肉制品中大腸菌群的檢驗(yàn)-第二法大腸菌群平板計(jì)數(shù)法

大腸菌群平板計(jì)數(shù)法

樣品的采集和處理一設(shè)備和材料二培養(yǎng)基和試劑三目錄頁

大腸菌群平板計(jì)數(shù)檢樣程序四

大腸菌群平板計(jì)數(shù)檢樣操作步驟五

一、樣品的采集和處理1.樣品的采樣原則和采樣方案樣品的采樣原則和采樣方案和大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法一樣，都按照國家食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則GB4789.1—2016中的相關(guān)規(guī)定去實(shí)施。2.樣品的采集和處理樣品的采集和處理方式與大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法一樣，都按照國家食品微生物學(xué)檢驗(yàn)肉與肉制品檢驗(yàn)GB/T4789.17—2003中的相關(guān)規(guī)定去實(shí)施。大腸菌群平板計(jì)數(shù)法

二、設(shè)備和材料大腸菌群平板計(jì)數(shù)法除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、

均質(zhì)器、振蕩器、無菌吸管或微量移液器及吸頭、無菌錐形瓶、天平、菌落計(jì)數(shù)器、無菌培養(yǎng)皿、菌落計(jì)數(shù)器、pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙等。

三、培養(yǎng)基和試劑大腸菌群平板計(jì)數(shù)法

煌綠乳糖膽鹽(brilliantgreenlactosebile,BGLB)肉湯結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(violetredbileagar,VRBA)無菌磷酸鹽緩沖液無菌生理鹽水1mol/LNaOH溶液1mol/LHCl溶液

36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h選擇15~150平板計(jì)數(shù)典型和可疑菌落挑選10個(gè)典型菌落接種到BGLB典型菌落為紫紅色周圍有紅色膽鹽沉淀環(huán)，直徑為0.5mm四、大腸菌群平板計(jì)數(shù)檢樣程序

五、大腸菌群平板計(jì)數(shù)檢樣操作步驟大腸菌群平板計(jì)數(shù)法1.樣品的稀釋同大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法中的樣品稀釋操作。2.樣品的接種和培養(yǎng)2.1選取2個(gè)~3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種2個(gè)無菌平皿,每皿1mL。同時(shí)取1mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。2.2及時(shí)將15mL~20mL融化并恒溫至46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)約傾注于每個(gè)平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿,將培養(yǎng)基與樣液充分混勻,待瓊脂凝固后,再加3mL~4mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板,置于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。

五、大腸菌群平板計(jì)數(shù)檢樣操作步驟大腸菌群平板計(jì)數(shù)法3.平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在15CFU~150CFU之間的平板,分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落(如菌落直徑較典型菌落小)。典型菌落為紫紅色,菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán),菌落直徑為0.5mm或更大,最低稀釋度平板低于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。4.證實(shí)試驗(yàn)從VRBA平板上挑取10個(gè)不同類型的典型和可疑菌落,少于10個(gè)菌落的挑取全部典型和可疑菌落。分別移種于BGLB肉湯管內(nèi),36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h,觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣,即可報(bào)告為大腸菌群陽性。

五、大腸菌群平板計(jì)數(shù)檢樣操作步驟大腸菌群平板計(jì)數(shù)法5.大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽性的試管比例乘以3中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù),再乘以稀釋倍數(shù),即為每g(mL)樣品中大腸菌群數(shù)。例:10-4樣品稀釋液1mL,在VRBA平板上有100個(gè)典型和可疑菌落,挑取其中10個(gè)接種BGLB肉湯管,證實(shí)有6個(gè)陽性管,則該樣品的大腸菌群