細(xì)菌內(nèi)毒素（凝膠法）操作SOP

細(xì)菌內(nèi)毒素（凝膠法）操作SOP編號(hào)：SOP-ZL002-01頁碼：1/3版本號(hào)：01修訂號(hào)：00機(jī)密等級(jí)：秘密起草人起草日期頒發(fā)部門質(zhì)量管理部審核人審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期生效日期分發(fā)清單研發(fā)部[]質(zhì)量管理部[]綜合管理部[]生產(chǎn)管理部[]市場(chǎng)銷售部[]財(cái)務(wù)部[]目的建立血清內(nèi)毒素檢驗(yàn)操作規(guī)程，以確保內(nèi)毒素控制效果。適用范圍初制、精制血清的內(nèi)毒素檢驗(yàn)操作。職責(zé)3.1．質(zhì)量管理部：負(fù)責(zé)本規(guī)程的起草。3.2．質(zhì)量管理部檢驗(yàn)人員：負(fù)責(zé)本規(guī)程的操作。3.3．總經(jīng)理:負(fù)責(zé)本規(guī)程的起草。定義無引用標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》四部2015版材料及設(shè)備6.1.1.鱟試劑，應(yīng)具有國(guó)家主管部門的批準(zhǔn)文號(hào)。6.1.2.試管架、洗耳球、醫(yī)用膠布、時(shí)鐘、脫脂棉、吸水紙、剪刀、砂輪等。6.1.3.刻度吸管6.1.4.細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（NSE）、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（WSE）6.1.5.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水）6.1.6.試管架、洗耳球、醫(yī)用膠布、時(shí)鐘、脫脂棉、吸水紙、剪刀、砂輪等。6.1.7.電熱干燥箱：溫度應(yīng)能維持250℃以上。6.1.8.恒溫試管儀應(yīng)能在（37±1）℃保持1h。9.1.9.旋渦混合器流程圖無內(nèi)容8.1.供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。8.1.1.計(jì)算MVD值：MVD＝C·L／λ根據(jù)《中國(guó)藥典》現(xiàn)行版L＝10EU／ml，故C為1.0ml／ml。當(dāng)λ=0.06EU／ml時(shí)。MVD＝C·L／λ＝1.0×10／0.06＝160制備供試品溶液其稀釋倍數(shù)不得超過160倍。8.1.2.陽性對(duì)照溶液的制備，用BET水制成4λ(0.25)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。8.1.3.供試品陽性對(duì)照液的制備用被測(cè)供試品將WSE制成0.25EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。8.1.4.鱟試劑的制備：取0.lml／支的鱟試劑5支，加入0.lmlBET水復(fù)溶，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。8.2.加樣復(fù)溶后的0.lml／支規(guī)格的鱟試劑安培5支，其中2支加入0.1ml最大有效稀釋的供試品溶液作為供試品管,1支加入0.1ml用BET水將WSE制成的0.25EU/ml濃度的內(nèi)毒素溶液作為陽性對(duì)照，l支加入0.1mlBET水作為陰性對(duì)照，1支加入0.1ml供試品陽性對(duì)照溶液作為供試品陽性對(duì)照管。加樣結(jié)束后，混勻保溫放入（37±1）℃恒溫水浴中，（60±2）min后觀察結(jié)果。8.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果將安瓿從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180度時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形,不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（＋）;凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性,記錄為（一）。a鱟試劑靈敏度復(fù)核如最大濃度2.0λ4管均為陽性，最低濃度0.25λ4管均為陰性，陰性對(duì)照為陰性，求反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的復(fù)核結(jié)果（λ）。b干擾實(shí)驗(yàn)：如內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液最大濃度2.0λ4管均為陽性，最低濃度0.25λ4管均為陰性，陰性對(duì)照為陰性，求用BET水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值（ES）和用供試品稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值（Et）。8.4.結(jié)果判斷a鱟試劑靈敏度復(fù)核：當(dāng)λ在0.5λ～2.0λ(包括0.5λ、2.0λ)方可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以λ（標(biāo)示靈敏度）為該批鱟試劑的靈敏度。b干擾實(shí)驗(yàn)當(dāng)Es在0.5λ2.0λ(包括0.5λ、2.0λ)時(shí)，且當(dāng)Et在0.5Es～2.0Es(包括0.5Es、2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，否則使用更靈敏的鱟試劑，對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行干擾試驗(yàn)。c供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品2管均為（一），應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定。如2管均為（＋）,應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如2管其中1管為（＋），另1管為（一），按上述方法另取4支鱟試劑與供試品進(jìn)行復(fù)試，4管中只要有1管為（＋），即認(rèn)為不符合規(guī)定。若第一次試驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而結(jié)果出現(xiàn)2管為（＋）或2管中1管為（＋），另1管為（一）時(shí)，按同樣方法復(fù)試和判定，復(fù)試時(shí)要求將其稀釋至MVD。若陽性對(duì)照（一）或供試品陽性對(duì)照為（一）或陰性對(duì)照為（＋），試驗(yàn)失