相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)唐冬雪課件

相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)唐冬雪相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)唐冬雪相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)唐冬雪蛋白質(zhì)相互作用研究方法、酵母雙雜交技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)三、細(xì)胞共定位技術(shù)四、GSTPull-dow技術(shù)五、FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù))六、BiFC(雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù))七、TAP(串聯(lián)親和純化技術(shù))八、Far-Westernblot(親和印跡技術(shù))、酵母雙雜交技術(shù)1.基本概述2.基本過程3.應(yīng)用與優(yōu)缺點(diǎn)農(nóng)村中小學(xué)在面臨應(yīng)試教育向素質(zhì)教育改革的情況下,思想準(zhǔn)備不足,理念轉(zhuǎn)變不夠,行動(dòng)遲緩,收效甚微,嚴(yán)重阻礙我國農(nóng)村中小學(xué)教育的發(fā)展。分析這些問題產(chǎn)生的原因,找出合理的措施以促進(jìn)農(nóng)村中小學(xué)教育的可持續(xù)發(fā)展是教育工作者的責(zé)任。1農(nóng)村中小學(xué)實(shí)施素質(zhì)教育改革存在的問題1.1教育理念匱乏、落后目前,我國多數(shù)農(nóng)村中小學(xué)的教育沿襲傳統(tǒng)教學(xué),教師處于至高無上的權(quán)威地位,學(xué)生無條件地接受教師灌輸,在教學(xué)中注重死知識(shí)的傳授,教師是課堂的中心,學(xué)生圍繞教師轉(zhuǎn),學(xué)生的主體地位得不到體現(xiàn),教師與學(xué)生之間處于不平等的地位。有的教師片面地認(rèn)為素質(zhì)教育就是減輕學(xué)生負(fù)擔(dān),減少教學(xué)內(nèi)容;有的學(xué)校掛著素質(zhì)教育的旗幟大搞應(yīng)試教育,仍然把升學(xué)率當(dāng)成評(píng)估教學(xué)質(zhì)量的硬指標(biāo),節(jié)假日補(bǔ)課有增無減,甚至把班級(jí)分為快班、慢班、實(shí)驗(yàn)班來進(jìn)行教學(xué),對(duì)學(xué)生的身心造成極大的傷害。1.2教育資源配置失衡經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平是實(shí)現(xiàn)教育供給的決定性因素,城鄉(xiāng)收入差距擴(kuò)大是我國城鄉(xiāng)之間教育供求失衡的重要原因,它直接導(dǎo)致農(nóng)村教育的資金投入不足[1]。教育政策的制定往往是以城市教育的發(fā)展為基點(diǎn),教育投資向城市一邊倒,而廣大的農(nóng)村中小學(xué)教育遭到有意或無意的忽視,這就使本來有限的教學(xué)資源分配得不合理,教學(xué)資源配置嚴(yán)重失衡。1.3教育、教學(xué)管理水平不高,教學(xué)效果不好一些教育管理部門為了顯示政績,大搞形象工程,過分重視“示范學(xué)?！薄爸攸c(diǎn)學(xué)校”的建設(shè)和管理,而把農(nóng)村中小學(xué)當(dāng)成“棄兒”,疏于管理。加之有些農(nóng)村中小學(xué)的學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)教學(xué)觀念陳舊,教學(xué)管理水平不高,工作責(zé)任心不強(qiáng),有些校長和教導(dǎo)主任就如何進(jìn)行教學(xué)管理心中無底,無章可循,跟現(xiàn)代教學(xué)管理理念很不適應(yīng)。在上述情形下,教師工作積極性不高,對(duì)自己的職業(yè)產(chǎn)生倦怠情緒,在教學(xué)中只重視數(shù)量而不重視質(zhì)量,導(dǎo)致教學(xué)效果不好。1.4“留守學(xué)生”心理健康問題嚴(yán)重隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和農(nóng)村外出務(wù)工人員的增多,農(nóng)村家庭的“留守學(xué)生”問題已成為我國社會(huì)轉(zhuǎn)型時(shí)期的一個(gè)獨(dú)特問題。由于“留守”在家的孩子缺少父母的愛,在對(duì)他們的管教上很容易出問題,尤其是心理問題比較明顯。有心理問題的“留守學(xué)生”,在學(xué)習(xí)和生活中表現(xiàn)為更容易違紀(jì),成為教育的難管對(duì)象,普遍有厭學(xué)傾向,學(xué)習(xí)成績差,更為嚴(yán)重者還會(huì)走向犯罪道路。對(duì)他們的教育的不足或多或少地影響到農(nóng)村中小學(xué)素質(zhì)教育改革的有效實(shí)施。2解決農(nóng)村中小學(xué)素質(zhì)教育改革中所存在問題的建議2.1轉(zhuǎn)變觀念1)更新學(xué)生觀。教師要用發(fā)展的眼光看待學(xué)生,確立學(xué)生在教學(xué)中的主體地位,要理解、信任、尊重和愛護(hù)學(xué)生,認(rèn)識(shí)到學(xué)生的獨(dú)創(chuàng)性,鼓勵(lì)學(xué)生發(fā)揮特長,發(fā)展個(gè)性。2)更新教師觀。在課程改革后,教師是學(xué)生的診斷師、指導(dǎo)者、評(píng)價(jià)者、激勵(lì)者和管理者,同時(shí)教師又是一個(gè)研究者,是一個(gè)不斷在教學(xué)上獲求進(jìn)取的人。3)更新教學(xué)觀。教學(xué)方式由以講授為主轉(zhuǎn)為以合作探究為主;教學(xué)內(nèi)容由封閉轉(zhuǎn)為開放;教學(xué)組織形式由單一時(shí)空轉(zhuǎn)為靈活時(shí)空;教學(xué)手段要由黑板、粉筆轉(zhuǎn)為多樣化綜合;教學(xué)評(píng)價(jià)由重結(jié)果評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)為多元化評(píng)價(jià)。2.2加強(qiáng)社會(huì)關(guān)注、扶持力度整個(gè)社會(huì)都應(yīng)該關(guān)注農(nóng)村的中小學(xué)教育。尤其是城市教育要支持農(nóng)村中小學(xué)教育,為農(nóng)村中小學(xué)教育提供教育資源上的幫助,做好送課下鄉(xiāng)的工作;教育政策應(yīng)傾向于農(nóng)村中小學(xué)教育,加大財(cái)政資金的扶持力度,用于改善農(nóng)村中小學(xué)的教學(xué)硬件設(shè)施,提高辦學(xué)條件,提高農(nóng)村中小學(xué)教師的工資待遇;大力呼吁社會(huì)各界人士為農(nóng)村中小學(xué)教育貢獻(xiàn)自己的力量,提供力所能及的幫助;營造良好的社會(huì)氛圍,為了實(shí)現(xiàn)農(nóng)村中小學(xué)教育的可持續(xù)發(fā)展,整個(gè)社會(huì)都應(yīng)該把農(nóng)村中小學(xué)教育放在優(yōu)先發(fā)展的地位。2.3加強(qiáng)農(nóng)村中小學(xué)教師職業(yè)道德建設(shè),提高教書育人水平農(nóng)村中小學(xué)教師在師德方面要不斷地學(xué)習(xí)和總結(jié),不斷地提升自我。教育主管部門可將師德建設(shè)作為學(xué)校辦學(xué)水平評(píng)估的重要指標(biāo),加強(qiáng)對(duì)教師師德的考評(píng),堅(jiān)持師德考核與業(yè)務(wù)考核并重,建立教師自評(píng)、互評(píng),家長評(píng)教師,學(xué)生評(píng)教師相結(jié)合的考評(píng)機(jī)制。重點(diǎn)考核教師教書育人的實(shí)績和職業(yè)道德狀況、教學(xué)態(tài)度和育人效果等,把師德考核結(jié)果作為教師職務(wù)聘任、評(píng)優(yōu)評(píng)先的重要依據(jù)。2.4以人為本,注重學(xué)生的身心發(fā)展農(nóng)村中小學(xué)較城市學(xué)校而言,有問題行為的學(xué)生比較多,表現(xiàn)也比較復(fù)雜。要想從根本上解決好問題行為學(xué)生的身心問題,就要注重以人為本的教育思想。首先從人格上要尊重這些學(xué)生,在生活上關(guān)心他們,在行為上引導(dǎo)他們;其次要想他們之所想,走進(jìn)他們的內(nèi)心世界,因勢(shì)利導(dǎo),循序漸進(jìn)地解決他們的問題;此外,建議農(nóng)村中小學(xué)開設(shè)心理輔導(dǎo)課程,由心理學(xué)專業(yè)畢業(yè)的教師進(jìn)行講授,作為一門學(xué)科納入農(nóng)村中小學(xué)的課程體系。新的課程改革明確提出：“課堂教學(xué)要培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)和實(shí)踐能力?！睘榇私處煈?yīng)徹底改變傳統(tǒng)“一言堂”，“填鴨式”的教學(xué)模式，重視和加強(qiáng)學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)、創(chuàng)新素質(zhì)的培養(yǎng)，這是當(dāng)今社會(huì)對(duì)教育提出的新要求，也是小學(xué)數(shù)學(xué)教學(xué)的主旋律。《數(shù)學(xué)課程標(biāo)準(zhǔn)》指出：“數(shù)學(xué)教學(xué)是數(shù)學(xué)活動(dòng)的教學(xué)，是師生之間、學(xué)生之間交往互動(dòng)與共同發(fā)展的過程。”學(xué)生要在教師的指導(dǎo)下，積極主動(dòng)地掌握數(shù)學(xué)知識(shí)、技能，發(fā)展。培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新精神是數(shù)學(xué)教學(xué)的首要任務(wù)，而落實(shí)這一目標(biāo)的主陣地就是數(shù)學(xué)課堂。如何在新課程理念下實(shí)現(xiàn)數(shù)學(xué)課堂創(chuàng)新，下面是自己的一些粗淺看法。一、營造和諧的、民主的教學(xué)氛圍――課堂創(chuàng)新的保障現(xiàn)代教育認(rèn)為：“只有給學(xué)生創(chuàng)設(shè)一種和諧、融洽、寬松、民主的教學(xué)環(huán)境，激發(fā)學(xué)生內(nèi)在的學(xué)習(xí)需求，才能使他們生動(dòng)活潑、主動(dòng)有效地進(jìn)行學(xué)習(xí)，把教學(xué)活動(dòng)視為他們自己樂意的生活。”只有在這種師生關(guān)系平等的課堂教學(xué)過程中，學(xué)生處于一種無拘無束的情況下，才會(huì)感到學(xué)習(xí)過程中沒有壓力，學(xué)習(xí)的靈感才容易迸發(fā)出來，也只有在這樣的場(chǎng)合下學(xué)生的不同觀點(diǎn)，不同想法才容易產(chǎn)生，才會(huì)產(chǎn)生創(chuàng)新的靈感。在課堂上，只有老師放下“架子”，不顧“面子”，溶入學(xué)生之中，成為學(xué)生中的一員，做學(xué)生的知心朋友，在這種融洽、民主的氛圍中，學(xué)生才會(huì)感到學(xué)得輕松，才愿意動(dòng)腦筋思考問題，才會(huì)有創(chuàng)新。例如，我在教學(xué)《人民幣的認(rèn)識(shí)》時(shí)，就把我自己作為一名小學(xué)生融入到學(xué)生中去，虛心向孩子們請(qǐng)教，他們皆爭(zhēng)先恐后地把自己認(rèn)識(shí)的人民幣介紹給我。甚至有個(gè)學(xué)生說：“嗨！嗨！你真棒！”這充分說明學(xué)生們正在這種和諧的、民主中輕松愉快地學(xué)習(xí)。二、創(chuàng)設(shè)情境，激發(fā)創(chuàng)新意識(shí)――課堂創(chuàng)新的前提《數(shù)學(xué)課程標(biāo)準(zhǔn)》這情感與態(tài)度目標(biāo)提出，讓學(xué)生“在數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)活動(dòng)中獲得成功的體驗(yàn)，鍛煉克服困難的意志，建立自信心。”這一目標(biāo)的達(dá)成，必須通過學(xué)生親身的主動(dòng)參與，自主探索。因此，創(chuàng)設(shè)主動(dòng)參與的情境就成了課堂創(chuàng)新的重要前提。1.問題情境創(chuàng)設(shè)問題情境，不僅能喚起學(xué)生的有意注意，引起學(xué)生對(duì)學(xué)習(xí)內(nèi)容的好奇心，而且還能激發(fā)學(xué)生的求知欲望和樂于創(chuàng)新的興趣。因此在教學(xué)中，教師要根據(jù)小學(xué)生的認(rèn)知特點(diǎn)和心理特征，在教學(xué)目標(biāo)和求知心理之間創(chuàng)設(shè)一種富有創(chuàng)新機(jī)會(huì)的情境，把學(xué)生引入這樣一個(gè)問題情境中，喚起他們的創(chuàng)造欲望，那么學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)就會(huì)孕育而生。2.探索情境學(xué)生創(chuàng)新意識(shí)的培養(yǎng)是在自身的實(shí)踐活動(dòng)中發(fā)展起來的。大量的思維研究認(rèn)為，每個(gè)人都蘊(yùn)藏著無限的潛在創(chuàng)造力。我們要時(shí)時(shí)處處站在培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新意識(shí)的角度來鉆研教材、設(shè)計(jì)教法、組織教學(xué)、指導(dǎo)練習(xí)，積極挖掘教材中蘊(yùn)含的創(chuàng)新要素，盡量創(chuàng)設(shè)開放的探索，增大學(xué)生創(chuàng)新意識(shí)培養(yǎng)的時(shí)間和空間，讓學(xué)生的學(xué)習(xí)活動(dòng)真正變?yōu)閷W(xué)生自己探索的創(chuàng)新過程。例如，我在進(jìn)行“兩位數(shù)加一位數(shù)”這一內(nèi)容的教學(xué)時(shí)，出示：28＋9＝（）后，放手讓學(xué)生獨(dú)立、自主地探索各種計(jì)算方法，允許學(xué)生打破教材規(guī)定的方法，用適合自己喜歡的方法去計(jì)算。通過學(xué)生獨(dú)立探索，小組合作探究學(xué)習(xí)，在群體交流中學(xué)生探索出了很多的計(jì)算方法，如“接數(shù)法”、“湊十法”“先加再減法”等。3.創(chuàng)設(shè)猜想情境猜想是一種帶有一定直觀性的比較高級(jí)的思維方式，這種直覺思維是指未經(jīng)逐步分析，迅速對(duì)問題的答案作出合理猜測(cè)、設(shè)想或突然領(lǐng)悟的思維。直覺思維是點(diǎn)燃創(chuàng)造思維的火花，對(duì)于創(chuàng)造思維的產(chǎn)生和發(fā)展起著極其重要的作用。對(duì)于探索和發(fā)現(xiàn)性學(xué)習(xí)來說，猜想是一種重要的思維方法。它的主要特點(diǎn)就是“一眼看出”、“突然領(lǐng)悟”，但又不能馬上就出理由?？梢姡诮虒W(xué)中鼓勵(lì)學(xué)生大膽發(fā)表不同見解、質(zhì)疑，甚至出錯(cuò)，引導(dǎo)學(xué)生從多方面，多角度大膽猜想，進(jìn)而讓學(xué)生驗(yàn)證自己的猜想，學(xué)生在驗(yàn)證的過程中，會(huì)發(fā)現(xiàn)新的問題，并在解決問題的過程中不斷完善自己的猜想，發(fā)揮創(chuàng)造才能，最終發(fā)現(xiàn)規(guī)律，從而可以激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)新欲望，培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)。4.創(chuàng)設(shè)求異情境小學(xué)數(shù)學(xué)教學(xué)中，創(chuàng)設(shè)必要的、適量的開放性題目，可以為學(xué)生提供廣闊的思維空間，培養(yǎng)學(xué)生思維的靈活性，提高學(xué)生分析問題、解決問題的能力，還有助于培養(yǎng)學(xué)生的探究精神和創(chuàng)新能力。例如，我讓一年級(jí)的學(xué)生練習(xí)：寫出得數(shù)是4的加法算式，他們不但寫出了課本上的“1＋3＝4，3＋1＝4，2＋2＝4”，而且還寫出了：“0＋4＝4，4＋0＝4，1＋1＋2＝4，1＋2＋1＝4，1＋1＋1＋1＝4，……”；又如：教學(xué)“簡便運(yùn)算172-98”，教師不要急著提醒學(xué)生“98”最接近哪一個(gè)整百數(shù)，應(yīng)該把98先看成多少？而是讓學(xué)生自由發(fā)揮，如果學(xué)生用“拆數(shù)”的方法，把“172”拆成“72+100”時(shí)，教師將計(jì)就計(jì)，因勢(shì)利導(dǎo)，讓學(xué)生講出思路，不要死板地按照書上“172-98=172-100+2”這樣必然大大激發(fā)學(xué)生思維的創(chuàng)造性；反之，如果硬拉到書本的方法，學(xué)生就會(huì)被動(dòng)的接受，完全落入“教師講學(xué)生聽，教師講得滿頭大汗，學(xué)生聽得昏昏欲睡”的俗套，嚴(yán)重地抑制學(xué)生的求異思維，創(chuàng)造性培養(yǎng)無從談起。問題解決的過程，就培養(yǎng)學(xué)生發(fā)展思維的過程，學(xué)生創(chuàng)新意識(shí)形成的過程。這種開放性的題目是學(xué)生求異思維訓(xùn)練的最佳方式，同時(shí)也是培養(yǎng)和發(fā)展學(xué)生創(chuàng)新意識(shí)、創(chuàng)新思維的有效方法。（江蘇省連云港市東海縣安峰中心小學(xué)）蛋白質(zhì)相互作用研究方法、酵母雙雜交技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)三、細(xì)胞共定位技術(shù)四、GSTPull-dow技術(shù)五、FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù))六、BiFC(雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù))七、TAP(串聯(lián)親和純化技術(shù))八、Far-Westernblot(親和印跡技術(shù))、酵母雙雜交技術(shù)1.基本概述2.基本過程3.應(yīng)用與優(yōu)缺點(diǎn)基本概述酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeasttwo-hybridsystem,Y2H是1989年由Fields等提出并初步建立的,主要用于研究真核生物的蛋白質(zhì)該系統(tǒng)利用了酵母的轉(zhuǎn)錄激活因子GAL4,含有的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域,DNA結(jié)合域①dNAbindingdomain,BD)及轉(zhuǎn)錄激活域(activationdomain,AD),將已知基因(誘餌基因)和靶基因分別構(gòu)建在含BD及AD質(zhì)粒載體上,將兩種質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞,若BD結(jié)合的誘餌蛋白能夠與AD結(jié)合的靶蛋白或文庫中的某些cDNA編碼的蛋白相互作用、彼此間結(jié)合時(shí),則會(huì)導(dǎo)致位于側(cè)翼的BD與AD在空間上接近,呈現(xiàn)GAL4轉(zhuǎn)錄因子的完全活性,激活下游的報(bào)告基因表達(dá),從而在特定的選擇性培養(yǎng)基上生長BaittranscriptionDNA-BDGALUASminimalpromoter原理示意圖靶蛋白結(jié)合對(duì)象DNA結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域蛋白把分別編碼“誘餌”和“獵物”的重組基因引入酵母細(xì)胞酵母細(xì)胞捕獲獵物1誘餌轉(zhuǎn)錄激活子↓報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)報(bào)告基因表達(dá)的蛋白MCSSV40NLSpGBKT778A0M)TLmppGADT7AD7.3kbHATag7988bpHLEUZ△c-MycepitopetagAH109ConstructsGALIUASGALITATAHIS3GALZUASGAL2TATAADEZMELTUASMELITATAMELlUASMEL1TATAMEL1His3是編碼組氨酸合成的基因,3-AT是它的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑;ADE2是編碼腺苷酸合成酶的基因。lacZ是編碼β-半乳糖苷酶的基因,可以用β半乳糖實(shí)驗(yàn)測(cè)定活性。MEL1編碼α-半乳糖苷酶,可以降解X-α-Gal,產(chǎn)生藍(lán)色。GAL1,GAL2和MEL1的上游激活序列(UAS)應(yīng)答于GAL4轉(zhuǎn)錄激活因子。AH09衍生于PJ69-2A菌株,包括ADE2,HS3營養(yǎng)標(biāo)記和一個(gè)內(nèi)源的MEL基因,lacZ報(bào)告基因被引入PJ69-2A而得到AH109菌株基本過程構(gòu)建表達(dá)載體構(gòu)建表達(dá)載體醋酸鋰轉(zhuǎn)化法PGBKT7-BaitPGADT7-Prey轉(zhuǎn)化酵母AH109(或直接提質(zhì)粒)菌株感受態(tài)醋酸鋰轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化酵母AH109拿測(cè)序結(jié)果進(jìn)行Pey菌株自激活菌株感受態(tài)BLAST找出相應(yīng)基因驗(yàn)證Bai菌株自激活對(duì)陽性克隆進(jìn)行將BD-Bait與AD-Pre驗(yàn)證ColonyPCr后測(cè)序用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法共轉(zhuǎn)化酵母AH109菌株感受態(tài),涂到含BDB酵母與文庫中冷缺陷培養(yǎng)基檢測(cè)三缺培養(yǎng)基上驗(yàn)證酵母混合培養(yǎng)形成二相互作用也可用其他方法驗(yàn)證「倍體在三缺培養(yǎng)基篩選ncbi.nlm.nihgov/ATGGCGTCTTACCAGAACCGTCCAGGAGGTCAGGCCACTGACGAGTACGGAAACCCGATCCAGCAGCAGTATGACGAGTACGGAAATCCGATGGGAGGAGGAGGATACGGAACTGGTGGTGGTGGAGGAGCTACAGGTGGCCAAGGATACGGAACAGGTGGCCAAGGGTACGGATCAGGTGGCCAAGGGTACGGAACCGGTGGCCAAGGATACGGAACCGGGACCGGGACTGAAGGCTTTGGAACTGGCGGGCTTGGGA