《動物細(xì)胞融合和單克隆抗體》復(fù)習(xí)

動物細(xì)胞融合和單克隆抗體1.動物細(xì)胞融合（1）概念：指兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成的過程。（2）融合方法：

、

、電激等。（3）意義：突破了

的局限，使成為可能，也為制造

開辟了新途徑。一個(gè)細(xì)胞聚乙二醇（PEG）滅活的病毒有性雜交方法遠(yuǎn)緣雜交單克隆抗體知識梳理2.單克隆抗體的制備過程單克隆抗體的特點(diǎn)：

、

。特異性強(qiáng)靈敏度高雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞融合方法用纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散后，誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)手段離心、電刺激、振動、顯微操作、聚乙二醇等誘導(dǎo)與植物體細(xì)胞雜交相比，還可用滅活的病毒誘導(dǎo)結(jié)果獲得雜種植株獲得雜種細(xì)胞，以生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品重難點(diǎn)解析用途克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，擴(kuò)展雜交親本范圍，培育新品種制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等相同點(diǎn)①兩者在融合過程中都會發(fā)生多種融合方式，如A—A，B—B，A—B，因此要進(jìn)行篩選；②兩者都要用到細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)兩種技術(shù)手段2.單克隆抗體制備過程中兩次篩選的目的及方法（1）在特定的選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞）和融合的具有同種核的細(xì)胞（BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞）都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞（雜交瘤細(xì)胞）才能生長。這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生單一的特異性抗體。（2）經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞（很多種雜交瘤細(xì)胞），需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選后可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞?！咎貏e提醒】

（1）植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合需注意的問題①植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合中酶的作用對象不同，纖維素酶和果膠酶作用于細(xì)胞壁，而胰蛋白酶等作用于細(xì)胞間質(zhì)。②植物雜交細(xì)胞在激素誘導(dǎo)下能表達(dá)出全能性，但動物雜交細(xì)胞的全能性不能表達(dá)。（2）單克隆抗體制備過程中需注意的幾個(gè)問題①滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。②除了受到注射的抗原的刺激，小鼠在生活過程中還可能受到其他抗原的刺激，因此從小鼠體內(nèi)取出的多個(gè)B淋巴細(xì)胞可能產(chǎn)生多種不同抗體，所以進(jìn)行第二次篩選是非常必要的。③單克隆抗體制備過程中，進(jìn)行了多次動物細(xì)胞培養(yǎng)的操作，說明動物細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)?！飭慰寺】贵w的制備在近幾年新課標(biāo)高考中考查熱點(diǎn)，每年都有所涉及，一般起點(diǎn)較高，而落點(diǎn)較低?？键c(diǎn)展望［真題回顧］判斷單克隆抗體制備的正誤：（1）動物雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生單克隆抗體能體現(xiàn)細(xì)胞全能性（2012·江蘇卷T22C）

（×）（2）體細(xì)胞雜交技術(shù)可用于克隆動物和制備單克隆抗體（2011·江蘇卷T14）

（×）（3）B淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有B淋巴細(xì)胞中的抗體基因（2010·全國卷ⅡT5A）

（√）（4）雜交瘤技術(shù)可用于制備單克隆抗體（2010·廣東卷T24B）

（√）［考點(diǎn)分向］考向一植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較1.（2014·浙江四校調(diào)研）植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞工程中所用技術(shù)與原理不相符的是（）A.纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理——酶的專一性B.植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)——細(xì)胞的全能性C.原生質(zhì)體融合和動物細(xì)胞融合——生物膜的流動性D.紫草細(xì)胞培養(yǎng)和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)——細(xì)胞分裂【解析】

植物組織培養(yǎng)的原理是細(xì)胞的全能性，而動物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是細(xì)胞的增殖?！敬鸢浮?/p>

B2.無論是植物細(xì)胞，還是動物細(xì)胞，都可以利用一定的方法誘導(dǎo)融合，可用模型圖表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過程，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.若該過程表示植物原生質(zhì)體的融合，則甲、乙細(xì)胞可用酶解法獲取B.若該過程表示體外受精，則甲、乙細(xì)胞都需要經(jīng)過準(zhǔn)備階段C.若該過程表示制備單克隆抗體，則丙細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞D.以上三個(gè)過程可以用同一種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合【解析】

若圖示過程表示植物原生質(zhì)體的融合，在形成甲、乙細(xì)胞之前需用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，可用聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)細(xì)胞融合；若圖示過程表示體外受精，則甲、乙細(xì)胞應(yīng)代表精子與卵細(xì)胞，其中精子需要獲能處理，卵細(xì)胞需要培養(yǎng)成熟，兩者可在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫蝗魣D示過程表示單克隆抗體的制備，則丙細(xì)胞是B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成的雜交瘤細(xì)胞，可用聚乙二醇（PEG）或滅活的病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合；可見，以上三個(gè)過程不能用同一種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合?！敬鸢浮?/p>

D考向二單克隆抗體的制備3.（2013·重慶理綜）下圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關(guān)敘述，正確的是（）A.①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞B.②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成C.③同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性D.④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群【解析】

①是獲得已經(jīng)免疫的B細(xì)胞，A項(xiàng)錯(cuò)誤；胰蛋白酶使得組織塊分散為單個(gè)細(xì)胞，B項(xiàng)錯(cuò)誤；③同時(shí)具有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的特性，C項(xiàng)錯(cuò)誤；④經(jīng)篩選后獲得能夠分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，D項(xiàng)正確。【答案】

D4.（2013·海南單科）單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）可引起水皰性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV-1的單克隆抗體可快速檢測HSV-1?；卮鹣铝袉栴}：（1）在制備抗HSV-1的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-1蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗

的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了

反應(yīng)，再從小鼠的

中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的

細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是

。（2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的

中使其增殖，再從

中提取、純化獲得。（3）通過上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識別這種HSV-1蛋白，其原因是該抗體具有

和

等特性?！窘馕觥?/p>

制備單克隆抗體時(shí)，需要先給小鼠注射特定抗原（HSV-1蛋白），當(dāng)小鼠血清中抗HSV-1蛋白的抗體檢測呈陽性時(shí)，就可從小鼠脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞，將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過篩選和克隆化培養(yǎng)，最終獲得既能無限增殖又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞。（2）單克隆抗體的獲取有兩條途徑，是從體外細(xì)胞培養(yǎng)液中提純獲得，二是將雜交瘤細(xì)胞注