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文檔簡介

第二章固液分離和細(xì)胞破碎第二章固液分離和細(xì)胞破碎1主要內(nèi)容2.1發(fā)酵液的預(yù)處理2.1.1發(fā)酵液的特性2.1.2發(fā)酵液預(yù)處理的目的2.1.3發(fā)酵液預(yù)處理方法2.2固液分離工程及設(shè)備2.3細(xì)胞破碎主要內(nèi)容2.1發(fā)酵液的預(yù)處理22.1發(fā)酵液的預(yù)處理2.1.1發(fā)酵液過濾特性培養(yǎng)液的組成:

水(高達(dá)90-99%

)+ 固體細(xì)胞及碎片20-30%(對(duì)微生物發(fā)酵)+ 少量的代謝成物+ 細(xì)胞破裂后的內(nèi)容物+ 殘存的培養(yǎng)基成分2.1發(fā)酵液的預(yù)處理2.1.1發(fā)酵液過濾特性培養(yǎng)液的組成3微生物發(fā)酵液的特性為:發(fā)酵產(chǎn)物濃度較低,大多為1-10%,懸浮液中大部分是水;懸浮物顆粒小,相對(duì)密度與液相相差不大;固體粒子可壓縮性大;液相粘度大,大多為非牛頓型流體;性質(zhì)不穩(wěn)定,隨時(shí)間變化,如易受空氣氧化、微生物污染、蛋白酶水解等作用的影響。微生物發(fā)酵液的特性為:42.1.2預(yù)處理的目的改變發(fā)酵液的物理性質(zhì),促進(jìn)從懸浮液中分離固形物的速度,提高固液分離器的效率;盡可能使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于后處理的某一相中(多數(shù)為液相);除去發(fā)酵液中的部分雜質(zhì),以利于后續(xù)各步操作。2.1.2預(yù)處理的目的改變發(fā)酵液的物理性質(zhì),促進(jìn)從懸浮液5發(fā)酵液中的雜質(zhì)高價(jià)無機(jī)離子(Ca2+、Mg2+、Fe3+)雜蛋白在采用離子交換和吸附法提取時(shí)會(huì)降低其交換容量和吸附能力;在有機(jī)溶劑法或雙水相萃取時(shí),易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象,使兩相分離不清。在常規(guī)過濾或膜過濾時(shí),易使過濾介質(zhì)堵塞或受污染,影響過濾效率。

在預(yù)處理時(shí),應(yīng)盡量除去這些物質(zhì)。發(fā)酵液的相對(duì)純化發(fā)酵液中的雜質(zhì)高價(jià)無機(jī)離子(Ca2+、Mg2+、Fe3+)在6(一)高價(jià)無機(jī)離子的去除方法Ca2+——草酸、草酸鈉,→形成草酸鈣沉淀(注意回收草酸)

;Mg2+——三聚磷酸鈉,→形成三聚磷酸鈉鎂可溶性絡(luò)合物;Fe3+——黃血鹽(亞鐵氰化鉀),→普魯士蘭沉淀(一)高價(jià)無機(jī)離子的去除方法Ca2+——草酸、草酸鈉,→7(二)雜蛋白的去除方法蛋白質(zhì)一般以膠體狀態(tài)存在于發(fā)酵液中。在酸性溶液中帶正電荷;在堿性溶液中帶負(fù)電荷。在某一pH下,凈電荷為零,溶解度最小,稱為等電點(diǎn)。1)沉淀法(二)雜蛋白的去除方法蛋白質(zhì)一般以膠體狀態(tài)存在于發(fā)酵液中。8酸堿調(diào)節(jié),使蛋白質(zhì)與鹽或離子形成沉淀。在酸性溶液中,蛋白質(zhì)與一些陰離子,如三氯乙酸鹽、水楊酸鹽、鎢酸鹽、苦味酸鹽、鞣酸鹽、過氯酸鹽等形成沉淀;在堿性溶液中,蛋白質(zhì)與一些陽離子,如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。酸堿調(diào)節(jié),使蛋白質(zhì)與鹽或離子形成沉淀。92)變性法

加熱,大幅度調(diào)節(jié)pH值,加酒精、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑等。不足之處加熱法只適合于對(duì)熱較穩(wěn)定的目的產(chǎn)物;極端pH值也會(huì)導(dǎo)致某些目的產(chǎn)物失活,且要消耗大量酸堿;有機(jī)溶劑法通常只適用于所處理的液體數(shù)量較少的場合。

2)變性法加熱,不足之處加熱法只適合于對(duì)熱較穩(wěn)定的目的產(chǎn)10加入某些吸附劑或沉淀劑吸附雜蛋白質(zhì)而除去。例如:在四環(huán)素類抗生素中,采用黃血鹽和硫酸鋅的協(xié)同作用生成亞鐵氰化鋅鉀的膠狀沉淀來吸附蛋白質(zhì);在枯草桿菌發(fā)酵液中,加入氯化鈣和磷酸氫二鈉,兩者生成龐大的凝膠,把蛋白質(zhì)、菌體及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中除去。

3)吸附法加入某些吸附劑或沉淀劑吸附雜蛋白質(zhì)而除去。3)吸附法112.1.3發(fā)酵液預(yù)處理的方法:

加熱法調(diào)整pH凝聚與絮凝使用惰性助濾劑加入反應(yīng)劑2.1.3發(fā)酵液預(yù)處理的方法:12(1)加熱法最簡單和價(jià)廉的預(yù)處理方法,即將懸浮液加熱到所需溫度并保溫適當(dāng)時(shí)間??捎行Ы档蛻腋∫旱酿ざ龋⒓铀倬奂饔靡匀コ承╇s蛋白;降低懸浮液的最終體積,(1)加熱法13(2)調(diào)整pHpH值直接影響發(fā)酵液中某些物質(zhì)的電離度和電荷性質(zhì),適當(dāng)調(diào)節(jié)pH值可改善其過濾特性。在膜過濾中,發(fā)酵液中的大分子物質(zhì)易與膜發(fā)生吸附,通過調(diào)整pH值改變易吸附分子的電荷性質(zhì),即可減少堵塞和污染;細(xì)胞、細(xì)胞碎片及某些膠體物質(zhì)等在某個(gè)pH值下也可能趨于絮凝而成為較大顆粒,有利于過濾的進(jìn)行。(2)調(diào)整pH14(3)凝聚與絮凝采用凝聚和絮凝技術(shù)能有效改變細(xì)胞、細(xì)胞碎片及溶解大分子物質(zhì)的分散狀態(tài),使其聚結(jié)成較大的顆粒,便于提高過濾速率。另外,還能有效地除去雜蛋白和固體雜質(zhì),提高濾液質(zhì)量。凝聚——指在投加的化學(xué)物質(zhì)(如鋁、鐵的鹽類或石灰等)作用下,膠體脫穩(wěn)并使粒子相互聚集成1mm大小塊狀凝聚體的過程。絮凝——指在某些高分子絮凝劑存在下,基于橋架作用,使膠體顆粒交聯(lián)成網(wǎng),形成10mm大小絮凝團(tuán)的過程。(3)凝聚與絮凝15①凝聚

發(fā)酵液中的細(xì)胞、菌體或蛋白質(zhì)等膠體粒子雙電層的結(jié)構(gòu)使膠粒之間不易聚集而保持穩(wěn)定的分散狀態(tài)。陽離子對(duì)帶負(fù)電荷的膠粒凝聚能力的次序?yàn)椋?/p>

Al3+>Fe3+>H+>Ca2+>Mg2+>K+>Na+>Li+常用的凝聚劑電解質(zhì)有:

硫酸鋁Al2(SO4)3?18H2O(明礬)氯化鋁AlCl3?6H2O三氯化鐵FeCl3硫酸亞鐵FeSO4·7H2O石灰;ZnSO4;MgCO3①凝聚16②絮凝絮凝劑是一種能溶于水的高分子聚合物,其相對(duì)分子質(zhì)量可高達(dá)數(shù)萬至一千萬以上,長鏈狀結(jié)構(gòu),其鏈節(jié)上含有許多活性官能團(tuán),包括帶電荷的陰離子(如-COOH)或陽離子(如-NH2)基團(tuán)以及不帶電荷的非離子型基團(tuán)。它們通過靜電引力、范德華引力或氫鍵的作用,強(qiáng)烈地吸附在膠粒的表面。當(dāng)一個(gè)高分子聚合物的許多鏈節(jié)分別吸附在不同的膠粒表面上,產(chǎn)生橋架聯(lián)結(jié)時(shí),就形成了較大的絮團(tuán),這就是絮凝作用。②絮凝171)有機(jī)高分子聚合物,如聚丙烯酰胺類衍生物、聚苯乙烯類衍生物;2)無機(jī)高分子聚合物,如聚合鋁鹽、聚合鐵鹽等;3)天然有機(jī)高分子絮凝劑,如聚糖類膠粘物、海藻酸鈉、明膠、骨膠、殼多糖、脫乙酰殼多糖等。目前最常見的高分子聚合物絮凝劑:有機(jī)合成的聚丙烯酰胺(polyacrylamide)類衍生物根據(jù)活性基團(tuán)在水中解離情況不同,可分為三類:非離子型、陰離子型(含有羧基)陽離子型(含有胺基)工業(yè)上使用的絮凝劑可分為三類:1)有機(jī)高分子聚合物,如聚丙烯酰胺類衍生物、聚苯乙烯類衍生物18聚丙烯酰胺類絮凝劑的優(yōu)點(diǎn)用量少,一般以mg/L計(jì)量;絮凝體粗大,分離效果好;絮凝速度快;種類多,適用范圍廣。聚丙烯酰胺類絮凝劑的缺點(diǎn)存在一定的毒性,特別是陽離子型聚丙烯酰胺,用于食品和醫(yī)藥工業(yè)時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎。聚丙烯酰胺類絮凝劑的優(yōu)點(diǎn)用量少,一般以mg/L計(jì)量;聚丙烯酰19對(duì)于帶負(fù)電荷的菌體或蛋白質(zhì)來說,采用陽離子型高分子絮凝劑同時(shí)具有降低膠粒雙電層電位和產(chǎn)生吸附橋架的雙重機(jī)理;對(duì)于非離子型和陰離子型高分子絮凝劑,要采用凝聚和絮凝雙重機(jī)理才能提高過濾效果,這種包括凝聚和絮凝機(jī)理的過程,稱為混凝。③混凝對(duì)于帶負(fù)電荷的菌體或蛋白質(zhì)來說,采用陽離子型高分子絮凝劑同時(shí)20(4)加入助濾劑一種不可壓縮的多孔微粒,它能使濾餅疏松,濾速增大。懸浮液中大量的細(xì)微膠體粒子被吸附到助濾劑的表面上,改變了濾餅結(jié)構(gòu),降低了過濾阻力。常用的助濾劑有:硅藻土、纖維素、石棉粉、白土、炭粒、淀粉等,最常用的是硅藻土。使用硅藻土?xí)r,通常細(xì)粒用量為500g/m3;中等粒度用量為700g/m3;粗粒用量為700-1000g/m3。(4)加入助濾劑21(5)加入反應(yīng)劑加入反應(yīng)劑和某些可溶性鹽類發(fā)生反應(yīng)生成不溶性沉淀,如CaSO4,AlPO4等。生成的沉淀能防止菌絲體粘結(jié),使菌絲具有塊狀結(jié)構(gòu),沉淀本身可作為助濾劑,且能使膠狀物和懸浮物凝固,改善過濾性能。若發(fā)酵液中含有不溶性多糖物質(zhì),用酶將其轉(zhuǎn)化為單糖,以提高過濾速率;如萬古霉素用淀粉作培養(yǎng)基,發(fā)酵液過濾前加入0.025%的淀粉酶,攪拌30min后,再加2.5%硅藻土助濾劑,可提高過濾效率5倍。

(5)加入反應(yīng)劑222.2固液分離工程及設(shè)備2.2固液分離工程及設(shè)備23重力沉降浮選旋液分離介質(zhì)過濾離心通氣,產(chǎn)生氣泡,使固體附著在氣泡表面除去。用于固液比重差小、直徑5~30μm顆粒的分離,污水處理懸浮液以較高速度沿切線方向進(jìn)入旋風(fēng)分離器,輕相由分離器中央排出,重相由分離器下部排出,但不適合直徑<5μm顆粒去除(可用絲網(wǎng)分離器)。工業(yè)上常用霉菌和放線菌為絲狀菌,體形較大,發(fā)酵液采用過濾方法;細(xì)菌和酵母菌為單細(xì)胞,體形較小,其發(fā)酵液采用高速離心分離,如對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理,也可用過濾進(jìn)行固液分離。2.2.1固液分離的方法重力沉降通氣,產(chǎn)生氣泡,使固體附著在氣泡表面除去。懸浮液以較24微生物發(fā)酵液中含有大量菌體、細(xì)胞或細(xì)胞碎片以及殘余的固體培養(yǎng)基成分。過濾就是將懸浮在發(fā)酵液中的固體顆粒與液體進(jìn)行分離的過程。在過濾操作中,要求濾速快、濾液澄清,并且有高的收率。D.過濾微生物發(fā)酵液中含有大量菌體、細(xì)胞或細(xì)胞碎片以251)過濾分類澄清過濾:過濾介質(zhì)為硅藻土、砂、顆?;钚蕴?、玻璃珠、塑料顆粒等,當(dāng)懸浮液通過濾層時(shí),固體顆粒被阻攔或吸附在濾層的顆粒上,使濾液得以澄清,適合于固體含量少于0.1g/100ml、顆粒直徑在5-100um的懸浮液的過濾分離,如河水、麥芽汁、酒類和飲料等的澄清。1)過濾分類澄清過濾:26濾餅過濾:過濾介質(zhì)為濾布,包括天然或合成纖維織布、金屬織布、玻璃纖維紙、合成纖維等無紡布。當(dāng)懸浮液通過濾布時(shí),固體顆粒被濾布阻攔而逐漸形成濾餅(濾渣)。當(dāng)濾餅至一定厚度時(shí)即起過濾作用,此時(shí)即可獲得澄清的濾液,這種方法叫做濾餅過濾,在濾餅過濾中,懸浮液本身形成的濾餅起著主要的過濾作用,適合于固體含量大于0.1g/100ml的懸浮液的過濾分離。濾餅過濾:27E.離心分離在液相非均一系統(tǒng)中,利用離心力達(dá)到液-液、液-固、液-液-固分離的方法,統(tǒng)稱為離心分離。優(yōu)點(diǎn):分離速度快,分離效率高、液相澄清度好;缺點(diǎn):設(shè)備投資高、能耗大。離心機(jī)種類:碟片式離心機(jī)、管式離心機(jī)、傾析式離心機(jī)。E.離心分離在液相非均一系統(tǒng)中,利用離心力達(dá)到液-液、液-28離心分離因數(shù)f=Gu2gRGgR(2πRn)260GRn2900===GDn21800重量kg旋轉(zhuǎn)直徑轉(zhuǎn)速r/min離心分離因數(shù):又稱為離心力強(qiáng)度,表示在離心機(jī)中產(chǎn)生的離心加速度與自由下降的加速度之比。離心分離因數(shù)f=Gu2G(2πRn)2GRn2===GDn2291)切向流過濾,又稱錯(cuò)流過濾

交叉過濾和十字流過濾,是一種維持恒壓下高速過濾的技術(shù)。其操作特點(diǎn)是使懸浮液在過濾介質(zhì)表面作切向流動(dòng),利用流動(dòng)的剪切作用將過濾介質(zhì)表面的固體(濾餅)移走。2)雙水相萃取

向水相中加入溶于水的某些高分子化合物(如葡聚糖、聚乙二醇等)后,形成密度不同的兩相,輕相中富含某種高分子化合物,重相中富含鹽類或另一種高分子化合物,從而達(dá)到分離和提純某種高分子化合物的目的。3)吸附法

向細(xì)胞碎片懸浮液中加入某種固體吸附劑,或者用細(xì)胞碎片懸浮液通過裝有吸附劑的固定床,即可達(dá)到除去細(xì)胞碎片的目的。主要的問題是很難選擇合適的吸附劑,以保證目的產(chǎn)物不被吸附而損失。其他固液分離方法1)切向流過濾,又稱錯(cuò)流過濾其他固液分離方法302.2.2常用過濾設(shè)備(1)板框壓濾機(jī)廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)基制備的過濾及霉菌、放線菌、酵母菌和細(xì)菌等多種發(fā)酵液的固液分離。適合于固體含量1-10%的懸浮液的分離。優(yōu)點(diǎn):過濾面積大,結(jié)構(gòu)簡單,價(jià)格低,動(dòng)力消耗少,對(duì)不同過濾特性的發(fā)酵液適應(yīng)性強(qiáng)。缺點(diǎn):不能連續(xù)操作,設(shè)備笨重,勞動(dòng)強(qiáng)度大,衛(wèi)生條件差,非過濾的輔助時(shí)間較長。2.2.2常用過濾設(shè)備(1)板框壓濾機(jī)廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)基制31單元組成板布板布板操作注意點(diǎn)盡量使工作時(shí)間和輔助時(shí)間接近;降低濾液粘度單元組成板操作注意點(diǎn)盡量使工作時(shí)間和輔助時(shí)間接近;32濾漿洗水濾板濾框洗板濾布濾漿洗水濾板濾框洗板濾布33第二章-固液分離和細(xì)胞破碎ppt課件342023/7/31轉(zhuǎn)筒真空過濾機(jī)結(jié)構(gòu)示意圖動(dòng)盤定盤轉(zhuǎn)筒金屬網(wǎng)濾布濾餅攪拌器洗滌噴頭料漿槽刮刀轉(zhuǎn)筒,扇形格(18格)

濾室;分配頭;動(dòng)盤定盤金屬網(wǎng);濾布;濾漿槽。(2)真空轉(zhuǎn)鼓過濾機(jī)2023/7/31轉(zhuǎn)筒真空過濾機(jī)結(jié)構(gòu)示意圖動(dòng)盤定盤轉(zhuǎn)筒金屬網(wǎng)35第二章-固液分離和細(xì)胞破碎ppt課件36離心機(jī)工業(yè)用離心機(jī)按結(jié)構(gòu)和分離要求,可分為過濾離心機(jī)、沉降離心機(jī)和分離機(jī)三類。離心機(jī)工業(yè)用離心機(jī)按結(jié)構(gòu)和分離要求,可分為過濾離心機(jī)、沉降離37第二章-固液分離和細(xì)胞破碎ppt課件38第二章-固液分離和細(xì)胞破碎ppt課件392.3細(xì)胞破碎方法破碎率:被破碎細(xì)胞的數(shù)量占原始細(xì)胞數(shù)量的百分?jǐn)?shù)。N0:原細(xì)胞數(shù),N:破碎后殘存的正常細(xì)胞。N0和N的可通過直接計(jì)數(shù)和間接計(jì)數(shù)法得到。2.3細(xì)胞破碎方法破碎率:被破碎細(xì)胞的數(shù)量占原始細(xì)胞數(shù)量的402.3.1 細(xì)胞破碎理論

1)、細(xì)胞破碎A壓撞B剪切Ca滲透Cb凍脹D破壁破膜2.3.1 細(xì)胞破碎理論1)、細(xì)胞破碎41超聲波法高壓勻漿機(jī)組織搗碎機(jī)細(xì)菌磨珠磨法反復(fù)凍融法滲透壓沖擊法冷熱變替法有機(jī)溶媒法自溶法酶法機(jī)械破碎法物理破碎法化學(xué)破碎法細(xì)胞破碎法2.3.2 細(xì)胞破碎方法

超聲波法反復(fù)凍融法有機(jī)溶媒法機(jī)械破碎法物理破碎法化學(xué)破碎法細(xì)42

超聲波破碎超聲波破碎原理:超聲波作用下液體發(fā)生空穴化作用,產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力,使細(xì)胞破碎。超聲空化:存在于液體中的微小氣泡(空化核)在超聲場的作用下振動(dòng)、生長并不斷聚集聲場能量,當(dāng)能量達(dá)到某個(gè)閾值時(shí),空化氣泡急劇崩潰閉合的過程。超聲波破碎超聲波破碎原理:超聲波作用下液體發(fā)生空穴化作用,產(chǎn)43第二章-固液分離和細(xì)胞破碎ppt課件44優(yōu)點(diǎn):適合于多種細(xì)胞的破碎缺點(diǎn):A、影響因素多,如振幅、黏度、表面張力、液體體積和流速、探頭材料和形狀;B、超聲產(chǎn)生超氧離子毒害作用;C、有效能量的利用率低;D、產(chǎn)熱大,需控溫;E、不易放大,僅應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的細(xì)胞破碎。優(yōu)點(diǎn):適合于多種細(xì)胞的破碎45第二章-固液分離和細(xì)胞破碎ppt課件46

高壓勻漿破碎原理:主要利用細(xì)胞懸液在高壓作用下液相剪切力以及細(xì)胞與固定表面的撞擊力而使之破碎。特點(diǎn):適用于酵母和大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞的破碎,不宜用于團(tuán)狀或絲狀菌的破碎;由于操作中溫度會(huì)升高,需對(duì)料液作冷卻處理,保護(hù)目的產(chǎn)物活性。適合于工業(yè)上的大規(guī)模應(yīng)用高壓勻漿破碎高壓勻漿破碎原理:主要利用細(xì)胞懸液在高壓作用下液相剪切47

珠磨法破碎原理:利用在高速攪拌作用下,細(xì)胞和微球相互磨擦碰撞而破碎。珠磨機(jī)可用于酵母和細(xì)菌,但對(duì)真菌菌絲和藻類更合適.特點(diǎn):適用范圍較廣;但有效能量利用率很低,設(shè)計(jì)操作時(shí)應(yīng)充分考慮冷卻系統(tǒng)的熱交換能力;影響破碎率的操作參數(shù)較多,過程優(yōu)化設(shè)計(jì)較復(fù)雜。珠磨法破碎珠磨法破碎原理:利用在高速攪拌作用下,細(xì)胞和微球相互磨擦48操作:細(xì)胞噴霧高速凍結(jié) 300m/s氮?dú)饬?/p>

優(yōu)點(diǎn):A、細(xì)胞破碎僅發(fā)生在撞擊的一瞬間,破碎程度均勻,避免反復(fù)和過度破碎;B、破碎的程度可無級(jí)調(diào)節(jié),避免細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的破壞,特別適合于細(xì)胞器的回收;C、實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)規(guī)模均可應(yīng)用,細(xì)胞濃度在10-20%,實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的間歇處理能力在50-500mL/h,工業(yè)規(guī)模的連續(xù)處理在10,000mL/h以上。撞擊法破碎操作:細(xì)胞噴霧高速凍結(jié)撞擊法破碎49反復(fù)凍融法于將細(xì)胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。冷熱變替法將材料投入沸水中,于90℃左右維持?jǐn)?shù)分鐘,立即置于冰浴中使之迅速冷卻,絕大部分細(xì)胞被破壞。滲透壓沖擊法細(xì)胞在高滲透壓介質(zhì)中平衡后,再突然將其轉(zhuǎn)至低滲透壓環(huán)境中,水會(huì)大量進(jìn)入細(xì)胞,使細(xì)胞壁和膜脹破。(2)物理破碎法反復(fù)凍融法(2)物理破碎法50又稱化學(xué)滲透:其原理是利用化學(xué)或生化試劑(酶)改變細(xì)胞壁或細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),增大胞內(nèi)物質(zhì)的溶出速率;或者完全溶解細(xì)胞壁,形成原生質(zhì)體后,在滲透壓作用下使細(xì)胞膜破裂而釋放胞內(nèi)物質(zhì)。優(yōu)點(diǎn):A、產(chǎn)品釋放的選擇性;B、提取速度和收效高;C、產(chǎn)品的破壞小;D、對(duì)外界環(huán)境,如pH和溫度等要求低;E、不殘留細(xì)胞碎片。(3)化學(xué)破碎法又稱化學(xué)滲透:其原理是利用化學(xué)或生化試劑(酶)改變細(xì)胞壁或細(xì)51粉碎后的新鮮材料在0℃以下加入5~10倍量的丙酮,迅速攪拌均勻,可破碎細(xì)胞膜,破壞蛋白質(zhì)與脂質(zhì)的結(jié)合。蛋白質(zhì)一般不變性,被脫脂和脫水成為干燥粉末。用少量乙醚洗,經(jīng)濾紙干燥,如脫氫酶等可保存數(shù)月不失去活性。有機(jī)溶媒法粉碎后的新鮮材料在0℃以下加入5~10倍量的丙酮,迅速攪拌52將待破碎的鮮材料在一定pH和適當(dāng)?shù)臏囟认拢米陨淼牡鞍酌笇⒓?xì)胞破壞,使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。自體融解時(shí)需要時(shí)間,需加少量甲苯、氯仿等。應(yīng)防止細(xì)菌污染。自體融解過程中pH顯著變化,隨時(shí)要調(diào)節(jié)pH。自溶溫度選在0~4℃,因自溶時(shí)間較長,不易控制,所以制備活性蛋白質(zhì)時(shí)較少用。自溶法將待破碎的鮮材料在一定pH和適當(dāng)?shù)臏囟认?,利用自身的蛋白酶?3能溶解菌的酶分布很廣。尤其卵白中含量高,而多易結(jié)晶化。1g菌體加1~10mg溶菌酶,pH6.2~7.01h內(nèi)完全溶菌。除溶菌酶外,蝸牛酶及纖維素酶也常被選為破壞細(xì)菌及植物細(xì)胞用。酶法能溶解菌的酶分布很廣。尤其卵白中含量高,而多易結(jié)晶化。1g54一、細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)

細(xì)菌類結(jié)構(gòu)—多層三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)溶菌酶對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌的破碎效果最好一、細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)—多層三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)溶菌酶對(duì)革蘭氏552

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