G試驗研究新進展及規(guī)范化操作 苑慶華

G試驗研究新進展及規(guī)范化操作北京金山川科技發(fā)展有限公司天津市一瑞生物工程有限公司侵襲性真菌感染(IFI)指致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜、肌肉和內(nèi)臟器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性較大。條件致病性真菌念珠菌屬曲霉屬隱球菌其他侵襲性真菌感染的誘因1.內(nèi)源性誘因影響機體抵抗力的各種疾病，如白血病、癌癥、結(jié)核、肺膿腫、糖尿病、肝臟疾病以及維生素缺乏等2.外源性誘因廣譜抗生素，抗腫瘤藥物和免疫抑制劑；插管等侵襲性治療，骨髓和實體器官移植；免疫缺陷綜合癥國內(nèi)侵襲性真菌感染不容忽視

感染率(%)臨床藥物治療雜志2007年第5卷第1期美國四大醫(yī)療中心做的一項回顧性研究GareyKWetal.ClinInfectDis2006,43:25–31.死亡率(%)侵襲性真菌感染（IFI）現(xiàn)狀I(lǐng)FI發(fā)生率不斷增加IFI感染病死率很高IFI診斷困難及漏診情況嚴重IFI診斷困難及漏診情況嚴重1.尸檢研究發(fā)現(xiàn)，75%的侵襲性真菌感染病例在生前漏診.診斷困難的主要原因：臨床表現(xiàn)不典型，易被基礎(chǔ)疾病所掩蓋確診常需侵入性手段獲得組織標(biāo)本，侵入性操作常因患者的病情所限難以實施真菌檢測項目開展相對不足或滯后真菌感染診斷方法一.確診方法組織學(xué)檢查:肝組織檢查真菌學(xué)檢查:血液,肝穿刺液培養(yǎng)二.輔助診斷方法眼底檢查:眼內(nèi)炎癥影象檢查:腹部CT,MRI等血清學(xué)檢查:(1-3)-β-D葡聚糖(G試驗),半乳甘露聚糖(GM試驗)等遺傳學(xué)檢查:真菌DNA檢查（PCR）TheJapaneseJournalOfAntibiotics58-3June2005(1-3)-β-D-葡聚糖結(jié)構(gòu)葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細胞壁上的特有成分以1,3-β-糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈以分支狀1-6-β-D葡萄糖殘基作為側(cè)鏈(1-3)-β-D-葡聚糖特性對熱極為穩(wěn)定，高壓121℃并不能使其滅活。在念珠菌和曲霉菌細胞壁中含量較多，對G實驗靈敏。當(dāng)真菌進入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細胞的吞噬、消化等處理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液中含量增高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時，機體免疫系統(tǒng)可將其清除。在淺部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高?？捎糜跈z測念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、鐮刀菌、卡氏肺孢子菌不可檢測隱球菌、接合菌（根霉/毛霉等）G試驗原理(1-3)-β-D葡聚糖可特異性激活鱟變形細胞裂解物中的G因子，從而引起裂解物的凝固，故稱G試驗。（1-3）-D-GlucanG因子活化G因子凝固酶原 凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝膠）G試驗的國內(nèi)外一覽1日本－生化學(xué)設(shè)備：WellreaderSK603配套試劑:FungitecGtestMKG試驗的國內(nèi)外一覽2日本－Wako設(shè)備：トキシノメーターMT-5500

配套試劑：

-GlucantestWakoG試驗的國內(nèi)外發(fā)展進程１1995年日本生化學(xué)首先開發(fā)出檢測（１－３）-－DGlucan的Gluspecyreagent,之后取得日本厚生省批準(zhǔn)改為：FungitecGTest90年代末，日本生化學(xué)收購美國的ＡＣＣ公司，并以ＡＣＣ公司為主在美國于２００４年取得FDA認可的FungitellAssay．1996年，日本和光公司也開發(fā)出了檢測１－３）-－DGlucan的-GlucantestWako試劑盒，并取得日本厚生省批準(zhǔn)．G試驗的國內(nèi)研發(fā)過程研發(fā)人員：90年代中期前往日本國立衛(wèi)生試驗所研修學(xué)習(xí)，在日本藥局方細菌內(nèi)毒素檢查法起草人小川先生指導(dǎo)下，開展細菌內(nèi)毒素及真菌檢測方法研究，期間曾前往日本生化學(xué)東京研究所和日本wako大阪總部研修考察．在日本研修工作期間，學(xué)習(xí)到大量有關(guān)G試驗方面的知識．回國后，針對國內(nèi)臨床檢測需求，開展細菌內(nèi)毒素及真菌在血液中微量檢測方面研究，并取得多項成果．經(jīng)過大量實驗及臨床對比研究，終于在2002年研制成功．經(jīng)與國外同類試劑對比，相符率在100％．另外，由于生產(chǎn)用原料來源不同，檢測原理差異，其Cutoff值存在一定差異．在日本生化學(xué)東京研究所研修１在日本生化學(xué)東京研究所研修２在日本和光純藥大阪