電鏡練習(xí)題及參考答案

一、電鏡練習(xí)題及答案一、透射電鏡標(biāo)本取材的基本要求并簡(jiǎn)要說明。答：取材的基本要求如下：組織從生物活體取下以后，如果不立即進(jìn)行及時(shí)固定處理，就有可能出現(xiàn)缺血缺氧后的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，如細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞器變性或溶解等現(xiàn)象，這些都可造成電鏡觀察中的人為假象，直接影響觀察結(jié)果分析，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。此外，由于處理不當(dāng)造成組織微生物污染，導(dǎo)致細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)遭受破壞。因此，為了使細(xì)胞結(jié)構(gòu)盡可能保持生前狀態(tài)，取材成敗是關(guān)鍵，取材成功的關(guān)鍵在于操作者必須要注意把握“快、小、冷、準(zhǔn)”四個(gè)取材要點(diǎn)。(1)．快：就是指取材動(dòng)作要迅速，組織從活體取下后應(yīng)在最短時(shí)間(爭(zhēng)取在1～2分鐘之內(nèi))投入前固定液。對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，最好在斷血流、斷氣之前就進(jìn)行取材，以免缺血缺氧后使細(xì)胞代謝發(fā)生改變而破壞細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。當(dāng)然，最好是采用灌注固定法。為了使前固定的效果更佳，組織塊要充分和固定液混合，應(yīng)采用振蕩固定10分鐘以上，有條件的可采用微波固定法固定。(2)．?。河捎诔Ｓ玫墓潭▌B透能力較弱，組織塊如果太大，塊的內(nèi)部將不能得到良好的固定。因此所取組織的體積要小，一般不超過1mm3。為便于定向包埋，可將組織修成大小約1mm×1mm×2mm長(zhǎng)條形。(3)．冷：為了防止酶對(duì)自身細(xì)胞的酶解作用，取材操作最好在低溫(5℃～15℃)環(huán)境下進(jìn)行，這樣可以降低酶的活性，防止細(xì)胞自溶。所采用的固定劑以及取材器械要預(yù)先在冰箱(5℃）中存放一段時(shí)間。(4)．準(zhǔn)：就是取材部位要準(zhǔn)確，這就要求取材者對(duì)所取的組織解剖部位要熟悉，必須取到與實(shí)驗(yàn)要求相關(guān)的部位，不同實(shí)驗(yàn)組別間要取相同部位，如需要定向包埋的標(biāo)本，則要作好定向取材工作。此外，還要求操作動(dòng)作輕柔，熟練，盡量避免牽拉、挫傷與擠壓對(duì)組織造成的人為損傷。什么是瑞利準(zhǔn)則？電鏡與光鏡在原理上有何相似和不同之處？答：1、光線通過二個(gè)比較靠近的小孔時(shí)，這二個(gè)小孔的衍射圖會(huì)重疊在一起。當(dāng)一個(gè)衍射圖的中央亮斑正好落在另一個(gè)衍射圖的第一暗環(huán)中心時(shí)，這二個(gè)點(diǎn)剛可以分辯。這就是顯微鏡分辯本領(lǐng)的瑞利準(zhǔn)則。2、相似點(diǎn)：光學(xué)顯微鏡是利用玻璃制作的透鏡對(duì)光進(jìn)行折射，將一物點(diǎn)發(fā)出不同角度的光線最終會(huì)聚成一個(gè)像點(diǎn)。電子顯微鏡是以電子束作為光源，利用電磁透鏡產(chǎn)生的電場(chǎng)或磁場(chǎng)折射電子束，并通過電子束轟擊熒光屏激發(fā)熒光而達(dá)到成像目的。不同點(diǎn)：光鏡的照明源是可見光，而電鏡是用電子束照明。光鏡的透鏡用玻璃制成，而電鏡的透鏡是軸對(duì)稱的電場(chǎng)或磁場(chǎng)。簡(jiǎn)述透射電鏡及掃描電鏡樣品制作流程答：1、透射電鏡樣品制作流程為取材——漂洗（生理鹽水）——前固定（2.5%戊二醛，4oC冰箱2小時(shí)以上）——漂洗（0.1M磷酸緩沖液，3次，45分鐘）——后固定(1%鋨酸1小時(shí)左右)——漂洗（0.1M磷酸緩沖液，3次，45分鐘）——塊染（1%醋酸鈾2小時(shí)）——梯度脫水（50%、70%、80%、90%丙酮各15分鐘，100%丙酮2次，各10分鐘）——浸透（丙酮：包埋液=1：1，37oC烘箱2小時(shí)；丙酮：包埋液=1：4，37oC烘箱過夜；純包埋液45oC烘箱2小時(shí)）——包埋聚合（45oC烘箱3小時(shí)，65oC烘箱48小時(shí)）。2、掃描電鏡樣品制作流程為取材（做好樣品觀察面的標(biāo)志）——漂洗（生理鹽水或緩沖液）——固定（2.5%戊二醛2小時(shí)以上）——漂洗（0.1M磷酸緩沖液，3次，45分鐘）——后固定（1%鋨酸，2小時(shí)）——脫水（50%、70%、80%、90%、95%各15分鐘，換醋酸異戊酯15分鐘或叔丁醇15分鐘）——干燥（零界點(diǎn)干燥或冷凍干燥）——鍍膜（真空鍍膜儀或離子濺射儀）四、常用的化學(xué)固定方法有哪些？答;常用的化學(xué)固定方法有1、浸泡固定法（也稱組織塊固定）：就是將組織塊直接浸泡入固定液當(dāng)中進(jìn)行固定。2、游離細(xì)胞固定法：適用于培養(yǎng)細(xì)胞、周圍血、骨髓、胸腹水或其他滲出液。如為貼壁生長(zhǎng)的培養(yǎng)細(xì)胞，應(yīng)先用橡皮刮子將細(xì)胞從培養(yǎng)管壁上輕輕刮下，或用酶消化，使細(xì)胞脫離管壁。3、原位固定法：就是在組織未取下之前，在組織器官原來的位置進(jìn)行預(yù)固定的方法。原位固定可分為點(diǎn)滴固定法和注射固定法兩種。點(diǎn)滴固定法：就是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后暴露出所需的器官表面，小心地剝開包膜，將預(yù)冷的固定液直接滴在組織的表面上，并保持固定液適當(dāng)濃度不使揮發(fā)干燥。注射固定法：就是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，將固定液用細(xì)注射針直接注射到所需固定的組織中或空腔臟器的內(nèi)部。4、灌注固定法就是利用血液循環(huán)的途徑將固定液灌注到所需固定的組織中，其特點(diǎn)是灌注快速、均勻，缺點(diǎn)是固定操作復(fù)雜、要求高。灌注固定法可分為全身固定和局部固定兩種。通常采用的固定劑為2%～4%戊二醛溶液或者4%多聚甲醛溶液。五、普通透射電鏡包括那些結(jié)構(gòu)？請(qǐng)簡(jiǎn)要敘述。答：透射式電子顯微鏡（簡(jiǎn)稱透射電鏡）由四部分組成，即電子光學(xué)系統(tǒng)（即鏡筒）、真空排氣系統(tǒng)、電源系統(tǒng)和水冷系統(tǒng)。電子光學(xué)系統(tǒng)包括：照明系統(tǒng)、樣品室、成像系統(tǒng)和觀察記錄系統(tǒng)。真空排氣系統(tǒng)包括：機(jī)械泵、油擴(kuò)散泵、真空管道、閥門及檢測(cè)系統(tǒng)組成。電源系統(tǒng)包括：主要的電源供給包括高壓電源、電子槍燈絲電源、控制極電源、透鏡電源、真空系統(tǒng)電源等部分。水冷系統(tǒng)主要靠冷卻水循環(huán)裝置來完成或者直接用自來水降溫。六、簡(jiǎn)述電鏡在生命科學(xué)中的應(yīng)用電子槍產(chǎn)生的電子是（A）A入射電子B透射電子C彈性散射電子D二次電子E俄歇電子用來顯示組織和細(xì)胞的內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)像的電子為（B）A入射電子B透射電子C彈性散射電子D二次電子E反射電子下面哪項(xiàng)不屬于透射電鏡樣品制備技術(shù)（A）A鍍膜B負(fù)染技術(shù)C電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)D超薄切片技術(shù)E半薄切片技術(shù)5、下面哪項(xiàng)不屬于掃描電鏡樣品制備技術(shù)（B）A表面干燥法B浸透包埋C冷凍復(fù)型D冷凍割斷法E組織導(dǎo)電法6、下面哪種電鏡可以在觀察結(jié)構(gòu)的同時(shí)，對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的元素成分進(jìn)行分析（C）A透射電鏡B掃描電鏡C分析電鏡D超高壓透射電鏡E原子力顯微鏡7、觀察組織細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)應(yīng)選用哪種電鏡（B）A原子力顯微鏡B透射電鏡C掃描電鏡D磁力顯微鏡E側(cè)向力顯微鏡8、下面哪項(xiàng)不是超高壓電子顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)（E）A可用于觀察厚切片B可以提高分辨率C可提高圖像質(zhì)量D可觀察復(fù)雜的結(jié)構(gòu)E減少輻射損傷范圍9、下面對(duì)掃描電鏡的描述錯(cuò)誤的是（B）A利用反射電子和二次電子成像B用于觀察組織細(xì)胞表面形貌C樣品室大，可用于觀察塊狀樣品D景深長(zhǎng)，立體感強(qiáng)E樣品可被升降和傾斜10、電子槍由（D）組成A陰極、陽(yáng)極B陰極、柵極C陽(yáng)極、柵極D陰極、陽(yáng)極、柵極E正極、負(fù)極、柵極11、二次電子監(jiān)測(cè)系統(tǒng)不包括（E）A檢測(cè)器B陰極射線管C閃爍器D光電倍增器E視頻放大器12、固定液中戊二醛的常用濃度為（C）A0.5%B2.0%C2.5%D4%E10%13、下面對(duì)透射電鏡描述不正確的是（D）A利用透射電子成像B觀察細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)C可觀察負(fù)染標(biāo)本D景深長(zhǎng)、立體感強(qiáng)E分辨率高，性能最完善14、透射電鏡的反差取決于樣品對(duì)（B）的散射能力A二次電子B入射電子C透射電子D散射電子E反射電子15、觀察生物樣品時(shí)，透射電鏡的加速電壓一般為（C）A20-50KVB50-80KVC80-100KVD100-120KVE120KV以上16、超薄切片是指厚度小于（D）的切片A200nmB300nmC400nmD100nmE500nm17、超薄切片技術(shù)的步驟為（B）A取材、固定、脫水、包埋、切片、染色B取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片、染色C取材、脫水、固定、包埋、切片、染色D取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片E取材、脫水、固定、包埋、切片18、不屬于透射電鏡標(biāo)本取材要求的（C）A