注射劑滅菌工藝

注射劑滅菌工藝第1頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證的必要性滅菌安全相關(guān)的藥害事件美國：1971年3月，7個州8家醫(yī)院發(fā)生了405起敗血癥

中國：2006年8月，“欣弗”事件，涉及十幾個省，160多起嚴(yán)重不良反應(yīng)，8人死亡注：引發(fā)藥害事件的產(chǎn)品均通過了無菌檢查第2頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證的必要性無菌檢驗的局限性一：無菌的定義理論上：無菌＝?jīng)]有任何活的微生物實際上：無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在無法對整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗檢驗的結(jié)果只是一個基于“可能性”的判斷無菌檢驗用培養(yǎng)基有其局限性只進(jìn)行細(xì)菌和真菌的檢驗對結(jié)果的判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長”培養(yǎng)條件（如溫度和時間）是有限的我們的工作環(huán)境及操作是在相對無菌的狀態(tài)第3頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證的必要性無菌檢驗的局限性二：產(chǎn)品污染率、無菌檢查抽樣量和無菌檢查“通過”率，可以用如下數(shù)學(xué)公式表示：

P=(1-q)nq：產(chǎn)品污染率

P：無菌檢查通過率

n：無菌檢查抽樣量按照藥典規(guī)定的２０瓶抽樣量，假設(shè)該批產(chǎn)品的污染率為１％，則該批產(chǎn)品“通過”無菌檢查的概率為８２％第4頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證的必要性

我們看一下，當(dāng)固定污染率為0.1%，抽樣20瓶時，通過無菌檢查的通過率：(1-0.001)20=98.0%檢出染菌的概率為2.0%抽樣1000瓶時，通過無菌檢查的通過率：(1-0.001)1000=36.7%檢出染菌的概率為63.3%抽樣3000瓶時，通過無菌檢查的通過率：(1-0.001)

3000=4.97%檢出染菌的概率為95.03%第5頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證的必要性共識－－無菌檢查合格不能得出產(chǎn)品無菌的結(jié)論

滅菌產(chǎn)品的無菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無菌檢驗，而是取決于生產(chǎn)過程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無菌保證體系

滅菌工藝的驗證是無菌保證的必要條件

滅菌工藝經(jīng)過驗證后，方可正式用于生產(chǎn)第6頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月附：無菌產(chǎn)品檢測取樣的時機和位置無菌灌裝產(chǎn)品批開始、結(jié)束及重大故障和調(diào)整后最多24小時為一批USP<1211>每天灌裝的產(chǎn)品應(yīng)分別做無菌檢驗最終滅菌產(chǎn)品從滅菌柜中最冷點取樣對經(jīng)不同滅菌柜滅菌的產(chǎn)品應(yīng)分別進(jìn)行無菌檢驗第7頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證中的幾個常用術(shù)語3

1.無菌保證值SAL：

中國藥典、美國藥典、歐洲藥典都將最終滅菌產(chǎn)品的無菌保證水平規(guī)定為微生物污染概率不超過百萬分之一；采用無菌生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品，其無菌保證水平為微生物污染概率不超過千分之一

第8頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月42、D值：在一溫度下，殺滅90%微生物（或殘存率為10%）所需的滅菌時間。3、Z值：

降低一個lgD值所需升高的溫度，即滅菌時間減少到原來的1/10所需升高的溫度或在相同滅菌時間內(nèi)，殺滅99%的微生物所需提高的溫度。4、F值：

在一定滅菌溫度（T）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果與在參比溫度（T0）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果相同時所相當(dāng)?shù)臅r間。F值以min為單位。

注：參比溫度121℃時為F0,170℃時為FH。滅菌工藝驗證中的幾個常用術(shù)語第9頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證中的幾個常用術(shù)語5、過度殺滅法

F0≥12微生物殘存概率＜10-66、殘存概率法8≤F0＜12微生物殘存概率＜10-67、無菌生產(chǎn)工藝

無菌保證一般只能達(dá)到10-3水平第10頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌工藝驗證中的幾個常用術(shù)語8滅菌率指在某一溫度T(℃)下滅菌lmin所獲得的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間L

L＝F0/FT＝D121℃/DT＝10(T－121)/Z9標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間系滅菌過程賦予一個產(chǎn)品121℃下的等效滅菌時間F0F0=FT×10(T－121)/Z=ΔtΣ10(T－121)/10第11頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月5歐盟滅菌方法選擇的對策

歐盟1999年8月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇的決策樹決策樹的作用是在考慮各種復(fù)雜因素的情況下輔助選擇最佳的滅菌方法第12頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月6溶液劑型產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹產(chǎn)品是否可以在121℃濕熱滅菌15分鐘產(chǎn)品是否可以濕熱滅菌F0≥8分鐘，達(dá)到SAL≤10-6采用高壓滅菌鍋121℃15分鐘是否處方是否可以通過微生物滯留過濾器過濾無菌配藥和灌封采用濕熱滅菌F0≥8分鐘除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合是否是否第13頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月7非溶液劑型、半固體或干粉產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹產(chǎn)品是否可以在160℃干熱滅菌120分鐘產(chǎn)品是否可以在另外一種時間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌達(dá)到SAL≤10-6采用160℃干熱滅菌120分鐘是否產(chǎn)品是否可以用其他非干熱方法滅菌，如電離輻射，吸收最小劑量≥25KGY采用另一種替代時間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌達(dá)到SAL≤10-6是否產(chǎn)品是否可以使用經(jīng)過驗證的稍低輻射劑量滅菌（參見ISO11137）采用最小輻射吸收最小劑量≥25KGY進(jìn)行輻射滅菌是否處方是否可以通過微生物滯留過濾器過濾采用經(jīng)過驗證的輻射劑量滅菌是否無菌配藥和灌封除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合是否第14頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月8決策樹越往下，風(fēng)險越大需要提供的必要證據(jù)越多第15頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月10滅菌工藝驗證要求驗證內(nèi)容：空載熱分布滿載熱分布熱穿透試驗微生物挑戰(zhàn)試驗（殘存概率法）滅菌前微生物污染水平----數(shù)量和耐熱性

----過程控制第16頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月找出冷點多個溫度探頭均勻/重點分布在腔室內(nèi)，重復(fù)運行代表性滅菌程序，記錄個點溫度變化曲線，計算各點溫差通過比較各點溫度與平均溫度的差異確定冷點11空載熱分布試驗第17頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月找出裝載方式下的冷點

以空載試驗結(jié)果為基礎(chǔ)更接近實際情況12滿載熱分布試驗第18頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月熱穿透試驗測定產(chǎn)品實際溫度和F0值以熱分布（空載、滿載）試驗結(jié)果為基礎(chǔ)，進(jìn)一步確定實際樣品（或模擬樣品）的冷點.重要標(biāo)準(zhǔn)冷點F0－平均F0≤2min13第19頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月

14熱穿透試驗注意：同品種不同濃度——考察不同濃度對熱穿透的影響不同包裝規(guī)格——進(jìn)行最大和最小包裝規(guī)格的試驗不同裝載量——進(jìn)行最小和最大裝載量的試驗不同滅菌溫度——進(jìn)行最高溫度條件下的試驗第20頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月15

證明通過該工藝能殺滅一定污染量和D值的微生物

--生物指示劑

--根據(jù)D值計算接種量

--植入芽孢的產(chǎn)品放在冷點部位

--運行滅菌程序后含芽孢的產(chǎn)品應(yīng)通過無菌檢查微生物挑戰(zhàn)試驗第21頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月以上試驗一般應(yīng)連續(xù)進(jìn)行三次空載、滿載熱分布試驗——考察滅菌設(shè)備的特性和狀況

熱穿透和微生物挑戰(zhàn)試驗——考察滅菌設(shè)備在執(zhí)行特定滅菌工藝時賦予產(chǎn)品的F0值，以及對微生物孢子的實際殺滅效果。第22頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌前產(chǎn)品的微生物控制監(jiān)控的原因①產(chǎn)品滅菌前微生物監(jiān)控是國際規(guī)范的要求：世界衛(wèi)生組織GMPl992版第17.50款規(guī)定，應(yīng)制定產(chǎn)品滅菌前微生物污染的控制標(biāo)準(zhǔn)，這一標(biāo)準(zhǔn)與所采用(滅菌)方法的有效性及熱原污染的風(fēng)險相關(guān)。②注射劑滅菌后的無菌保證值與滅菌前產(chǎn)品的微生物污染程度及污染菌的耐熱性有關(guān)，對滅菌前微生物污染的狀況進(jìn)行檢控是對產(chǎn)品作無菌評價的先決條件。③控制滅菌前微生物污染的程度是控制產(chǎn)品熱原污染的重要手段。第23頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌前產(chǎn)品的微生物控制監(jiān)控的標(biāo)準(zhǔn)目前歐洲一些大容量注射劑生產(chǎn)公司采用的標(biāo)準(zhǔn)如下：①每100ml藥液中污染菌不得超過100個。②在設(shè)定的滅菌程序下，污染菌的耐熱性(即D值)不導(dǎo)致滅菌后產(chǎn)品微生物污染的概率大于10－6。第24頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌前產(chǎn)品的微生物控制監(jiān)控方法(1)取樣在正常生產(chǎn)過程中，從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)尾各取一瓶灌封好的產(chǎn)品作滅菌前微生物監(jiān)控檢查。應(yīng)當(dāng)使用事先滅菌并做好標(biāo)記的瓶子取樣。(2)試驗方法①污染水平檢查：先用滅菌的5％吐溫充分濕潤0.45μm濾膜，然后定量過濾藥液，將此濾膜移至營養(yǎng)瓊脂平板上，在30～35℃培養(yǎng)3～7天，計數(shù)。②耐熱性檢查：另用一張0.45μm濾膜，經(jīng)滅菌的5％吐溫充分濕潤后，過濾生物負(fù)荷檢查所剩余的藥液樣品。將此濾膜轉(zhuǎn)移入裝有無菌的待監(jiān)測產(chǎn)品的試管中，在沸水浴上煮沸30min，然后在30～35℃下在硫乙醇酸鹽肉湯中培養(yǎng)，觀察是否有耐熱菌生長。

第25頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌前產(chǎn)品的微生物控制當(dāng)污染水平超標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)對污染菌進(jìn)行鑒別，調(diào)查污染菌的來源并取相應(yīng)糾正措施。當(dāng)耐熱性檢查發(fā)現(xiàn)藥液存在耐熱菌污染時，應(yīng)測定污染菌的D值或采用定時沸騰法將它和已知生物指示劑的D值作比較，然后根據(jù)滅菌的F0值及污染菌的耐熱性對產(chǎn)品無菌作出評價。

如果曝?zé)岷髽悠返臋z測結(jié)果為不長菌，則說明產(chǎn)品中無耐熱孢子第26頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌器溫度均勻度的標(biāo)準(zhǔn)USP24在〈1211〉中規(guī)定，干熱滅菌器在不低于250℃空載運行時，腔室各點允許的溫差范圍在±15℃。USP24提到：在121℃下滅菌時，各測溫點之間的溫差允許在±1℃之內(nèi)。JB20001－2003中規(guī)定：大、小容量注射劑滅菌器的熱分布試驗中，冷點溫度與腔室平均溫度之差≤±1℃；熱穿透試驗中，冷點F0與腔室平均F0之差≤2min.第27頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月干熱滅菌、除熱原的標(biāo)準(zhǔn)BP1993年版規(guī)定：僅以滅菌為最終目的的干熱滅菌系統(tǒng)，必須保證其最小的FH值大于170℃60min。干熱除熱原必須保證其暴露實際溫度和時間相當(dāng)于250℃30min。

說明：250℃30min除熱原效應(yīng)FH＝900

中國藥典2005規(guī)定：

160~170℃×120min;

170~180℃×60min；

250℃×45min（可除熱原）

說明：250℃×45min除熱原效應(yīng)FH＝1365。第28頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月隧道式滅菌干燥機除熱原的標(biāo)準(zhǔn)口服液瓶灌裝聯(lián)動線隧道式滅菌干燥機JB20007.3－2004中規(guī)定：口服液瓶、抗生素瓶在隧道高溫區(qū)300℃以上至少5min。除熱原效應(yīng)FH＝1276；安瓿隧道式滅菌干燥機JB20002.3－2004中規(guī)定：安瓿在隧道高溫區(qū)300℃以上至少4min。除熱原效應(yīng)FH＝1021；表冷式隧道干燥機標(biāo)準(zhǔn)：FH＝1365（與藥典接規(guī)）第29頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月說明過去，很多人將流通蒸氣滅菌法誤認(rèn)為是終端滅菌法。其實流通蒸氣滅菌法應(yīng)以無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾，嚴(yán)格控制與藥液接觸的設(shè)備、器具和環(huán)境的微生物污染水平等）為基礎(chǔ)，流通蒸氣加熱只是無菌生產(chǎn)工藝的補充手段，不計算F0，微生物殘存概率＜10-3

流通蒸氣100℃加熱30分鐘，相當(dāng)于F0值0.24第30頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌器驗證過程中曾遇到的幾個問題1、濕熱滅菌柜腔室內(nèi)溫度上下分層－－排氣不徹底；－－疏水閥堵塞。以前，我們在杭州一家藥廠的一臺老式滅菌柜的驗證過程中曾遇到過這個問題。

2、隧道式烘箱溫度控制顯示與驗證儀溫度差異很大－－測溫探頭質(zhì)量問題；－－測溫探頭位置（高度）。我們在富陽一家藥廠驗證時曾遇到過這個問題。第31頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌器驗證過程中曾遇到的幾個問題3、隧道式烘箱腔室溫度分布差異很大－－部分加熱管損壞；－－進(jìn)風(fēng)、回風(fēng)的調(diào)節(jié)問題。在寧波一家藥廠驗證時曾遇到過這個問題。第32頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗證常見缺陷無包裝規(guī)格無裝載方式未對每一種產(chǎn)品每一種包裝規(guī)格的每一種裝載方式進(jìn)行驗證采用留點溫度計監(jiān)測溫度無溫度探頭校準(zhǔn)記錄驗證的滅菌工藝與實際工藝不一致未驗證最差滅菌條件僅針對生產(chǎn)線進(jìn)行驗證，未結(jié)合產(chǎn)品進(jìn)行驗證設(shè)定的驗證合格標(biāo)準(zhǔn)達(dá)不到無菌保證水平（SAL）10-6第33頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗證常見缺陷生物指示劑使用不規(guī)范國內(nèi)缺乏某些無菌藥品生產(chǎn)必備的檢測儀器－－D值測定儀企業(yè)的微生物實驗室能力薄弱－－缺乏專業(yè)人員－－缺乏菌種分離鑒別的條件和能力無菌生產(chǎn)工藝未進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝和微生物截流量試驗第34頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

1、問：洗烘灌聯(lián)動線在正常運行時，玻璃瓶通過隧道烘箱滅菌后即進(jìn)行灌裝，但當(dāng)灌裝機出現(xiàn)故障或不間斷檢修的情況下，受聯(lián)動線的限制，必然會導(dǎo)致隧道烘箱內(nèi)的一部分玻璃瓶將處于高溫區(qū)，長時間滯留時會不會對瓶本身產(chǎn)生影響？答：要看什么材質(zhì)的，可以做驗證‘，烘洗后做耐酸耐堿試驗。

2、問：熱風(fēng)循環(huán)烘箱溫度時有失控現(xiàn)象，如何解決？答：可以檢查一下溫度傳感器是否失靈，電磁閥是否工作正常：一、更換溫度傳感器，二、更換溫度控制儀。第35頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

3、問：玻璃瓶在隧道烘箱里冷爆的原因和風(fēng)速有關(guān)系嗎？答：玻璃瓶爆裂，其原因就在于溫差或是外力擊打，此問題中的原因是溫差，可能是風(fēng)速的原因，就是說冷卻得不均衡，或是移動過程中接觸到低溫的物體，尤其是熱傳導(dǎo)較快的金屬物體。再有就是所用玻璃瓶的質(zhì)量不很好，建議選用正規(guī)廠家生產(chǎn)的。第36頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

4、在對濕熱滅菌器進(jìn)行熱分布、熱穿透的驗證時，如果柜內(nèi)找到的冷點在3次驗證中不同，該如何處理？

答：一般來說，空載熱分布的冷點應(yīng)該是在確定的位置周圍，否則就可能是設(shè)備、壓力、空氣置換不完全、蒸汽質(zhì)量等原因引起。

對于裝載熱穿透，大容量注射劑（LVP，>100ml）冷點位于產(chǎn)品的幾何中心和沿縱軸位于產(chǎn)品的底部，但需要驗證確認(rèn)。冷點的定位在小容量注射劑中并不典型，因為溶液加熱的速率幾乎與滅菌器相同。

還有，容器的方向也會影響冷點的位置，當(dāng)容器旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)時，可能不存在可辨別的冷點。

如果裝載不變，容量相同，蒸汽穿透不存在阻隔等，冷點仍然無法重現(xiàn)，則應(yīng)檢查設(shè)備、工藝、壓力、蒸汽質(zhì)量等方面可能存在的不確定性。第37頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

5、熱穿透試驗中的模擬樣品是什么概念，是指實驗室小批量樣品嗎？

答：熱穿透試驗中的模擬樣品是指熱穿透性能與真實樣品一致的樣品，不是實驗室小批量樣品。第38頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

6、請問滅菌前微生物污染水平和耐熱性（D值）的測試方法？答：微生物污染水平通常采用濾膜過濾法截留微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)并作微生物計數(shù)。應(yīng)注意過濾的體積、截留微生物的數(shù)量，保證足夠的檢出率（足量的過濾量）和可計數(shù)性（截留的微生物太多就沒法計數(shù)了）。每批產(chǎn)品都進(jìn)行的耐熱性測試并非D值測試，而是所謂沸騰試驗－一種定性試驗。將截留了微生物的濾膜放入裝有同種產(chǎn)品藥液的試管中，進(jìn)行水浴煮沸15分鐘或更長時間，對該藥液進(jìn)行無菌檢查，如陰性則通過，呈陽性，說明污染菌是耐熱菌，則需要進(jìn)一步測D值。99%以上的檢品是非耐熱菌。D值測定相當(dāng)復(fù)雜，請參考《藥品生產(chǎn)驗證指南》（藍(lán)皮書，國家藥監(jiān)局編）第三篇第三章第一節(jié)，有詳細(xì)介紹。第39頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月附：D值測定法生物指示劑耐熱性測定儀在滅菌過程中形成矩形脈沖曲線，即升溫及降溫極快，能保持恒定的溫度，曝?zé)徇^程容易計時。假設(shè)條件微生物存活數(shù)從N0到滅菌終點始終與曝?zé)釙r間呈線性關(guān)系（對數(shù)規(guī)則）。第40頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）①最可能數(shù)測定法將一組樣品（至少10個樣本）置于設(shè)定滅菌溫度下，加熱到設(shè)定時間后，分別作無菌檢查。當(dāng)滅菌溫度T為121℃時，可用下式計算D值DT＝F0/lgN0-lg[2.303lg(n/q)]式中：n――樣品總數(shù)

q――曝?zé)崽幚砗鬅o菌樣品數(shù)第41頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）②估算法系列組（每組至少10個樣品），置于預(yù)定溫度下，按等差遞增的方式設(shè)置不同的曝?zé)釙r間，分別進(jìn)行熱處理，處理后的樣品放入無菌液體中適宜溫度下培養(yǎng)，記錄每組樣品中沒有微生物生長的樣品數(shù)，按下表方式進(jìn)行排列第42頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月選擇從全部生長的最長曝?zé)釙r間組（B）到顯示完全不生長最短曝?zé)釙r間組（G）之間的數(shù)據(jù)計算D值。首先計算出孢子完全殺滅時間tt=tk-d/2-(d/10×∑f)式中：tk――陰性分?jǐn)?shù)范圍下限（全部樣品不長菌所需的最短曝?zé)釙r間）

d――等差值第43頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）然后根據(jù)下式計算D值D＝t/(lgN0+0.2507)假設(shè)N0＝105，其它實驗數(shù)據(jù)如上表所示，則D值的計算為

t＝15－2/2-（2/10×26）=8.8(min)

D=8.8/(5+0.2507)=1.7(min)第44頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月方法二：存活曲線法測試兩個樣品（至少），在設(shè)定溫度下（如121℃）分別取兩個不同的曝?zé)釙r間，然后將熱處理后的樣品及對照樣品（未經(jīng)熱處理的樣品）采用平皿計數(shù)法或經(jīng)薄膜過濾并置于適當(dāng)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)的方法對每個樣品中存活微生物進(jìn)行計數(shù)（NS），將實驗數(shù)據(jù)的平均值取常用對數(shù)（lg），對相應(yīng)的曝?zé)釙r間F0作圖，可得如圖所示的存活曲線第45頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月在存活曲線上，從微生物差值為一個對數(shù)單位的二個點分別作X軸和Y軸的平行線，在X軸上即可求得D值，也可用下面的公式計算D121℃＝F0/（lgN0－lgNS）舉例：D值測定中曝?zé)釙r間為5min,而N0＝105，NS＝102，則D121℃＝5/(lg105-lg102)=5/3=1.7(min)第46頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月方法二：存活曲線法從上圖中也可以看出，D值為存活曲線斜率的負(fù)倒數(shù)（－1/K），因此D值可在存活曲線的直線段，用未加權(quán)最小二次線性回歸分析法按下式求得式中u――曝?zé)釙r間

y－－曝?zé)釛l件下存活菌落數(shù)的平均值

n――所得初驗數(shù)據(jù)的組數(shù)第47頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答7、對于選擇殘存概率法最終滅菌的產(chǎn)品，如果滅菌前每批檢測微生物限度，而微生物限度檢測時間為72小時，而實際連續(xù)生產(chǎn)的生產(chǎn)周期遠(yuǎn)遠(yuǎn)短于72小時，其檢測結(jié)果僅是對滅菌后產(chǎn)品無菌保證水平的參考嗎？

答：顯然滅菌前微生物含量檢查的結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于生產(chǎn)過程，其目的不是用于對當(dāng)批產(chǎn)品的中間控制。該檢查的意義主要有兩項：第一，用于評價該批產(chǎn)品的無菌保證水平；第二，長期積累了多批滅菌前微生物含量的數(shù)據(jù)后，可以對生產(chǎn)系統(tǒng)在滅菌前的各工藝步驟的微生物污染狀況作整體的評估，從而指示該生產(chǎn)體系是否有效地將微生物污染控制在很好的水平，是否需要進(jìn)行改進(jìn)等。第48頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

8、請問微生物種類、數(shù)量研究的方法？所需的設(shè)備？如果采用殘存概率法，是否在生產(chǎn)過程中必須對微生物水平進(jìn)行測定？答：微生物污染的程度－即數(shù)量的檢查可以按照藥典收載的微生物限度檢查方法進(jìn)行；微生物的種類可以從以下幾方面依次展開：1）通過肉眼觀察菌落形態(tài)；2）鏡檢形態(tài)和運動性；3）一般生化試驗：革蘭氏染色或3％KOH試驗；4）生化鑒定（即API試驗）鑒別到種。采用殘存概率法時，應(yīng)該檢測產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平，包括污染菌的煮沸試驗（如100℃，15分鐘）和微生物計數(shù)。

第49頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

9、過度殺滅法是否確定不需進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗？答：過度殺滅法的內(nèi)涵是產(chǎn)品中的微生物下降12個對數(shù)，微生物挑戰(zhàn)試驗是證明微生物的殘存概率不大于10-6，故過度殺滅法可不進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗。第50頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月注射劑生產(chǎn)常見問題問答

10、如何進(jìn)行藥液儲存周期驗證，儲存周期起點、終點如何確定，使配制完成后→滅菌前，還是過濾后→滅菌前，取樣點如何設(shè)置，檢驗方法及合格判定標(biāo)準(zhǔn)如何確定？

答：進(jìn)行藥液儲存時間驗證的目的是為了確保藥液的微生物水平控制在下道工藝要求范圍內(nèi)并確保對產(chǎn)品的無菌性和內(nèi)毒素等質(zhì)量指標(biāo)無不良影響。一般來講，配液完成后到無菌過濾前，或過濾完成后到滅菌前（終端滅菌產(chǎn)品）是考察的重點，方法和標(biāo)準(zhǔn)需要根據(jù)自己產(chǎn)品的工藝特點確定。第51頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月討論1:隧道式滅菌干燥機的傳輸速度提請注意審核一下你們注射劑工藝規(guī)程中，是否規(guī)定的干熱滅菌干燥機傳輸帶的運行速度？沒有制定傳輸帶的運行速度，滅菌除熱原的效果（時間）靠什么保證？再請大家審核一下你們以前做的驗證方案或驗證報告（包括委托專業(yè)公司進(jìn)行的驗證），里面有沒有體現(xiàn)出“傳輸速度”這個關(guān)鍵的驗證點呢？倘若這個點沒有出現(xiàn)在方案或報告中，你驗證的是什么呢？第52頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月討論2：裝載熱分布和熱穿透合做試驗的分析濕熱滅菌柜驗證時，裝載熱分布和熱穿透試驗?zāi)闶欠珠_做還合在一起做的呢？當(dāng)你合在一起做時候，哪些探頭是用于熱分布的，哪些是用于熱穿透的，你標(biāo)注清楚了嗎？你合在一起做的目的描述了嗎？對兩組數(shù)據(jù)分析了嗎？濕熱滅菌柜的測溫探頭的裝置方式，不同企業(yè)有時是不同的，有的是暴露在滅菌環(huán)境中，測空氣的溫度，有的則裝在模擬產(chǎn)品中，測滅菌產(chǎn)品內(nèi)部的溫度。也就是說，有的和熱分布是一致的，有的和熱穿透試驗是一致的，不同的安裝方式對于你制定滅菌程序時的影響你考慮了嗎？第53頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么齊二藥事件不法商人王桂平偽造藥品生產(chǎn)許可證等證件，于２００５年１０月將工業(yè)原料二甘醇假冒藥用輔料丙二醇出售給齊二藥?；炇抑魅侮惞鸱业热宋磳z測圖譜與“藥用標(biāo)準(zhǔn)丙二醇圖譜”進(jìn)行對比鑒別，并在發(fā)現(xiàn)檢驗樣品“相對密度值”與標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重不符的情況下，將其改為正常值，簽發(fā)合格證，致使假藥“亮菌甲素注射液”出籠并造成１１名患者使用該產(chǎn)品后出現(xiàn)急性腎功能衰竭并死亡。第54頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么“欣弗”事件安徽華源生物藥業(yè)有限公司2006年6月至7月生產(chǎn)的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批準(zhǔn)的工藝參數(shù)滅菌，降低滅菌溫度，縮短滅菌時間，增加滅菌柜裝載量，影響了滅菌效果。經(jīng)中國藥品生物制品檢定所對相關(guān)樣品進(jìn)行檢驗，結(jié)果表明，無菌檢查和熱原檢查不符合規(guī)定。工藝參數(shù)不得任意進(jìn)行更改第55頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么甲氨蝶呤事件上海華聯(lián)制藥廠在生產(chǎn)過程中，現(xiàn)場操作人員將硫酸長春新堿尾液混于注射用甲氨蝶呤及鹽酸阿糖胞苷等批號藥品中，導(dǎo)致了多個批次的藥品被硫酸長春新堿污染，造成重大的藥品生產(chǎn)質(zhì)量責(zé)任事故標(biāo)識、清場、工作態(tài)度、培訓(xùn)第56頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么完達(dá)山刺五加注射液事件

2008年7月1日，昆明特大暴雨造成庫存的刺五加注射液被雨水浸泡。完達(dá)山藥業(yè)公司云南銷售人員張某從完達(dá)山藥業(yè)公司調(diào)來包裝標(biāo)簽，更換后銷售。正是這些被雨水浸泡過的產(chǎn)品，致使3名使用該藥品的患者死亡。

二次污染、貯存條件、標(biāo)簽管理第57頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月附件1：滅菌器驗證流程1.首次驗證

2.偏差管理、變更控制

3.再驗證

4.階段性的風(fēng)險評估

第58頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證用戶要求

URS（UserRequirementSpecification）

︱功能標(biāo)準(zhǔn)

FDS（FunctionalDesignSpecification

︱設(shè)計確認(rèn)

DQ（DesignQualification）

︱工廠測試

FAT（FactoryAcceptanceTest）

︱現(xiàn)場測試

SAT（SiteAcceptanceTest）︱安裝確認(rèn)

IQ（InstallationQualification）︱運行確認(rèn)

OQ（OperationalQualification）︱性能確認(rèn)

PQ（PerformanceQualification）第59頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－用戶要求URS1.工藝描述(產(chǎn)品,部件)生產(chǎn)流程介紹、滅菌的工藝、產(chǎn)品特性,物料的特性、產(chǎn)量、滅菌的效果達(dá)到要求,(Temp&Time;FO)等2.滅菌柜驗證的主要合格標(biāo)準(zhǔn)3.一些指南的要求4.環(huán)境和安全要求5.技術(shù)要求及布局要求機械部分的要求電氣部分的要求控制系統(tǒng)的要求6.介質(zhì)的要求第60頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月URS的關(guān)注點對于自己列出的要求,首先要自己判斷是否理解，是否合理由于設(shè)備大都是按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計的,必須確保供應(yīng)商對URS仔細(xì)閱讀第61頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－功能標(biāo)準(zhǔn)FDS由供應(yīng)商提供設(shè)備控制系統(tǒng)對驗證的設(shè)計也是FDS的一部分

大多設(shè)備的FDS都是針對型號編寫的,可以要求供應(yīng)商提供FDS/URS符合表第62頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－設(shè)計確認(rèn)DQDQ的參考資料:URS/FDS/圖紙/法規(guī)確保設(shè)計滿足URS和法規(guī)的要求對于FDS和URS的不符合項,需要作出決定是整改還是接受

從DQ開始,所有的文件變更都是GMP檢查的范圍!第63頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－工廠測試FAT在出廠之前對設(shè)備進(jìn)行整體的測試對制造文件的詳細(xì)檢查材料(材質(zhì)證明)焊接檢查壓力容器證書對于IQ/OQ中一些無法檢查的項目,需要安排在FAT中進(jìn)行，如：一些控制功能的模擬,一些挑戰(zhàn)實驗第64頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－現(xiàn)場測試SAT設(shè)備在現(xiàn)場組裝完成后進(jìn)行的整體測試確保系統(tǒng)能按設(shè)計要求正常運轉(zhuǎn)是對員工進(jìn)行培訓(xùn)的機會開始準(zhǔn)備SOP可以作為IQ的準(zhǔn)備第65頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－安裝確認(rèn)IQ文件的檢查 儀表與管道的檢查介質(zhì)的檢查設(shè)備主要特性及安全特性的檢查第66頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－運行確認(rèn)OQ儀表的校準(zhǔn)（控制用儀表和記錄用儀表）LOOP測試安全檢查報警測試單項功能測試整體性能測試程序運行電子記錄和電子簽名的測試第67頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－性能確認(rèn)PQ1前提條件滅菌柜IQ、OQ完成程序及裝載的預(yù)測試完成純蒸汽的PQ第一第二階段完成壓縮空氣的PQ完成驗證儀器的確認(rèn)完成SOP完成,所用的程序和裝載方式確定人員培訓(xùn)完成所有的測試材料準(zhǔn)備完畢第68頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月首次驗證－－性能確認(rèn)PQ2.PQ中的重要測試項目空腔體溫度分布最小裝載的溫度分布最大裝載的溫度分布中間裝載的溫度分布(根據(jù)實際情況)微生物挑戰(zhàn)實驗泄漏率測試AirDetector測試對于每一種測試,重復(fù)三次第69頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌驗證的一些基本要求驗證用儀器必須提供校準(zhǔn)證書熱電偶/電阻在使用前和使用后都必須進(jìn)行校準(zhǔn)對于大容量的瓶子,熱電偶/電阻在瓶子中的位置必須進(jìn)行確認(rèn)如果采用替代物質(zhì)進(jìn)行PQ,必須進(jìn)行等同性測試必須確定產(chǎn)品滅菌的接受標(biāo)準(zhǔn)F0值的范圍對于濕熱滅菌柜,需要考慮平衡時間對于收集的數(shù)據(jù),必須及時進(jìn)行分析,總結(jié)第70頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月偏差管理和變更控制對于驗證過程中出現(xiàn)的偏差必須遵循偏差管理的流程如果需要變更,則還需要遵循變更的流程第71頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月再驗證滅菌的程序和裝載發(fā)生變化后,必須進(jìn)行再驗證滅菌柜使用一定周期后,必須對程序和裝載進(jìn)行再次確認(rèn).通常為一年再驗證的策略是列出程序和裝載的列表,有選擇地對關(guān)鍵裝載進(jìn)行再驗證第72頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月風(fēng)險評估幾個術(shù)語：

風(fēng)險：是危害發(fā)生的可能性和嚴(yán)重性的組合。風(fēng)險管理：即系統(tǒng)性的應(yīng)用管理方針、程序?qū)崿F(xiàn)對目標(biāo)、任務(wù)的風(fēng)險分析、評價和控制。風(fēng)險分析：運用有用的信息和工具，對危險進(jìn)行識別、評價。風(fēng)險控制：即制定減小風(fēng)險的計劃和對風(fēng)險減少計劃的執(zhí)行，及執(zhí)行后結(jié)果的評價。第73頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月風(fēng)險管理有什么風(fēng)險?從哪兒來?對什么有影響?嚴(yán)重程度怎樣?我們?nèi)绾螒?yīng)對?第74頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月風(fēng)險管理的應(yīng)用程序風(fēng)險回顧

風(fēng)險評估風(fēng)險評價

不接受風(fēng)險控制

風(fēng)險分析

風(fēng)險消減

風(fēng)險確認(rèn)

事件的回顧

風(fēng)險的接受

開始風(fēng)險管理程序

風(fēng)險管理的結(jié)果

風(fēng)險評估的工具

風(fēng)險信息的交流第75頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月風(fēng)險管理過程風(fēng)險評估對危害源的鑒定和對接觸這些危害源造成的風(fēng)險的分析和評估1）什么時候出錯2）出錯的可能性有多大3）結(jié)果是什么（嚴(yán)重性）風(fēng)險控制制訂降低和/或接受風(fēng)險的決定1）風(fēng)險是否在可接受的水平以上？2）怎么才能降低、控制或消除風(fēng)險3）在利益、風(fēng)險和資源間合適的平衡點是什么？4）作為鑒定風(fēng)險控制結(jié)果而被引入的新的風(fēng)險是否處于受控狀態(tài)風(fēng)險通報風(fēng)險回顧決策制訂人及其他人員之間交換或分享風(fēng)險及其管理信息風(fēng)險管理的過程結(jié)果應(yīng)結(jié)合新的知識與經(jīng)驗進(jìn)行回顧風(fēng)險評估風(fēng)險評估第76頁，課件共88頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)量風(fēng)險的評估風(fēng)險評估是基于對危害發(fā)生的頻次和危害程度這兩方面考慮而得出的綜合結(jié)論，評估結(jié)果需被量化。發(fā)生的可能第1級:稀少(發(fā)生頻次小于每十年一次)第2級:不太可能發(fā)生(每十年一次)第3級:可能發(fā)生(每五年一次)第4級:很可能發(fā)生(每一年一次)第5級:經(jīng)常發(fā)生(幾乎每次都可能發(fā)生)嚴(yán)重程度第1級:可忽略第2級: