單次靜滴法舒地爾及其活性代謝物羥基法舒地爾在健康人體的藥動(dòng)學(xué)研究

單次靜滴法舒地爾及其活性代謝物羥基法舒地爾在健康人體的藥動(dòng)學(xué)研究

氨基熱耦合是一種主要的抗凝劑，其主要激酶抑制劑。Rho激酶磷酸化肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCP)的肌球蛋白結(jié)合亞基,抑制磷酸酶活性(該磷酸酶的作用是將磷酸化肌球蛋白脫磷酸,使肌肉松弛);還能直接磷酸化肌球蛋白輕鏈(MLC),從而收縮平滑肌,導(dǎo)致血管痙攣。法舒地爾在正?；虿±砬闆r下都能競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合Rho激酶催化區(qū)的ATP位點(diǎn),阻斷Rho激酶的活性。它能強(qiáng)效擴(kuò)血管、保護(hù)缺血腦組織,目前臨床主要用于蛛網(wǎng)膜下腔出血手術(shù)后腦血管痙攣、腦缺血等的防治。其羥化活性代謝產(chǎn)物羥基法舒地爾特異性更高,在體內(nèi)保留時(shí)間更長(zhǎng),與法舒地爾共同發(fā)揮藥理作用。由于Rho蛋白/Rho激酶系統(tǒng)在細(xì)胞分子水平生命活動(dòng)中有著重要意義,近年來(lái),對(duì)法舒地爾的相關(guān)研究不斷深入,證明其具有腦、心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用1995年6月,鹽酸法舒地爾(商品名:依立盧)由日本旭化成株式會(huì)社上市,目前在日本得到了廣泛應(yīng)用。已進(jìn)口至中國(guó)。鹽酸法舒地爾中堿基部分發(fā)揮藥效,其化學(xué)結(jié)構(gòu)為六氫-1-(5-硫磺基異喹啉)-1(H)-1,4-二氮雜鹽酸法舒地爾和甲磺酸法舒地爾在中國(guó)人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究均未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)研究并比較了這兩種藥在中國(guó)健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)。1材料表面1.1法舒地爾藥品試驗(yàn)藥物:注射用甲磺酸法舒地爾(武漢啟瑞藥業(yè)有限公司,每支西林瓶含本品35mg,相當(dāng)于法舒地爾25mg,有效期至2010年1月);對(duì)照藥物:鹽酸法舒地爾注射液(商品名:依立盧)(旭化成制藥株式會(huì)社名古屋醫(yī)藥工廠(chǎng),2mL:30mg,相當(dāng)于法舒地爾27.3mg。批號(hào)ERS11MM);甲磺酸法舒地爾對(duì)照品(武漢啟瑞科技發(fā)展有限公司,批號(hào)071201,純度99.7%);鹽酸羥基法舒地爾對(duì)照品(美國(guó)Sigma公司,純度98.3%);雷尼替丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)100163-200405,純度>99%;甲醇與甲酸為HPLC級(jí);甲酸銨為分析純;蒸餾水(WaterProPS型超純水機(jī)制備);人空白血漿(北京安貞醫(yī)院血庫(kù))。1.2電噴霧離子束的表征Agilent1100液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)Agilent公司,包括G1311A型四元輸液泵,G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器,G1316A型柱溫箱和G1322A型脫氣機(jī));3200QTrap串聯(lián)四極桿線(xiàn)性離子阱質(zhì)譜儀[美國(guó)AppliedBiosystems公司,電噴霧離子源(ESI)];Analyst1.4.2數(shù)據(jù)采集軟件(美國(guó)AppliedBiosystems公司)。CP225D型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);TGL-16C型高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng));WaterProPS型超純水機(jī)(美國(guó)Labconco公司);BF-2000A型氮?dú)獯蹈蓛x(北京八方世紀(jì)有限公司)。2對(duì)象和方法2.1同意書(shū)的篩選試驗(yàn)方案經(jīng)北京安貞醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。健康志愿者簽署書(shū)面知情同意書(shū)后參加篩選。入選12例中國(guó)健康受試者,男女各半,年齡為(33±4)歲,身高為(163±7)cm,體重為(59±8)kg,體重指數(shù)(BMI)在19.2~24.0kg·m2.2分組及清洗時(shí)間雙周期兩制劑交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。12名受試者,男女分別隨機(jī),分為兩組,每組3男3女。第一組第一周期單次靜滴甲磺酸法舒地爾35mg,第二周期靜滴鹽酸法舒地爾30mg,中間經(jīng)過(guò)3天清洗期。第二組反之。2.3舒地爾一支的稀釋藥物配制方法:甲磺酸法舒地爾一瓶(35mg)溶于100mL生理鹽水;鹽酸法舒地爾一支(30mg)用100mL生理鹽水稀釋。給藥方法:受試者進(jìn)食統(tǒng)一清淡早餐后,經(jīng)靜脈滴注用輸液泵(四道輸液泵GeminiPC-4)輸注已配藥物輸液,輸液泵速度200mL·h2.4靜脈血給藥于給藥前采集空白血,于給藥后10,20,30,35,40,45,60,75,90min,2,4,6,8,12h經(jīng)前臂靜脈套管針取靜脈血3mL(每位受試者15個(gè)血樣)。給藥過(guò)程中10,20min時(shí)左臂給藥,右臂采血。給藥30min時(shí)左臂停藥,右臂同時(shí)采血。血樣置肝素化采血管中,3000r·min留取6份尿樣,收集尿液間隔為:0時(shí)尿(給藥前),0~2,2~4,4~8,8~12,12~24h。準(zhǔn)確量取并記錄給藥后各時(shí)間段尿液體積,尿樣冷凍于-80℃冰箱保存,待測(cè)。2.5生物樣品處理方法在生物樣品處理中,內(nèi)標(biāo)為雷尼替丁,質(zhì)量濃度為10μg·L2.5.1流動(dòng)相復(fù)溶精密取出200μL血漿樣本,加入100μL內(nèi)標(biāo)溶液,再加入500μL甲醇,漩渦振蕩、離心,取出600μL上清液至10mL離心管,40℃水浴氮?dú)獯蹈?用100μL流動(dòng)相復(fù)溶,離心,20μL上清液進(jìn)樣。2.5.2樣品處理精密取出200μL尿液樣本,加入100μL內(nèi)標(biāo)溶液,漩渦振蕩30s,30μL上清液進(jìn)樣。2.6法舒地爾、羥基法舒地爾和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間及穩(wěn)定性經(jīng)過(guò)5個(gè)分析批的方法學(xué)考察,確證了該方法的特異性、靈敏度、精密度等,無(wú)基質(zhì)效應(yīng)。以藥物和內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積比值對(duì)藥物濃度進(jìn)行加權(quán)線(xiàn)性回歸,表明血漿中法舒地爾和羥基法舒地爾的線(xiàn)性范圍均為0.4~400μg·L方法學(xué)考察期間法舒地爾、羥基法舒地爾和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為(3.40±0.01)、(3.27±0.01)和(2.73±0.04)min,RSD/%分別為0.16,0.16和1.53。血漿和尿液樣品室溫放置,反復(fù)凍融及長(zhǎng)期穩(wěn)定性均符合規(guī)定。本方法重現(xiàn)性好,測(cè)定時(shí)間短(5min/樣品),適用于法舒地爾的人體藥動(dòng)學(xué)研究。2.7質(zhì)譜掃描參數(shù)dp色譜條件:色譜柱:ZORBAXStableBond-C質(zhì)譜條件:儀器:AB3200QTrap,電噴霧電離源(ESI),正離子模式。掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM),法舒地爾、羥基法舒地爾和雷尼替丁MRM掃描的離子對(duì)分別是m/z292.2※99.2,m/z308.2※99.2和m/z315.3※176.2。離子源參數(shù):CUR=172.375Kpa,IS=5500V,TEM=750℃,GS1=344.75kPa,GS2=482.65Kpa。優(yōu)化后法舒地爾和羥基法舒地爾的MRM質(zhì)譜掃描參數(shù)DP,EP,CE分別是60V,7V,40V;內(nèi)標(biāo)的MRM質(zhì)譜掃描參數(shù)DP,EP,CE分別是40V,4V,20V。2.8處理數(shù)據(jù)血藥濃度數(shù)據(jù)采用皖南醫(yī)學(xué)院孫瑞元教授主編的DAS2.1.1軟件擬合,確定其藥動(dòng)學(xué)模型和權(quán)重,計(jì)算各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。其中,達(dá)峰時(shí)間t3結(jié)果3.1血漿內(nèi)源峰干擾分離空白血漿、空白血漿加入標(biāo)準(zhǔn)品及受試者給藥10min的血漿樣品色譜圖見(jiàn)圖1,從圖1中可知,法舒地爾、羥基法舒地爾與雷尼替丁內(nèi)標(biāo)峰分離良好,不受血漿內(nèi)源峰干擾。3.2血藥濃度曲線(xiàn)12名健康受試者單次靜脈滴注甲磺酸法舒地爾和鹽酸法舒地爾的平均血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。3.3權(quán)重的確定12名中國(guó)健康成年受試者分別單次靜滴甲磺酸法舒地爾和鹽酸法舒地爾,用DAS2.1.1軟件進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)處理。血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)符合一室模型,權(quán)重采用1/cc。兩種藥物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。兩種藥物的法舒地爾各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。單次靜滴甲磺酸法舒地爾后法舒地爾的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(ρ兩種藥的羥基法舒地爾各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但受試者個(gè)體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。單次靜滴甲磺酸法舒地爾后羥基法舒地爾的t本試驗(yàn)法舒地爾24h尿回收率為5.43%。羥基法舒地爾24h尿回收率為35.4%。3.4安全評(píng)估試驗(yàn)過(guò)程中有1例AST輕度升高(53u·L4人體藥動(dòng)學(xué)參數(shù)法舒地爾半衰期較短,僅為約20min,因此洗脫期設(shè)為3d。本試驗(yàn)中的試驗(yàn)藥物甲磺酸法舒地爾相當(dāng)于法舒地爾25mg,對(duì)照藥物鹽酸法舒地爾相當(dāng)于法舒地爾27.3mg。單次靜滴甲磺酸法舒地爾和鹽酸法舒地爾后法舒地爾的ρ有文獻(xiàn)報(bào)道法舒地爾給藥后血液中立即代謝產(chǎn)生羥基法舒地爾,同時(shí)法舒地爾迅速衰減。羥基法舒地爾消除緩慢,AUC值比法舒地爾高數(shù)倍。法舒地爾半衰期為0.25~0.78h;羥基法舒地爾為1.67~4.66h。本試驗(yàn)中單次靜滴甲磺酸法舒地爾35mg后法舒地爾和羥基法舒地爾