免疫學的室內(nèi)質量控制課件

血站實驗室的室內(nèi)質控室內(nèi)質量質控的概念如何進行室內(nèi)控制如何進行統(tǒng)計學質量控制如何做質控圖質控規(guī)則的選擇一、室內(nèi)質量控制的概念由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作?？筛爬?(1)執(zhí)行者：實驗室技術人員；(2)目的：監(jiān)測實驗室測定的重復性；(3)功能：決定了當批測定的有效性，報告可否發(fā)出。是對實驗室測定的即時性評價。二、分析前的質量控制2.1人員培訓

免疫學實驗的基本原理臨床意義易出差錯的環(huán)節(jié)及難點熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質量控制知識2.2試劑盒選擇有生產(chǎn)批準文號、批批檢報告，并貼有防偽標簽。從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡便性，安全性及經(jīng)濟性作出全面的評價使用血清考核盤進行檢測參考室間質評評價報告中對試劑的評價結果注意高值鉤狀效應（HOOK）2.3儀器校驗移液器（加樣槍）水浴箱（溫箱）洗板機酶標儀

全自動加樣儀全自動酶免分析系統(tǒng)

2.4標本的采集、處理、保存

標本避免溶血?？鼓煌耆稍斐杉訇栃?。血清置4℃冰箱不應超過5天。如需保存一周以上則要-20℃冰凍保存，融解時應充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。避免標本間的污染三、ELISA實驗的室內(nèi)質量控制3.1最佳條件下的變異（OCV）在本實驗室最佳條件下（包括操作者、試劑、儀器等）檢測質控血清20-30次，測得結果計算，求出該組數(shù)據(jù)的均值、標準差（SD）和變異系數(shù)（CV），表示實驗室的最佳工作質量。3.2常規(guī)條件下已知值質控血清的變異（RCVK）

做常規(guī)檢驗的技術人員，在常規(guī)檢驗的條件下，將質控血清作為常規(guī)檢測樣本，進行20次檢驗，結果計算同OCV法。

3.3常規(guī)條件下未知值質控血清變異(RCVU)的測定測定步驟同RCVK，但檢測的操作者不知質控血清的定值，或在操作者不知哪份是質控血清的條件下進行常規(guī)檢驗，以排除操作者的主觀性。3.4

繪制質控圖根據(jù)質控品的靶值和控制限繪制Levey-Jennings控制圖（每張圖一個濃度水平），將選擇的質控規(guī)則應用于質控數(shù)據(jù)，判斷每一分析批是在控還是失控。

3.5質控規(guī)則的功能

簡單地說就是用于判斷測定批的失控還是在控。失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，包括操作上的失誤、試劑、校準物、質控品的失效，儀器維護不良以及采用的質控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的質控標本數(shù)等等。排除假失控。3.6質控規(guī)則的表達方式通常質控規(guī)則以符號AL來表示，其中A為質控測定中超出質量控制限的測定值的個數(shù)，L為控制限，通常用均值或均值±1～3SD來表示。當質控測定值超出控制限L時，即可將該批測定判為失控。常用的13S質控規(guī)則，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值±3s，其確切的含義為：在質控測定值中，如果有一個測定值超出均值±3s范圍，即可將該批測定判為失控。

常用質控規(guī)則的符號及定義符號定義12S

一個質控測定值超出±2s控制限。13S

一個質控測定值超出±3s控制限。22S

兩個連續(xù)的質控測定值同時超出+2s或-2s控制限。R4S

同一批測定中，兩個不同濃度質控物的測定值之間的差值超出4s控制限。41S

四個連續(xù)的質控測定值同時超出+1s或－1s控制限。7T

七個連續(xù)的質控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變化。10X

十個連續(xù)的質控測定值同時處于均值的同一側。四、“即刻法”質控“即刻法”質控方法是在對同一批外部質控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢驗結果進行質控。具體計算方法如下：4.1將質控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)4.2計算

X

和

S。4.3計算SI上限值和SI下限值SI下限=

X

-X最小值

SSI上限=

X最大值-

X

S4.4將SI上限、SI下限與SI值表中的數(shù)字比較SI值表nn3sn2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56（1）當SI上限和SI下限<n2s時表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。繼續(xù)重復以上各項計算。（2）當SI上限和SI下限有一值處于n2s~n3s值之間時說明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。（3）當SI上限和SI下限有一值>n3s值時說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應舍去，需重新測定該質控血清和病人樣品。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它測定值仍可繼續(xù)使用。

4.5當檢測的數(shù)值超過20次以后，可以轉入常規(guī)的質控圖的質控。將前20次的數(shù)值求出的和SD作質控框架圖，第21次的數(shù)值，依次點入即可。4.6室內(nèi)質控數(shù)據(jù)的管理每月室內(nèi)質控數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理每月室內(nèi)質控數(shù)據(jù)的保存室內(nèi)質控數(shù)據(jù)的周期性評價

五、影響ELISA實驗的常見原因5.1試劑準備操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。5.2加樣:血清或血漿標本分離不好即進行加樣手工操作中，加樣過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。樣品、稀釋液、酶結合物、顯色劑應加在微孔底部。5.3孵育溫度過高或過低，孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底5.4洗板采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。反應板過多造成洗板等待時間長5.5顯色顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

A、B液應避免接觸金屬器械。5.6讀板讀板時板底