微生物檢驗的質(zhì)量控制

微生物檢驗的質(zhì)量控制第1頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月

前言在實際工作中存在許多復雜因素影響微生物學檢驗,可能給檢驗結(jié)果帶來偏差甚至錯誤,因此必須對影響檢驗結(jié)果的諸多因素采取控制手段保證檢驗結(jié)果的正確性,不斷完善微生物檢驗的質(zhì)量控制.第2頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月主要內(nèi)容1檢驗人員2儀器.設(shè)備3檢驗培養(yǎng)基,試劑4檢驗環(huán)境5采樣6樣品的接收和預處理7檢驗質(zhì)量8校驗的執(zhí)行9參考菌株及其保存10實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制11檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制第3頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月1檢驗人員(1)微生物檢驗不能完全依賴全自動鑒定儀器,檢驗工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和判斷能力,與個人的經(jīng)驗.技能和微生物檢驗基礎(chǔ)知識水平密切相關(guān).(2)除要求微生物檢驗人員必須具備嚴肅認真的工作態(tài)度,精密細致的觀察和操作習慣,注重個人衛(wèi)生外,還必須訓練掌握微生物檢驗技術(shù).(3)檢驗人員應執(zhí)行上崗前培訓制度,上崗前培訓合格方能上崗操作,還要主動參加學習,培訓,講座,學習新技術(shù),掌握微生物學檢驗方法,標準及相關(guān)法律法規(guī)第4頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月1檢驗人員(4)參與編寫測試程序及儀器操作程序,學習質(zhì)量保證體系知識和計量學基本知識(5)參加各類水平測試和盲樣測試,提高檢測水平和分析問題,解決問題的能力(6)微生物學檢驗室負責人應定期對檢驗人員進行專業(yè)知識和操作熟練程度的考核,提高檢驗人員的素質(zhì).第5頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月3培養(yǎng)基為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標，在實際工作中應注意；（1）加強包裝的密封性能；（2）使用時盡量縮短開蓋時間；（3）一般干性培養(yǎng)基放在低溫干燥的環(huán)境中保存，對于易受潮的品種，啟用后宜放入干燥器中保存；（4）由于配制水分不同，啟用次數(shù)或時間增加，干粉培養(yǎng)基的pH值可能會有所變化，應隨時略加調(diào)整。第6頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月3培養(yǎng)基培養(yǎng)基的配制應嚴格按照標準規(guī)定的方法進行操作，并做好原始記錄。為保證培養(yǎng)基必須在玻璃容器，搪瓷或鋁鍋中進行，如用銅，鐵器皿，會對微生物生長有毒害作用；配制培養(yǎng)基時應按檢驗項目規(guī)定的配方添加，不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。此外，要用專用的角匙取藥品，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果；第7頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月3培養(yǎng)基培養(yǎng)基配制最好用蒸餾水或去離子水，避免使用自來水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)；不同類型的微生物對pH值的要求不同，配制培養(yǎng)基時應測調(diào)值，如測定結(jié)果與所要求的值不符，則用1NNaOH或1NHCL溶液進行調(diào)節(jié)。第8頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月3培養(yǎng)基效果試驗是指按不同的培養(yǎng)基接種相應的菌株，觀察細菌的發(fā)肓，菌落形狀，色素，溶血等特征，據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求。

質(zhì)控菌株

ATCC

生長情況

金黃色葡萄球菌25923+++大腸桿菌25922+++第9頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月7檢驗質(zhì)量除按國家標準方法對所需檢驗項目進行檢測外，在實際工作中還應注意以下幾個方面，否則會影響檢驗結(jié)果的準確性：（1）在定量檢驗時用重量法還是用體積法，檢驗結(jié)果會有誤差，因為此重不等于1的樣品，1ml和1g的化驗結(jié)果絕不會相等.一般固態(tài)的樣品宜用重量法,液體樣品宜用體積法.但對粘性液體(如酸奶),如用體積法,會粘附一定量的樣品在吸管上,因此此類樣品最好用重量法.第10頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月7檢驗質(zhì)量(2)如檢樣需用用無菌水或無菌生理鹽水稀釋,則最好用均質(zhì)器或組織碎機,以8000`10000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速處理1min,制成均勻的菌懸液.(3)樣品稀釋時,常會滯留少量樣品在吸管內(nèi)外,應多加注意.吸入液體后,應沿管壁慢慢注入遞增的稀釋中,特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中.第11頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月7檢驗質(zhì)量(4)在培養(yǎng)基注入檢樣,菌懸液時,注意培養(yǎng)基溫度宜在45℃

-50℃

之間,并使培養(yǎng)基與檢樣,菌懸液充分混合.(5)微生物培養(yǎng)時,應根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時間.(6)應用無菌水或無菌生理鹽水作空白對照,如果在空白對照中檢出細菌,則可認為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問題或在操作過程中存在污染情況.另外,采用標準菌種作陽性對照,觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況.(7)整個檢驗過程應嚴格遵守無菌操作.(8)及時檢查結(jié)果,做好原始數(shù)據(jù)記錄.第12頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月9參考菌株及其保存實驗室要準備好足夠種類和數(shù)量的參考菌株,滿足培養(yǎng)基,試劑盒和試劑質(zhì)量測試的需要.保存菌株要定期傳代,注意無菌操作,使菌株不污染,不死亡,不丟棄.應設(shè)專人妥善保管,菌株保存箱應加鎖放置適宜環(huán)境,取出使用應登記;保存菌株應建冊登記,基本項目應包括菌種名稱,分離來源,分離日期,傳代日期,保存方法,主要性狀,保管者,領(lǐng)用者等;對保存菌種,經(jīng)傳代數(shù)次后應進行一次系統(tǒng)生化反應,血清學期成績特性等生物學性狀觀察,檢查其是否發(fā)生變異.第13頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月9參考菌株及其保存常見的參考菌株保存方法：細菌(1)營養(yǎng)要求不高的需氧細菌在胰胨大豆瓊脂斜面上能存活1年.(2)需氧或厭氧菌的長期儲存需冷凍干燥,或存放在-70℃(3)營養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔5年要解凍分離重新凍干.(4)細菌低溫冰凍保存時可懸浮于消毒去脂牛奶,含15%甘油的胰胨大豆肉湯或無菌馬血中.第14頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月9參考菌株及其保存真菌(1)酵母菌按營養(yǎng)要求不高的細菌同樣處理.(2)霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面上4℃儲存6個月-1年,斜面上覆蓋消毒石蠟油可在室溫下長期存放.第15頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月菌種保藏的方法1定期移植保藏方法:將菌種接種于適宜的斜面或液體培養(yǎng)基,也可進行穿刺培養(yǎng),等生長成健壯的菌體(對數(shù)期細胞,有性孢子或無性孢子)后,將菌種放置4℃冰箱保藏,每間隔一定時間需要重新移植培養(yǎng)一次.芽孢桿菌3-6個月移種一次,其它細菌每月移種一次.第16頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月2液體石蠟保藏法:這種方法是定期移值保藏法的補充,在生長良好的斜面表面覆蓋一層無菌的石蠟,液面高出培養(yǎng)基1cm,將其置試管架上以直立狀態(tài)低溫保藏,液體石蠟可以防止水分蒸發(fā),隔絕氧氣,所以能延長保藏的時間.第17頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月3沙管保藏法,土壤保藏法4麩皮保藏法.5蒸餾水保藏法6液氮超低溫保藏法7甘油保藏法第18頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月8冷凍干燥保藏法

冷凍干燥保藏法一般過程1安瓿管---酸洗，水洗---烘干----滅菌2配制保護劑----分裝----滅菌3菌種---培養(yǎng)---制備菌懸液（加入2）----分裝安瓿管----預凍----真空干燥----裝在歧管上抽真空-----火焰上熔封安瓿管口----檢測真空----保藏第19頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月10實驗室內(nèi)外質(zhì)量控制

一)內(nèi)部質(zhì)量控制為保證實驗室連續(xù)評價結(jié)果的可靠性和精密度,必須對所用方法的重復性及再現(xiàn)性定期測定對于不同的控制系統(tǒng),實驗室必須建立限值,超過限值應采取糾偏措施.第20頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月10實驗室內(nèi)外質(zhì)量控制實踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括:(1)系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計數(shù)測定;(2)由同一檢驗人員和幾個檢驗人員作平行樣:(3)定期或不定期進行盲樣測試.第21頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月10實驗室內(nèi)外質(zhì)量控制（二)外部質(zhì)量控制實驗室應參加外部的質(zhì)量控制活動,對其開展的每一項檢測均應參加相應的室間質(zhì)量控制.對有關(guān)實驗室或管理機構(gòu)發(fā)出的測試樣品應嚴格地當作普通樣品一樣處理,這樣一種方法有助于實驗室每天測試的準確性和重復性,是對實驗室所用的方法,試劑,設(shè)備,人員能力的測試.第22頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月10實驗室內(nèi)外質(zhì)量控制從室間樣品測試中的錯誤可以發(fā)現(xiàn)實驗室的不足之處,對工作人員的教育改進可以提高實驗室的檢測質(zhì)量.對返回的室間測定評級中存在的問題應當召集體員工討論,改進措施(包括方法的改變,員工的改變,員工的再訓練,培養(yǎng)基和試劑購買來源的更換等)應當記錄在案.第23頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月10實驗室內(nèi)外質(zhì)量控制某些項目缺少室間質(zhì)量控制,實驗室可以設(shè)置室內(nèi)質(zhì)量控制,每半年自行評估一次,經(jīng)常參加微生物實驗室間質(zhì)控活動,有助于加強檢測人員的基本功訓練,增強樣品檢測過程中“量”的概念.實驗室間的質(zhì)控可在國內(nèi)外范圍進行,