新型人工神經(jīng)導(dǎo)管講解課件

新型人工神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的臨床應(yīng)用王華松張偉才黃繼鋒蔡賢華付強黃一拯吳剛廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院骨科解放軍骨創(chuàng)傷救治中心廣州軍區(qū)骨科研究所湖北省骨創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)研究中心新型人工神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的臨床應(yīng)用王華松張偉才黃繼解剖特點骨折分型康復(fù)鍛煉手術(shù)入路內(nèi)固定方式選擇臨床應(yīng)用解剖特點背景骨折分型動物實驗典型病例研究計劃Keywords解剖特點骨折分型康復(fù)鍛煉手術(shù)入路內(nèi)固定方式選擇臨床應(yīng)用解剖特周圍神經(jīng)損傷和缺損的治療是顯微外科的難題之一，為解決自體神經(jīng)來源有限、異體神經(jīng)存在免疫源性等問題，眾多學(xué)者致力于可替代移植物的開發(fā)。熱點：組織工程化人工神經(jīng)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心Background周圍神經(jīng)損傷和缺損的治療是顯微外科的難題之一，為解決自體神經(jīng)周圍神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)基底膜無髓神經(jīng)有髓神經(jīng)RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）基底膜的主要成分：纖維粘連蛋白

基膜粘層蛋白內(nèi)皮粘連蛋白膠原含有RGD解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心軸突天然神經(jīng)組織的組成及結(jié)構(gòu)軸突髓鞘

納米復(fù)合材料仿生設(shè)計

制備RGD多肽接枝聚(乳酸-羥基乙酸-L-賴氨酸)/聚乳酸/β-磷酸三鈣/復(fù)合神經(jīng)導(dǎo)管（PRGD/PDLLA/β-TCP，PRGD）

周圍神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)基底膜無髓神經(jīng)有髓神經(jīng)RGD（精氨酸-甘氨酸解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心修復(fù)大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損修復(fù)犬30mm腓總神經(jīng)缺損AnimalExperiment解放軍武漢總醫(yī)院骨科修復(fù)大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損修復(fù)犬30m解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心獲得了湖北省食品藥品監(jiān)督管理局“醫(yī)療器械臨床試驗”的審批。符合CFDA第5號令《醫(yī)療器械臨床試驗規(guī)定》的臨床試驗的要求；通過倫理委員會討論同意臨床試用病例選擇：上肢周圍神經(jīng)缺損長度≤2.5cm2011.12~2013.12在我院骨科開展了15例ClinicalApplication解放軍武漢總醫(yī)院骨科獲得了湖北省食品藥品監(jiān)督管理局“醫(yī)療器械解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心

監(jiān)測指標觀察損傷神經(jīng)支配區(qū)域觸覺、痛覺和移動兩點辨別覺（M-2PD）恢復(fù)情況檢查損傷神經(jīng)支配肌肉的萎縮、肌力恢復(fù)及完成運動情況。電生理檢查觀察神經(jīng)傳導(dǎo)功能情況采用高頻超聲觀察導(dǎo)管內(nèi)外神經(jīng)生長情況，觀察受損神經(jīng)功能恢復(fù)情況

療效分析英國醫(yī)學(xué)研究會1954年頒布的標準評定，中華醫(yī)學(xué)會手外科學(xué)會上肢周圍神經(jīng)功能評定試用標準采用描述性統(tǒng)計計算功能改善率（%）解放軍武漢總醫(yī)院骨科監(jiān)測指標觀察損傷神經(jīng)支配區(qū)域觸覺解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心神經(jīng)陳舊性損傷（12例）

病例匯總（2011.12~2013.12）神經(jīng)新鮮損傷（3例）其中橈神經(jīng)損傷5例；尺神經(jīng)損傷5例；正中神經(jīng)損傷5例其中11例（共15例）術(shù)后功能不同程度恢復(fù)，未見不良反應(yīng)解放軍武漢總醫(yī)院骨科神經(jīng)陳舊性損傷（12例）病例匯總（2男性，49歲；致左肱骨中下段骨折合并左肘上橈神經(jīng)完全斷裂，左手垂腕畸形，左手諸指背伸活動受限診斷：左橈神經(jīng)損傷處理：急診行左肱骨中下段骨折切開復(fù)位接骨板內(nèi)固定+橈神經(jīng)探查修復(fù)術(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心Case1：橈神經(jīng)損傷CaseReport男性，49歲；致左肱骨中下段骨折合并左肘上橈神經(jīng)完全斷裂，左術(shù)后2周左手垂腕畸形，伸腕伸指受限傷口一期愈合，無不良反應(yīng)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后2周左手垂腕畸形，伸腕伸指受限傷口一期愈合，無不良反應(yīng)解術(shù)后6個月伸腕伸指功能部分恢復(fù)，感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度接近正常(48m/s)神經(jīng)纖維由近端向遠端沿管壁爬行生長，遠端神經(jīng)可探測到神經(jīng)血流信號運動功能高頻B超術(shù)后7.5個月伸腕伸指功能明顯改善再生神經(jīng)纖維由管壁向管腔中心生長，神經(jīng)血流信號較豐富運動功能高頻B超術(shù)后6個月伸腕伸指功能部分恢復(fù)，感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度接近正常(4伸腕伸指功能基本恢復(fù)，肌力達到4級，能對抗較大阻力做主動伸腕伸指活動；感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度44.6m/s，運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度達到正常（65.8m/s）術(shù)后13個月再生神經(jīng)束近、遠端已橋接，神經(jīng)血流信號豐富（縱截面）再生神經(jīng)已充滿整個管腔（橫截面）神經(jīng)再生良好，斷端及再生神經(jīng)未見膨大高頻B超DP解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心伸腕伸指功能基本恢復(fù)，肌力達到4級，能對抗較大阻力做主動伸腕解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后23個月伸腕伸指功能恢復(fù)，活動自如探查示神經(jīng)再生良好，無神經(jīng)瘤形成；PRGD神經(jīng)導(dǎo)管已完全降解、吸收；取周圍組織行病理切片未見明顯不良反應(yīng)。評分：伸腕＞45°（4分）；肌力＞M3（4分）；伸拇TAM活動范圍正常（優(yōu)4分）；伸指TAM＞健側(cè)的75%

（良3分）?？偡?5分，優(yōu)解放軍武漢總醫(yī)院骨科術(shù)后23個月伸腕伸指功能恢復(fù)，活動自如探Case2：尺神經(jīng)損傷男性，12歲，剪刀扎傷致左前臂中段尺神經(jīng)損傷1個月（外院未行探查修復(fù)），查體示左尺神經(jīng)支配區(qū)域觸覺、痛覺完全消失，環(huán)小指內(nèi)收外展障礙，爪形手畸形，F(xiàn)roment征（+），夾紙試驗（+）診斷：左尺神經(jīng)陳舊性損傷處理：行左尺神經(jīng)探查修復(fù)術(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)前外觀Case2：尺神經(jīng)損傷男性，12歲，剪刀扎傷致左前臂中段尺術(shù)中照片解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)中照片解放軍武漢總醫(yī)院骨科術(shù)后15個月拇對小指功能基本恢復(fù)左手無明顯爪形手畸形，運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度有所恢復(fù)（29.0m/s），感覺神經(jīng)未引出激發(fā)電位

解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心評分：感覺S3

（3分）；無爪形手畸形（4分）；屈指活動范圍正常（TAM優(yōu)4分）?？偡?1分，優(yōu)

術(shù)后15個月拇對小指功能基本恢復(fù)左手無明顯爪形手畸形，運動神Case3：正中神經(jīng)損傷女性，54歲；外傷致左前臂中上段正中神經(jīng)損傷，于外院行神經(jīng)探查修復(fù)術(shù)后8個月，左手拇指對掌不能、外展受限，拇、示、中指感覺減退診斷：左正中神經(jīng)神經(jīng)鞘瘤處理：行左正中神經(jīng)探查修復(fù)術(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心Case3：正中神經(jīng)損傷女性，54歲；外傷致左前臂中上段正術(shù)后6個月左拇指對掌功能明顯改善，可用拇指分別與余4指捏持筆在未施加外力及施加較大阻力下，左手主動屈腕均可達正常側(cè)80%左右解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后6個月左拇指對掌功能明顯改善，可用拇指分別與余4指捏持筆術(shù)后19個月左手拇指可分別與其余手指捏持硬幣（較精細物體），動作執(zhí)行流暢、連貫屈腕功能；肌電圖顯示神經(jīng)傳導(dǎo)速度有所恢復(fù)（運動29.80m/s；感覺34.50m/s）評分：感覺S3

（3分）；屈腕肌力M4（4分）；屈指TAM活動范圍正常（優(yōu)4分）；拇對掌基本正常（4分）。總分15分，優(yōu)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后19個月左手拇指可分別與其余手指捏持硬幣（較精細物體），小結(jié)改善率達73.3%等同于同類產(chǎn)品有效促進神經(jīng)再生未見明顯不良反應(yīng)理想的神經(jīng)修復(fù)材料PRGD/PDLLA/β-TCP神經(jīng)導(dǎo)管Keypoint小結(jié)改善率達73.3%PRGD/PDLLA/β-TCP解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心PRGD/PDLLA/β-TCP單通道神經(jīng)導(dǎo)管改進方法引入神經(jīng)生長因子復(fù)合種子細胞，以期提高受損神經(jīng)的修復(fù)效果FurtherStudy解放軍武漢總醫(yī)院骨科PRGD/PDLLA/β-TCP單通道神解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心技術(shù)路線BMSCs體外分離培養(yǎng)、純化

動物體內(nèi)植入實驗

大體觀察、運動功能（SFI）神經(jīng)電生理評價（肌電圖）

BMSCs體外定向誘導(dǎo)分化及鑒定

組織學(xué)評價（光鏡、電鏡）

神經(jīng)導(dǎo)管體內(nèi)降解情況

實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析

解放軍武漢總醫(yī)院骨科技術(shù)路線BMSCs體外分離培養(yǎng)、純化動ThankYou!

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新型人工神經(jīng)導(dǎo)管講解課件新型人工神經(jīng)導(dǎo)管講解課件解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心1.細胞培養(yǎng)及純化：無菌條件下分離8周齡雄性Wiatar大鼠雙側(cè)股骨和脛骨，完全培養(yǎng)基沖洗骨髓腔，沖洗液過濾、離心后接種到培養(yǎng)瓶；差速貼壁法進行體外擴增、純化。P0接種7dP3五、BMSCs體外分離培養(yǎng)及定向誘導(dǎo)分化接種24hP0接種3d解放軍武漢總醫(yī)院骨科1.細胞培養(yǎng)及純化：無菌條件下分離8周2.誘導(dǎo)方法：選取生長狀態(tài)良好的P3細胞，24孔板中每孔接種1000個細胞；待細胞貼壁后（接種1d）進行體外誘導(dǎo)，并設(shè)立平行對照組3.誘導(dǎo)條件：終濃度20ng/ml表皮生長因子（EGF）和20ng/ml堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），每天加入兩種生長因子，誘導(dǎo)8d后進行鑒定4.鑒定方法：常規(guī)固定、透膜、封閉后行免疫細胞化學(xué)鑒定。一抗（兔來源神經(jīng)元特異性烯醇化酶NSE）+CY3標記羊抗兔二抗；一抗（鼠來源神經(jīng)絲蛋白NF-M）+FITC標記羊抗小鼠IgG二抗；一抗（小鼠來源抗大鼠突觸素蛋白SYP）+FITC標記羊抗小鼠IgG二抗。解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心2.誘導(dǎo)方法：選取生長狀態(tài)良好的P3細胞，24孔板中每孔接誘導(dǎo)前誘導(dǎo)1d（胞質(zhì)回縮）誘導(dǎo)5d（神經(jīng)樣細胞改變，伸出2個或多個突起）解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心誘導(dǎo)8d（細胞連接成網(wǎng)狀）結(jié)果誘導(dǎo)前誘導(dǎo)1d（胞質(zhì)回縮）誘導(dǎo)5d（神經(jīng)樣細胞改變，伸出2個解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心平行對照NSE+CY3SYP+FITCNF-M+FITC誘導(dǎo)8d后，NSE、NF-M、SYP陽性率表達分別為70.3±4.2、25.7±1.6、3.6±0.5解放軍武漢總醫(yī)院骨科平行對照NSE+CY3SYP+FITCN

1.細胞準備：選取生長狀態(tài)良好的P3BMSCs，EGF與bFGF聯(lián)合誘導(dǎo)8d，收集細胞，調(diào)整密度為107/ml，備用。同時準備同樣密度的未誘導(dǎo)BMSCs移植的導(dǎo)管長16mm，內(nèi)徑3.0mm，壁厚0.2mm，低溫環(huán)氧乙烷消毒備用。

解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心六、動物體內(nèi)植入實驗1.細胞準備：選取生長狀態(tài)良好的P3BMSCs，EGF

2.

實驗分組：成年雄性Wistar大鼠40只，體重180-200g，隨機分為4組，每組10只左側(cè)為實驗側(cè)，右側(cè)為正常自身對照側(cè)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心A、PNGF導(dǎo)管組B、PNGF復(fù)合BMSCs組C、PNGF復(fù)合BMSC-NCs組D、自體神經(jīng)移植組BCDA2.實驗分組：成年雄性Wistar大鼠40只，體重1解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心3.手術(shù)方法

A組：0.8%戊巴比妥鈉40mg/Kg腹腔注射麻醉后，固定四肢，備皮，術(shù)野消毒、鋪巾，沿左大腿后外側(cè)做縱行切口，充分暴露坐骨神經(jīng)，距梨狀肌下緣下造12mm坐骨神經(jīng)缺損。顯微鏡下將兩斷端各植入導(dǎo)管內(nèi)2mm，10-0無創(chuàng)線將神經(jīng)外膜與管壁縫合3針固定

B、C組在導(dǎo)管固定后，分別于兩側(cè)向?qū)Ч軆?nèi)注入上述兩種細胞各10ul（即每根導(dǎo)管內(nèi)注入細胞5×105個細胞）

D組（自體神經(jīng)移植組）切除12mm坐骨神經(jīng)作為移植段，將移植段神經(jīng)逆行放置，縫合神經(jīng)外膜

逐層縫合切口，分籠喂養(yǎng)。解放軍武漢總醫(yī)院骨科3.手術(shù)方法小腿三頭肌濕重恢復(fù)率電生理小腿三頭肌細胞截面積恢復(fù)率（HE染色）組織學(xué)評價坐骨神經(jīng)功能指數(shù)大體與形態(tài)學(xué)觀察實驗動物HE染色亞甲藍髓鞘染色圖像分析4.監(jiān)測指標解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心小腿三頭肌濕重恢復(fù)率電生理小腿三頭肌細胞截面積恢復(fù)率（HE染術(shù)后切口愈合良好，無異物反應(yīng)術(shù)后2w出現(xiàn)不同程度紅腫、潰瘍解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.結(jié)果術(shù)后切口愈合良好，無異物反應(yīng)術(shù)后2w出現(xiàn)不同程度紅腫、潰瘍解解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心SFI=-38.3[(EPL-NPL)/NPL]+109.5[(ETS-NTS)/NTS]+13.3[(EIT-NIT)/NIT]-8.8*B、C、D組與A組比較，p＜0.0015.1.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科SFI=-38.3[(EPL-NPL)/解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.2.電生理#*B組與A組比較，p＜0.05；△D組與B組比較，p＜0.05；#C、D組與A組比較，p＜0.001MCV測定方法解放軍武漢總醫(yī)院骨科5.2.電生理#*B組與A組比較，p＜0解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.3.小腿三頭肌濕重恢復(fù)率*B、C、D組與A組比較，p＜0.001；#D組與B組比較，p＜0.05解放軍武漢總醫(yī)院骨科5.3.小腿三頭肌濕重恢復(fù)率*B、C、D5.4.肌細胞截面積恢復(fù)率A組B組C組D組正常*B、C、D組與A組比較，p＜0.0015.4.肌細胞截面積恢復(fù)率A組B組C組D組正常*B、C、D組解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.5.再生神經(jīng)再生神經(jīng)切片圖示各組再生神經(jīng)解放軍武漢總醫(yī)院骨科5.5.再生神經(jīng)再生神經(jīng)切片圖示各組再生解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心再生神經(jīng)組織學(xué)觀察HE染色亞甲藍染色A組B組C組D組解放軍武漢總醫(yī)院骨科再生神經(jīng)組織學(xué)觀察HE染色亞甲藍染色A組