤衍件生化笨：50μL極性萬(wàn)代謝個(gè)提取織物+2投5μL0毒.1柜M的四究硼酸襖鈉緩堵沖液+5脫0μL嘴20憶mM丹磺面酰氯(乙腈欣為溶蒼劑)，渦跟旋混聯(lián)勻丹酰環(huán)衍生躁化目暈的:提高媽代謝兩物檢款測(cè)敏漫感性10杠-1濃00邁0倍提高裁極性偽代謝旦物在村液相窄色譜肝柱上疫的保相留和娛分離⑥室渡溫孵遵育30欄mi障n，加貨入50μL鉤0.盼5%甲酸陡停止放反應(yīng)⑦將鍛反應(yīng)存混合守液上謀層清鬧液轉(zhuǎn)推移至爆自動(dòng)泰采樣衡瓶主要佩內(nèi)容實(shí)驗(yàn)湯流程樣品摔處理LC饒/M倍S分析MS滅/M潔S分析MS數(shù)據(jù)屈分析質(zhì)量籍控制統(tǒng)計(jì)個(gè)分析LS蓄/M拖S工作茂原理局：通過(guò)栽液相魂色譜滅分離誕化合抹物(主要雞是沸叛點(diǎn)高躍、極杠性強(qiáng)咳、熱訴穩(wěn)定賴性差即的化螺合物)，再微通過(guò)端電噴志霧電術(shù)離產(chǎn)控生樣漲品離付子，爪進(jìn)入嚇質(zhì)譜褲儀后竭按質(zhì)王荷比睬分離誓，然饒后測(cè)宇定各私種離新子譜絕峰的愚強(qiáng)度曾而實(shí)志現(xiàn)分威析目餓的。梯度栗洗脫叛裝置:利用場(chǎng)兩種揚(yáng)或兩錢種以惕上溶塘劑，暫按照采一定簽的時(shí)醒間順碼序連泄續(xù)或再階段償改變栗溶劑粘比例換，從磚而改疲變流按動(dòng)相紛的極西性、拍離子緣瑞強(qiáng)度置和PH值，這使樣俱品的州各組潮分在享最佳參容量蛾因子偽值范脆圍內(nèi)購(gòu)流出牲色譜收柱，啦改善艦分離薪效果質(zhì)譜瞧解析廳一般河步驟:核對(duì)逼獲得結(jié)的譜碎圖，梯扣除圈本底佩等因階素引蠅起的耗失真盡可店能判播斷分脫子離覽子，歉即確婦定分掠子質(zhì)妄量;譜圖粱中往連往有呢很多粒碎片杰離子爆，這兇些碎懶片離喘子是贊由準(zhǔn)渴分子緊離子霞裂解給產(chǎn)生假設(shè)掠和排懲列可鏟能的廉結(jié)構(gòu)億歸屬戴，高袖質(zhì)量蔥離子朋顯示鹽的M-股1，M-堂15，M-障18膛……即表致示失倦去H、CH3、H2O…堅(jiān)…推出搭可能浩的分壓子結(jié)崇構(gòu)，棟以標(biāo)鐮準(zhǔn)譜基圖對(duì)諒比，澆確定絮分子涌結(jié)構(gòu)LC蛇/M繁S分析儀器擾：安再捷倫65炒20系列撤四極坊桿飛月行時(shí)喝間串閑聯(lián)質(zhì)象譜儀(帶有哨安捷抬倫12遞90超高公效液哈相色耐譜系蒸統(tǒng))方法A：Zo肝rb回ax罰C18液相扭分析麥柱流動(dòng)異相流疫動(dòng)速臂率5μL澇/m緞in洗脫勁液B:升5%殼-9乞5%濃度冤梯度洗脫斜時(shí)間:3宏0m迅in，95盜%B時(shí)維崇持5m誘inLC傻/M然S分析溶劑A:叨HP豈LC水+0禾.1陵%水溶劑B:寫LC鮮/M贈(zèng)S級(jí)乙秒腈+0紀(jì).1覺(jué)%甲酸毛細(xì)冤管溫率度:3勤25℃m/鋒z1茅0-舟10肌00之間剛進(jìn)行匆全譜午掃描常用蒙固定鴿相:硅膠搶、氨雷基、啄二醇逢基等常用淡流動(dòng)約相:水、惡乙腈弟、異別丙醇LC書/M美S分析方法B:Ph瞞en耽om憶en父ex宗K甲in搖et去ex銷C18液相惕分析磚柱流動(dòng)缸速率0.社5m昌l/堂mi駕n進(jìn)行坑洗脫洗脫券液B:夠5%另-9球5%濃度門梯度T(min)B(%)0.5520.5602595309555LC湊/M何S分析方法C:Ki不ne風(fēng)te賢x液相看分析殘柱流動(dòng)太速率0.旬5m惜l/覽mi萄n進(jìn)行燙洗脫洗脫偷液B:材10版%-漠95昨%濃度掘梯度T(min)B(%)0.5102.52017.560189555主要監(jiān)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)醬流程樣品因處理LC凝/M跳S分析MS腫/M神S分析MS數(shù)據(jù)畏分析質(zhì)量?jī)煽刂平y(tǒng)計(jì)速分析MS刻/M植S分析儀器奇：安惜捷倫65躁20系列肝四極米桿飛素行時(shí)異間串礙聯(lián)質(zhì)瓶譜儀靶向MS貸/M編S分析:保留夠時(shí)間:0回.6米mi丑n離子診碰撞亞能量:2懶6V躬(質(zhì)量六大的紐奉分子:3斯2V鞭)分離嗓寬度:4竄m/賣z為何磁在用LS窄/M冒S分析憲后，命還要?jiǎng)挪捎肕S蛾/M肉S分析茶？LS眾/M乓S譜圖號(hào)中樣木品的性準(zhǔn)分勻子離舊子峰鉛豐度狠較高述，碎故片峰僵則少添而弱身，因紹此主裝要給磨出與刃樣品翻的分挺子質(zhì)娘量相州關(guān)的魂信息飾，而災(zāi)很少勾給出誦與樣詠品結(jié)銜構(gòu)有獻(xiàn)關(guān)的社信息懲，采霜用多脾級(jí)質(zhì)政譜MS浪/M浴S可以艦彌補(bǔ)夜這一險(xiǎn)缺陷哄。主要地內(nèi)容實(shí)驗(yàn)碰流程樣品捐處理LC湖/M急S分析MS凝/M參S分析MS數(shù)據(jù)際分析質(zhì)量啊控制統(tǒng)計(jì)景分析MS數(shù)據(jù)泥分析非靶昨向數(shù)囑據(jù)分豈析:使用帆代謝慚組學(xué)鋤分析失軟件丸提取晝保留腳時(shí)間幫一致查的峰暖，用億最小屯二乘畜法檢積測(cè)非飼靶向敞代謝償物的獨(dú)特征鳴，比股對(duì)特沸征分撞析數(shù)唉據(jù)庫(kù)持識(shí)別貌評(píng)估安的結(jié)熊果。靶向筋二肽弱數(shù)據(jù)燭分析:使用險(xiǎn)二肽傾數(shù)據(jù)擦庫(kù)和私特征足分析抹數(shù)據(jù)撇庫(kù)進(jìn)粉行比碌對(duì)MS數(shù)據(jù)榴分析為什計(jì)么要倒進(jìn)行柔峰對(duì)線齊？為了襯利用圖色譜刮圖中償所有覺(jué)可以心識(shí)別算的峰喊的信洞息，蓋必須戚對(duì)譜掠圖進(jìn)飄行峰搜匹配賽，不笑同樣洪本中壁同一招代謝犧產(chǎn)物苦在生秤成的淡數(shù)據(jù)血矩陣幸中必醋須由寄同一備變量益來(lái)表捆示，艦這樣荷各個(gè)勇樣本狂間的兄?jǐn)?shù)據(jù)底才可漿以比腸較。對(duì)數(shù)尤據(jù)的賴要求葉：①召有相應(yīng)同數(shù)葬目的組變量暗描述管②每作個(gè)變句量在罵樣本噴中均翠出現(xiàn)詞③所勺有樣齒本中樸的變?nèi)柿看贡淼某室饬x過(guò)相同主要密內(nèi)容實(shí)驗(yàn)觸流程樣品擺處理LC稻/M培S分析MS墳/M雄S分析MS數(shù)據(jù)疾分析質(zhì)量短控制統(tǒng)計(jì)估分析質(zhì)量算控制進(jìn)樣例前后糞分析概經(jīng)過(guò)跨衍生察化的26種氨申基酸觸標(biāo)準(zhǔn)甲混合質(zhì)物目的:保證思衍生驚化作缸用有雷效進(jìn)息行檢驗(yàn)鋪儀器院性能肚狀態(tài)帝的良星好保證隔能夠紋獲得題連續(xù)窩的保溪留時(shí)本間主要更內(nèi)容實(shí)驗(yàn)竭流程樣品伴處理LC首/M鉛S分析MS雜/M殺S分析MS數(shù)據(jù)竹分析質(zhì)量壁控制統(tǒng)計(jì)離分析統(tǒng)計(jì)迷分析非參液數(shù)秩滅和檢重驗(yàn):評(píng)估姻腫瘤瓜組織晉與兩菊種正太常組貧織中瞇檢測(cè)堅(jiān)的二購(gòu)肽水死平有腐無(wú)明稼顯變鋸化結(jié)果:沒(méi)有躲相關(guān)守的二夜肽有癥顯著自性差真別二項(xiàng)售分布:在檢申測(cè)的33率4種二天肽中捆有10秤5種有蠅統(tǒng)計(jì)舟學(xué)意水義因3個(gè)樣帖本來(lái)播自同委一個(gè)計(jì)體，鏈故需坦分析任樣本避大小揀對(duì)代棚謝物禍檢測(cè)課結(jié)果齊的影刮響主要墨內(nèi)容實(shí)驗(yàn)當(dāng)結(jié)果肺癌守相關(guān)培二肽械數(shù)據(jù)雜庫(kù)產(chǎn)鈴生肺癌丑組織擾中二膨肽的刻識(shí)別MS穴/M漁S二肽扔譜圖不同沈分析侄條件賽下二板肽的乖識(shí)別肺癌態(tài)組織白中二腐肽的慕靶標(biāo)伙分析結(jié)論裁驗(yàn)證研究叮意義屈及不甘足肺癌如相關(guān)笨二肽爹數(shù)據(jù)晨庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)荒品二勿肽合或成:基于恢組合智合成歲法的胡陣列袋及包勻含組蜻氨酸買的二灘肽，漂不能逗合成慮的二容肽通葵過(guò)Aa要ns另pe呀c脂In營(yíng)t公司性獲得混合盛物配單置:將7-寄30毫微妨升具富有相批同C羧基街端的18種二通肽混啦合并事用50怒%乙腈榨和水肆稀釋攀成10μM，丹為酰衍停生化響后，法采用LC方法B及MS全譜熟掃描肺癌謊相關(guān)原二肽蓮數(shù)據(jù)刑庫(kù)氨基部酸是后生物什樣本誓中唯殿一分稼析物萌，故練用氨題基酸紐奉作為魔標(biāo)準(zhǔn)渡品氨基香酸保貍留時(shí)稱間的狹多項(xiàng)掩對(duì)齊隙是對(duì)胳齊二催肽保掘留時(shí)匪間最延好的縫方法肺癌呈組織從中二濤肽的盛識(shí)別36魄1種二堅(jiān)肽中敵只有16圾1種有勞獨(dú)特廊的化糞學(xué)分遲子式差，只達(dá)有17種是墨單一閃的異域構(gòu)體(A漁A)同分今異構(gòu)焦體二焦肽的慢識(shí)別欠需要欺仔細(xì)盯比較虎其滯寺留特循性合并昂腫瘤杜樣本霉再分秘析得勞到27壘9種二忠肽，觸其中23緒4種二誤肽的陷質(zhì)量逮精度鐵＜5p糞pm，45種＜10啟pp粗m，將27崖9種二歉肽保現(xiàn)留時(shí)奇間與自數(shù)據(jù)裝庫(kù)比浙對(duì)，鉆大部藍(lán)分二旬肽保倆留時(shí)酒間在0.溜1m前in內(nèi)，勞但有且精氨貧酸的澇二肽拾標(biāo)準(zhǔn)筑品和莫樣品擱有明浪顯不叔同MS俘/M掘S二肽隙譜圖丹酰遣化二率肽的MS芹/M族S譜圖逗通常挑不提須供信葵息，忍而主推要以末丹酰神離子添為主由丹莫酰分他離出州來(lái)的C12H12N陽(yáng)離結(jié)子在翠大部津分丹溪?；隙膸r譜圖繞中產(chǎn)愚生基株峰，m/蘇z為17短0.緩09攏6495遙%測(cè)量純值與稿真實(shí)抹值相勝比降馳低(精度繡誤差這小于13桿pp昂m)根據(jù)誼測(cè)量濱值得盛到的稻化學(xué)蒜分子躁式精雹度誤注差都矩在13守pp毅m以內(nèi)MS糟/M著S二肽默譜圖MS馳/M很S二肽喚譜圖其他史丹酰賄特征搶的離碑子還該包括:m/扯z工23秒4.睬05漠9綱(C12H12NS且O2)在單源一帶莖電離乞子中袖普遍督存在贈(zèng)且變到異較影大；m/凝z烈25鼓2.摘06薦9該(C12H14NS略O(shè)3)在含傍氧二寫肽中意普遍謎存在怠；m/責(zé)z揉18稅6.誕09女2扶(C12H12NO劉)離子說(shuō)也很云普遍MS列/M鐮S二肽炮譜圖丹酰桂化二枝肽分過(guò)裂處(經(jīng)典僻離子)MS臂/M高S二肽熱譜圖丹酰掏化二居肽分塊裂特群征碎源片MS擇/M然S二肽儲(chǔ)譜圖MS杜/M指S二肽虛譜圖炕其他乞明顯醫(yī)特征槽：由氨偉基酸I/鍵L/終V/示A組成保的二益肽在淺位1或位2有經(jīng)配典的I離子色氨廁酸的I離子懶會(huì)發(fā)沙生中鉗性分矩子的障喪失園，產(chǎn)拐生m/導(dǎo)z1膽44和13鼻0的特招征性請(qǐng)碎片二肽佳通過(guò)始中性肌丟失(焦谷北氨酸忽鹽)使c離子任增加帶有鏈氨基揀酸R、K、H的二總肽有覽復(fù)雜應(yīng)的特泄征二肽XR、RX使m/釀z為15燒6/裁15言7碎片防增多MS溫/M侄S二肽病譜圖賴氨網(wǎng)酸二尾肽經(jīng)瘦常帶裁雙電恥荷，m/濱z3遭17碎片烘顯著學(xué)，還壩有m/濟(jì)z8封4經(jīng)典等碎片組氨擴(kuò)酸二塑肽也控經(jīng)常共帶雙向電荷少，I1和I2碎片遺離子防較多HX雙電導(dǎo)荷二橋肽與NX、MX有相刺同的m/侮z2圖61的碎悟片離籌子蛋氨次酸二推肽在m/修z3份37發(fā)生伐多次鹿分裂練，產(chǎn)印生不接同碎齒片離纖子不同婦分析脊條件他下二膜肽的后識(shí)別氨基瓶酸作文為內(nèi)壓標(biāo)可襯以使浙來(lái)自桐不同厘實(shí)驗(yàn)舞室的樹代謝冬組數(shù)星據(jù)具鴿有可腦比性本地遷散點(diǎn)節(jié)平滑坊估計(jì)(L故OE爽SS壁)是最間好的簡(jiǎn)校準(zhǔn)屋二肽符保留港時(shí)間免的方舟法肺癌孤組織黑中二占肽的撈靶標(biāo)北分析采用蹦最小坡二乘混法比哥較腫頃瘤組核織與彼正常微組織悠中豐菠度變?yōu)E化明濾顯的費(fèi)二肽有25梳7種二掩肽至哪少在堤一種貧組織取中被吐檢測(cè)沖到，法其中25染3種在答腫瘤察組織認(rèn)中檢典測(cè)到在腫倡瘤組喂織中秘檢測(cè)囑到90種二嫩肽豐執(zhí)度與緊正常黨組織逗相比糞有明莫顯的蚊增加(倍數(shù)魚＞2