微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室諾卡菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室諾卡菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1概述諾卡菌屬是一群需氧的、能形成氣中菌絲、有孢子的革蘭陽性菌。包括9個(gè)種，其中星形諾卡菌、巴西諾卡菌、皮諾卡菌、豚鼠耳炎諾卡菌、南非諾卡菌、新星諾卡菌等6個(gè)種與人類疾病有關(guān)。2.標(biāo)本類型痰液、腦脊液、穿刺液、膿液、血液等標(biāo)本。3鑒定3.1態(tài)與染色：革蘭陽性，菌體為絲狀，稱為菌絲或菌絲體。培養(yǎng)早期，菌體裂解為較多的球菌或桿菌狀，分枝狀菌絲較小；培養(yǎng)后期，可見豐富菌絲體形成。在膿液、痰和腦脊液等臨床標(biāo)本中，為纖細(xì)的分枝狀菌絲。抗酸染色弱陽性。3.2培養(yǎng)特性：注意尋找標(biāo)本中的顆粒接種培養(yǎng)，在不含抗生素的沙氏培養(yǎng)基（SDA）或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，22℃或35℃均可緩慢生長，需5~7天可見菌落。菌落表面有皺褶，呈顆粒狀、黃色或深橙色，表面無白色菌絲。在血瓊脂平板上菌落較小、凸起，呈白色，時(shí)間延長可出現(xiàn)橙色。3.3生化反應(yīng)：分解葡萄糖，不分解甘露醇、肌醇、酪蛋白、酪氨酸和黃嘌呤，不水解淀粉，不液化明膠。3.4鑒別要點(diǎn)：3.4.1本菌特征：革蘭陽性，菌體為絲狀，抗酸染色弱陽性；生長緩慢，菌落較??；分解葡萄糖，不分解酪蛋白、酪氨酸和黃嘌呤。3.4.2與分枝桿菌的鑒別：星形諾卡菌革蘭染色性強(qiáng)，抗酸染色性弱，鹽酸乙醇易脫色，菌體呈絲狀；分枝桿菌抗酸性強(qiáng)，不易脫色，革蘭染色弱。3.4.3與紅球菌屬的鑒別：星形諾卡菌對青霉素耐藥，紅球菌則敏感。3.4.4與棒狀桿菌的鑒別：星形諾卡菌菌體呈絲狀，而棒狀桿菌屬菌體一端或兩端膨大呈棒狀。3.4.5與分枝桿菌屬和放線菌屬的鑒別三者鏡下形態(tài)相似，但星性諾卡菌抗酸染色弱陽性，分枝桿菌屬強(qiáng)陽性，放線菌屬為陰性。3.5操作步驟3.5.1觀察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色鏡檢。3.5.2觸酶試驗(yàn)參見觸酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程3.5.3鑒定從SDA平板上挑取純菌落，用儀器法或傳統(tǒng)生化法進(jìn)行細(xì)菌鑒定。4.藥敏參見藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程及CLSIM100-S20最新版本文件。5.質(zhì)量控制參見質(zhì)量管理程序。檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析6.1新鮮的諾卡菌培養(yǎng)物經(jīng)革蘭氏染色為陽性的桿菌，特別是菌齡較短，尚無菌絲體出現(xiàn)時(shí)，啟形態(tài)類似細(xì)菌，鑒定中應(yīng)注意。6.2培養(yǎng)早期，菌體裂解為較多的球菌或桿菌狀，分枝狀菌絲較少；培養(yǎng)后期，可見豐富菌絲體形成。6.3有些病人痰培養(yǎng)諾卡菌陽性，但沒有諾卡菌感染的癥狀，星形諾卡菌可能是呼吸道的正常菌群，有些患者有空洞性結(jié)核、癌、囊性纖維化、哮喘或其他潛在疾病的病人，其呼吸道可能有諾卡菌的寄生。7.臨床意義星形諾卡菌可引起原發(fā)性化膿性肺部感染，可出現(xiàn)類似結(jié)核的癥狀。肺部病灶可向其他組織器官擴(kuò)散，形成皮下膿腫、多發(fā)性瘺管、腦膿腫、腹膜炎等。巴西諾卡菌可引起足放線菌病，表現(xiàn)為足部或腿部皮下腫脹、膿腫及多發(fā)笥瘺管等。8鑒定流程G+球桿菌G+球桿菌血瓊脂平板菌落呈黃色或深橙色菌絲（培養(yǎng)后期）其他細(xì)菌弱陽性抗酸染色陰性諾卡菌屬、鏈霉菌等參考文獻(xiàn)[1]中國合格評定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL23:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域