拉莫三嗪血藥濃度測定及其藥動學研究

拉莫三嗪血藥濃度測定及其藥動學研究

拉莫三嗪（ltg）是苯三嗪類的新一代廣泛譜抗癲癇藥物。LTG達到有效血藥濃度所需的劑量存在很大的個體差異,體內(nèi)藥代動力學容易受到合并使用的藥物影響,在臨床應用中有必要對LTG進行濃度監(jiān)測。國內(nèi)外均有LTG血藥濃度測定的相關報道,但實驗方法普遍較繁瑣,實驗靈敏度不高。因此,有必要建立一種簡單、快速、高效、靈敏的高效液相色譜法(HPLC)測定人血漿中LTG的藥物濃度,用于臨床LTG血藥濃度監(jiān)測以及人體藥代動力學研究,為LTG的合理用藥提供依據(jù)。1材料和方法1.1ds-c的測定惠普1100系列高效液相色譜分析儀(美國惠普公司);色譜柱ODS-C(5μm,4.6mm×250mm);XW-80A漩渦混合器,TGL-16G離心機(上海安亭科學儀器廠制造);As3120C型超聲波清洗器(上海醫(yī)科大學儀器廠制造)。1.2試劑與儀器LTG對照品、卡馬西平標準品(中國藥品生物制品,批號100775-200401);乙腈、甲醇、異丙醇均為色譜純(天津市四友精細化學品有限公司);二氯甲烷為分析純(上?；瘜W試劑總廠);磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀均為分析純(廣東省汕頭市金砂化工廠);水為蒸餾水(溫州醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院)。1.3柱溫度和流動相檢測波長220nm;檢測靈敏度:0.0001AUFS;柱溫:37℃;進樣量20μl;流動相為乙腈:磷酸鹽緩沖液(30∶70,pH4.6);流速:1ml/min。1.4給藥ltg血漿濃度測定方法1.4.1標準溶液的制備精密稱取LTG對照品10mg,置于10ml量瓶中,用甲醇溶解并定容,得1g/L的LTG儲備液。將儲備液放于冰箱保存。1.4.2適量甲醇溶液精密稱取卡馬西平內(nèi)標物0.5mg,置于10ml量瓶中,加入適量甲醇,37℃恒溫振蕩使片劑完全溶解后定容,過濾。得50mg/L的內(nèi)標溶液,放于冰箱(5℃)保存。1.4.3色譜試驗取100μl空白血清,加50mg/L的內(nèi)標卡馬西平(CBZ)50μl,渦旋混勻后加入100μl磷酸鹽緩沖液(pH4.5)及1ml二氯甲烷:異丙醇(95∶5)混合液,渦旋混合30s,超聲振蕩10min,離心4000r/min×10min,吸取下層有機相,常溫下吹干后加入200μl甲醇復溶,取20μl進樣分析,記錄色譜圖。1.4.4標準曲線繪制配成濃度相當于1.0、2.5、5.0、10.0、20.0mg/L的拉莫三嗪血漿標準品溶液,按“1.4.3”項處理方法處理后檢測,測定拉莫三嗪峰面積(As)、內(nèi)標峰面積(Ai),以As/Ai為縱坐標(Y),以所對應各點濃度為橫坐標(X)繪制標準曲線。2結(jié)果2.1色譜圖經(jīng)實驗確定的色譜條件下各被測藥物及內(nèi)標的色譜峰分離良好(分離度>1.5),無內(nèi)源性物質(zhì)無干擾。2.2x-0.33犯罪認定拉莫三嗪的標準曲線回歸方程為Y=0.0635X-0.0307(r=0.9993)。定量下限為0.50mg/L(n=6,RSD=6.52%)。2.3返回率和準確度低、中、高3種質(zhì)量濃度的平均方法回收率:見表1,2。2.4樣品穩(wěn)定性2.4.1拉莫三嗪血漿標準溶液配制低、中、高3種濃度(1.00,5.00,20.0mg/L)的拉莫三嗪血漿標準溶液,每個濃度3份;經(jīng)歷3次冰凍-解凍循環(huán)后,各取0.50ml檢測。3種濃度的RSD分別為6.49%、5.28%、2.86%,結(jié)果顯示凍融條件對血漿樣品的檢測結(jié)果沒有明顯的影響。2.4.2拉莫三嗪血漿標準品溶液配制低、中、高3種濃度(1.00,5.00,20.0mg/L)的拉莫三嗪血漿標準品溶液,每個濃度3份,在-65℃冰箱冰凍保存4周后,各取0.50ml檢測。3種濃度的RSD分別為7.03%、3.48%、1.54%,說明血漿樣品在冰凍保存的條件下有很好的穩(wěn)定性。3治療藥物監(jiān)測方法專屬性各檢測物與內(nèi)標的色譜峰分離良好(分離度R>1.5),達到基線分離,峰形尖銳,無拖尾、肩峰現(xiàn)象,樣品中內(nèi)源性物質(zhì)無干擾。本實驗確定的定量線性范圍與體內(nèi)藥物濃度值的參考范圍(拉莫三嗪3～15mg/L)及文獻[1,2]報道所得線性范圍涵蓋了上述藥物的治療窗,此法基本可滿足這個藥物治療監(jiān)測的需要。本試驗流動相中加入三乙胺可以使峰分離度更好。CBZ、CBZ、苯巴比妥(PB)、苯妥英鈉(PHT)均為目前公認的需要進行治療藥物監(jiān)測(TDM)的藥物,而作為新抗癲癇藥的LTG,多數(shù)學者也認為應該進行治療藥物監(jiān)測。近些年來國內(nèi)外建立了許多同時監(jiān)測血清中多種抗癲癇藥及相關活性代謝產(chǎn)物的方法。國內(nèi)的絕大多數(shù)方法多是同時監(jiān)測幾種傳統(tǒng)抗癲癇藥,或是僅監(jiān)測某一抗癲癇藥及其活性代謝產(chǎn)物血藥濃度的高效液相法,對于新抗癲癇藥血藥濃度的監(jiān)測方法則較少見。國外建立了許多監(jiān)測新抗癲癇藥的方法,除高效液相法外還有氣相色譜法、毛細管電泳法。后兩種方法雖可監(jiān)測多種藥物及其代謝產(chǎn)物但它們多使用質(zhì)譜檢測器、熱電子檢測器或二極管陣列檢測器癲癇為慢性發(fā)作性疾病,其治療需長期預防用藥。大多數(shù)抗癲癇藥物的治療窗窄、個體間及個體內(nèi)的藥代動力學特征差異大。另外,雖然臨床上治療癲癇多主張單一用藥,但有相當一部分患者屬難治性癲癇,需要聯(lián)合用藥,或是傳統(tǒng)抗癲癇藥的聯(lián)合應用,如PB、PHT、丙戊酸(VPA)間的聯(lián)合應用,或是傳統(tǒng)抗癲癇藥與新抗癲癇藥的聯(lián)合應用,如拉莫三嗪與CBZ、VPA等聯(lián)用。這就不可避免的導致了藥物間的相互作用,尤其是傳統(tǒng)的抗癲癇藥多為肝藥酶誘導劑或抑制劑,對與其聯(lián)用的藥物均有影響?？梢姸嗨幝?lián)用藥物間的相互作用使得抗癲癇藥的藥代動力學行為更為復雜。綜合以上分析,為了最大限度地提高藥物療效,降低藥物不良反應,以達到合理的個體化用藥,需要對多數(shù)抗癲癇藥進行血藥濃度監(jiān)測。為此,本研究建立了用HPLC法測定血清中LTG濃度的方法,此法為進行治療藥物監(jiān)測開展臨床合理用藥提供依據(jù),并為抗癲癇藥的藥代動力學有關研究提供相關資料。1.4.5左、左、內(nèi)標峰面積（y)分析分別于100μl空白