深部真菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

深部真菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1．目的規(guī)范深部真菌藥物敏感試驗(yàn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于念珠菌屬和新型隱球菌。3．選藥原則根據(jù)CLSIM27-A2的建議選擇以下受試藥物，5-氟胞嘧啶（5-FC）、兩性霉素B（AMB）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）。4．質(zhì)控見表5-55.表5-55深部真菌藥敏試驗(yàn)質(zhì)控結(jié)果QC1:近平滑念珠菌ATCC22019QC2:克柔念珠菌ATCC62585-FCSAMBMIC≤0.5mg/LFCAMIC=1~4mg/LITRMIC≤0.125~0.25mg/LVRCMIC≤0.06~0.125mg/L5-FCI/RAMBMIC≤0.5~2mg/LFCAMIC=8~32mg/LITRMIC≤0.125~0.5mg/LVRCMIC=0.125~0.5mg/L5．試驗(yàn)材料和儀器ATBFUNGUS3，無菌生理鹽水，ATB電子移液器。ATBF2培養(yǎng)基。6．操作步驟6.1打開一個(gè)0.85%氯化鈉培養(yǎng)基安？（或API培養(yǎng)懸液），采集不超過4日的菌落，制備成濁度相當(dāng)于2McFarland的懸浮液。用Farland試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)濁度管比較，或使用ATB比濁儀DENSIMAT，此菌懸液必須在準(zhǔn)備后立即使用。6.2使用一移液管轉(zhuǎn)移20μl此懸浮液到一ATBF2培養(yǎng)基的安？中。6.3用ATB電子移液管混勻ATBF2培養(yǎng)基，避免產(chǎn)生氣泡，使用ATB電子移液管在每個(gè)杯狀凹中加入135μl的ATBF2培養(yǎng)基，蓋好試條蓋子。6.4把試條放入一個(gè)密封容器或是一個(gè)裝有吸潮紙是的GENbox型廣口容器里，在有氧條件下35℃（+2℃）的環(huán)境中，念珠菌屬要培養(yǎng)24小時(shí)（+2小時(shí)），新型隱球菌要培養(yǎng)48小時(shí)（+6小時(shí)）。6.5通過ATB儀器自動(dòng)判讀結(jié)果。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見表5-56，5-57.表5-56念珠菌分界點(diǎn)（單位：mg/L）藥物SIR5-FC≤418~20≥32AMBNDNDNDFCA≤816~32≥64ITR≤0.1250.25~0.5≥1VRC≤12≥4表5-57新型隱球的菌分界點(diǎn)（單位：mg/L）藥物SIR5-FC≤48~16≥32AMBNDNDNDFCA≤48≥16ITRNDNDNDVRCNDNDND8．注意事項(xiàng)8.1在自動(dòng)讀取數(shù)據(jù)前，應(yīng)擦拭試條的中間部分，去除可能存在的小滴液體，以便儀器辨認(rèn)試條代碼。8.2一個(gè)或兩個(gè)生長(zhǎng)對(duì)照杯狀凹中的生長(zhǎng)缺失時(shí)，測(cè)試無效，必須重復(fù)進(jìn)行。8.3在培養(yǎng)后，帶有脫水的杯狀凹的試條可能給予錯(cuò)誤結(jié)果，必須重復(fù)測(cè)試。8.4對(duì)于兩性霉素B(AMB)，在自動(dòng)判讀時(shí)，建議肉眼檢查在杯狀凹外圍是否有個(gè)別菌落或生長(zhǎng)。8.5不同的操作環(huán)節(jié)之間間隔時(shí)間過長(zhǎng)（從接種液的配制到試條的培養(yǎng)）可能會(huì)影響結(jié)果。8.6只能使用純培養(yǎng)物，混合的或是污染的培養(yǎng)物可能會(huì)影響結(jié)果。8.7由于希木龍念珠菌（Candidahaemulonii）的生長(zhǎng)不穩(wěn)定干擾MIC的判斷，故不能使用ATBFUNGUS3條對(duì)其做檢測(cè)。8.8在檢測(cè)白念珠菌，都伯林念珠菌和熱帶念珠菌時(shí)，氟康唑，伊曲康唑和伏立康唑可出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，導(dǎo)致MIC偏高，尤其在使用儀器判斷結(jié)果的時(shí)候。針對(duì)這三個(gè)藥建議肉眼判讀其MIC值，特別是當(dāng)伏立康唑結(jié)果耐藥時(shí)（因?yàn)閷?duì)伏立康唑耐藥的非常少見）。9．結(jié)果解釋9.1由于克柔念珠菌對(duì)氟康唑天然耐藥，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)被系統(tǒng)地解釋為耐藥（R）。9.2對(duì)于兩性霉素B，MIC≥2mg/L，建議判斷為耐藥，（新型隱球菌通常的MIC為0.5和1mg/L。）9.3針對(duì)光滑念珠菌的檢測(cè)，建議將其對(duì)氟康唑和（或）伊曲康唑敏感的結(jié)果改為中介（I），因?yàn)樵摼鷮?duì)這兩個(gè)藥存在固有的敏感性低的現(xiàn)象。參考文獻(xiàn)[1]ReferenceMethodforBorthDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofYeasts.NCCLSM27-A2,2002[2]