乳酸菌的篩選及應(yīng)用課件

乳酸菌的篩選及應(yīng)用鄒遠(yuǎn)強(qiáng)2010年7月12日7/25/20231乳酸菌的篩選及應(yīng)用7/24/20231乳酸菌的分類乳酸菌的篩選乳酸菌的應(yīng)用7/25/20232乳酸菌的分類7/24/20232第一部分、乳酸菌的分類指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細(xì)菌；分為18個(gè)屬，共有200多種；大部分是人體內(nèi)必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其廣泛存在于人體的腸道中。一、乳酸菌7/25/20233第一部分、乳酸菌的分類指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、二、乳酸菌的分類運(yùn)動(dòng)性：通常不運(yùn)動(dòng)，有的能夠運(yùn)動(dòng),具有周生鞭毛。營養(yǎng)類型：化能異氧型需氧情況：微好氧性1、乳桿菌屬（Lactobacillus）形態(tài)：細(xì)胞呈長或細(xì)長桿狀、彎曲形短桿狀,一般成鏈狀排列7/25/20234二、乳酸菌的分類運(yùn)動(dòng)性：通常不運(yùn)動(dòng)，有的能1、乳桿菌屬（La形態(tài)：細(xì)胞呈球形或卵圓形，成對或成鏈排列運(yùn)動(dòng)性：一般不遠(yuǎn)動(dòng)

營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型

需氧情況：兼性厭氧型2、鏈球菌屬（Streptococcus）7/25/20235形態(tài)：細(xì)胞呈球形或卵圓形，成對或成鏈排列2、鏈球菌屬（St形態(tài)：細(xì)胞球形或豆?fàn)?，成對或成鏈排列運(yùn)行性：不運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：兼性厭氧型3、明串珠菌屬（Leuconostoc）7/25/20236形態(tài)：細(xì)胞球形或豆?fàn)?，?、明串珠菌屬（Leuconos形態(tài)：細(xì)胞呈多樣形態(tài)：Y字形、V字形、彎曲狀、勺形，典形形態(tài)為分叉桿菌運(yùn)行性：不運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：專性厭氧4、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）7/25/20237形態(tài)：細(xì)胞呈多樣形態(tài)：Y字形、4、雙歧桿菌屬（Bifidob形態(tài)：細(xì)胞球形，成對或四聯(lián)狀排列運(yùn)行性：不運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：兼性厭氧5、片球菌屬（Pediococcus）7/25/20238形態(tài)：細(xì)胞球形，成對或四聯(lián)狀5、片球菌屬（Pediococ第二部分、乳酸菌的篩選乳酸菌絕大多數(shù)都是厭氧菌或兼性厭氧的化能營養(yǎng)菌。生長繁殖于厭氧或微好氧、礦物質(zhì)和有機(jī)營養(yǎng)物豐富的環(huán)境中。具體如下：（1）與動(dòng)物相關(guān)分布：乳汁、消化道、糞便等；（2）與植物相關(guān)分布：花蜜、樹液、植物殘骸、果實(shí)損傷部位等；（3）發(fā)酵食品：泡菜、醬油、發(fā)酵肉制品等；（4）乳酸飲料：酸奶等。一、乳酸菌的分布7/25/20239第二部分、乳酸菌的篩選乳酸菌絕大多數(shù)都是厭氧菌或

（一）溶鈣圈法

利用一些產(chǎn)酸類細(xì)菌在含CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生CaCO3溶解圈，從而篩選出這些產(chǎn)酸類細(xì)菌，可用于乳酸菌的篩選。其中培養(yǎng)基中加入CaCO3的作用是：①鑒別能產(chǎn)生酸的細(xì)菌；②中和產(chǎn)生的酸，以維持培養(yǎng)基的PH。二、篩選方法7/25/202310（一）溶鈣圈法二、篩選方法7/24/2023101、乳酸菌篩選培養(yǎng)基（MRS培養(yǎng)基）

配方（1L）:

蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，K2HPO42.0g，檸檬酸三銨2.0g，乙酸鈉5.0g，葡萄糖20.0g，吐溫801.0mL，MgSO4·7H2O0.5g，MnSO4·4H2O0.25g配制：1.調(diào)PH至6.2～6.4；2.稱取20gCaCO3加入到100mL蒸餾水中，制成CaCO3乳濁液；3.將MRS培養(yǎng)基和CaCO3乳濁液分開滅菌；4.倒平板前，待培養(yǎng)基融化冷卻后，平板上加入一定量的CaCO3乳濁液，晾干了以后再接種。7/25/2023111、乳酸菌篩選培養(yǎng)基（MRS培養(yǎng)基）配制：7/24/202

樣品預(yù)處理→梯度稀釋至10-6→選擇合適的稀釋度涂布→37℃培養(yǎng)48h→挑選產(chǎn)生溶鈣圈的菌落反復(fù)在MRS培養(yǎng)基上劃線→挑起單菌落染色，經(jīng)鏡檢確認(rèn)為純種→挑選革蘭氏陽性單菌落→試管穿刺4℃冰箱保存。2、篩選過程7/25/202312樣品預(yù)處理→梯度稀釋至10-6→選擇合（二）溴甲酚綠指示劑法1、培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基（含溴甲酚綠酒精溶液）2、篩選過程：同上，不同之處是稀釋涂布后長出菌落，挑取使溴甲酚綠變色的菌落。7/25/202313（二）溴甲酚綠指示劑法1、培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基（含溴甲酚綠酒（三）幾種乳酸菌篩選舉例樣品來源：市售酸奶培養(yǎng)基：M17改良培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：42℃需氧情況：兼性厭氧

篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離1、嗜熱鏈球菌7/25/202314（三）幾種乳酸菌篩選舉例樣品來源：市售酸奶1、嗜熱鏈球菌72、保加利亞乳桿菌

樣品來源：市售酸奶培養(yǎng)基：牛肉浸膏1.5％，酵母浸膏0.5％，葡萄糖3.0％，檸檬酸三銨0.2％，七水硫酸鎂0.02％，瓊脂1.5％，pH5.1。培養(yǎng)溫度：42℃需氧情況：兼性厭氧篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離法7/25/2023152、保加利亞乳桿菌7/24/202315樣品來源：嬰兒新鮮糞便培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基、NPNL培養(yǎng)基、TYP培養(yǎng)基、PTYG培養(yǎng)基

培養(yǎng)溫度：37℃

需氧情況：嚴(yán)格厭氧篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離法3、雙歧桿菌7/25/202316樣品來源：嬰兒新鮮糞便3、雙歧桿菌7/24/202316第三部分、乳酸菌的應(yīng)用一、乳酸菌的生理功能①維持腸道菌群的微生態(tài)平衡；②增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；③預(yù)防和抑制腫瘤發(fā)生；④提高營養(yǎng)利用率、促進(jìn)營養(yǎng)吸收；⑤控制內(nèi)毒素、降低膽固醇；⑥延緩機(jī)體衰老。7/25/202317第三部分、乳酸菌的應(yīng)用一、乳酸菌的生理功能①維持腸道菌群的微二、乳酸菌的應(yīng)用1、乳酸菌在食品、飲料中的應(yīng)用

（1）酸奶；（2）乳酸飲料；（3）釀造調(diào)味品中的應(yīng)用；（4）功能性食品的開發(fā)；（5）防腐、保鮮；（6）肉制品加工；（7）腌漬物等。7/25/202318二、乳酸菌的應(yīng)用1、乳酸菌在食品、飲料中的應(yīng)用7/24/22、乳酸菌在醫(yī)藥中的應(yīng)用（1）乳酸菌素；（2）γ-氨基丁酸(GABA)7/25/2023192、乳酸菌在醫(yī)藥中的應(yīng)用7/24/2023193、開發(fā)可降解的聚乳酸塑料7/25/2023203、開發(fā)可降解的聚乳酸塑料7/24/202320

（1）聚乳酸（PLA）簡介

聚乳酸是以微生物發(fā)酵產(chǎn)物乳酸為單體用化學(xué)合成方法聚合而成的一種高分子材料，它無毒、無刺激性。聚乳酸制品廢棄后在土壤或水中，30天內(nèi)會(huì)在微生物、水、酸和堿的作用下徹底分解成CO2和H2O，不會(huì)對環(huán)境產(chǎn)生污染，因而是一種完全可生物降解的材料。7/25/202321（1）聚乳酸（PLA）簡介7/24/202321目前聚乳酸的生產(chǎn)和制備主要有：

（2）聚乳酸的生產(chǎn)過程①直接聚合法；②間接法；③聚合法。7/25/202322目前聚乳酸的生產(chǎn)和制備主要有：（2）聚乳酸的生產(chǎn)過程①直接（3）聚乳酸的應(yīng)用①醫(yī)用領(lǐng)域：如生產(chǎn)一次性輸液用具、免拆型手術(shù)縫合線、骨科用固定件及手術(shù)器件、醫(yī)用支架、生物導(dǎo)管等；②包裝材料：目前，各種包裝材料是聚乳酸最大、最有潛力的應(yīng)用市場。適合于加工一次性飯盒以及其他食品、飲料等外包裝材料等；③纖維：聚乳酸纖維是由聚乳酸經(jīng)常規(guī)紡絲工藝制得的生物合成纖維，可制成復(fù)絲、單絲、短纖維、針織物、非織造布等，還可用作建筑材料、農(nóng)業(yè)用材等。7/25/202323（3）聚乳酸的應(yīng)用①醫(yī)用領(lǐng)域：如生產(chǎn)一次性輸液用具、免拆型手

PLA作為一個(gè)新型的醫(yī)用、生物可降解塑料在我國有廣闊的市場發(fā)展前景。生物降解塑料大多數(shù)是天然高分子與常用塑料復(fù)合體系，或基于天然高分子(主要是淀粉、纖維素)的改性。