克氏原螯蝦procam59sclarkii試驗(yàn)初報(bào)

克氏原螯蝦procam59sclarkii試驗(yàn)初報(bào)

在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，有越來越多的適應(yīng)因素受到影響，如水質(zhì)污染、冷熱、環(huán)境破壞、運(yùn)輸、營養(yǎng)不良、有害物質(zhì)入侵、管理不足等。這種不同的類型和程度的適應(yīng)性直接影響水生動(dòng)物的正常生長發(fā)育。嚴(yán)重的情況下，身體的酶濃度會(huì)降低，相應(yīng)的疾病和死亡也會(huì)停止。因此,減少或消除水產(chǎn)動(dòng)物的應(yīng)激因素是養(yǎng)殖者不可忽視的重要問題。有關(guān)研究表明,要減少和消除應(yīng)激因素,除了實(shí)行科學(xué)飼養(yǎng)管理外,還可以根據(jù)具體情況在飼料中添加一些抗應(yīng)激添加劑有些生物活性物質(zhì)既可增強(qiáng)魚類的抗應(yīng)激能力,又可增強(qiáng)免疫功能。因此,開發(fā)抗應(yīng)激免疫增強(qiáng)劑能提高魚類生產(chǎn)性能和降低其發(fā)病率,具有廣闊的應(yīng)用前景。殼聚糖作為免疫增強(qiáng)劑能提高水產(chǎn)動(dòng)物免疫功能的研究和報(bào)道已不少1材料和方法1.1克氏原螯蝦殼聚糖的制備克氏原螯蝦、試驗(yàn)飼料原料購自南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所養(yǎng)殖試驗(yàn)場(chǎng)。挑選健壯活潑、無病無傷的克氏原螯蝦,平均體重(22.05±2.15)g。殼聚糖為低聚殼聚糖,由上海海洋大學(xué)食品學(xué)院提供,殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%。葡萄糖、AKP和CAT試劑盒購自南京建成生物工程研究所。1.2方法1.2.1飼料的制備試驗(yàn)用基礎(chǔ)飼料配方(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為:魚粉5.00%、豆餅35.00%、菜餅5.00%、棉餅5.00%、次粉35.00%、麥麩5.00%、皮糠5.00%、磷酸氫鈣1.50%,沸石粉2.00%、食鹽0.50%、預(yù)混料1.00%。3種試驗(yàn)飼料為在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.50%、1.00%、1.50%的殼聚糖,相應(yīng)減少次粉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。將各種原料分別粉碎后過40目篩,按配比精確稱量、采用逐級(jí)放大法使微量原料充分混勻,加適量水、用小型絞肉機(jī)加工成直徑為1.5mm的顆粒飼料,60℃恒溫干燥后置-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。將試?yàn)分成陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組和3個(gè)試驗(yàn)組共5組,每組3個(gè)重復(fù)。陰性對(duì)照組投喂基礎(chǔ)飼料,飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后不進(jìn)行低溫應(yīng)激處理;陽性對(duì)照組投喂基礎(chǔ)飼料,飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后與試驗(yàn)組一起進(jìn)行低溫應(yīng)激處理;3個(gè)試驗(yàn)組分別投喂在基礎(chǔ)飼料中添加0.50%、1.00%、1.50%殼聚糖的試驗(yàn)飼料。1.2.2試驗(yàn)用水和飼養(yǎng)試驗(yàn)在南京曉莊學(xué)院生態(tài)學(xué)省級(jí)重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科水產(chǎn)動(dòng)物生理生態(tài)研究室內(nèi)的15個(gè)水族箱(每個(gè)大小為60cm×45cm×38cm)中進(jìn)行。試驗(yàn)開始前先將克氏原螯蝦馴養(yǎng)7d,馴養(yǎng)期投喂另外配制的精制飼料。馴養(yǎng)結(jié)束后,挑選健康狀況良好、大小基本相同、四肢健全的克氏原螯蝦,稱重后隨機(jī)放入15個(gè)水族箱中,每箱8只,雌雄各半,并放置適量水草和帶孔的磚塊供其躲避和休息。各箱隨機(jī)排列,經(jīng)檢驗(yàn)各組克氏原螯蝦的初始體重差異不顯著。試驗(yàn)用水為曝氣后的自來水。試驗(yàn)期間水溫為室內(nèi)自然溫度,全天持續(xù)充氣增氧。分別于每天清晨和傍晚投喂等量的飼料并做記錄,每次投喂前1h吸凈前次糞便,投喂量為每箱蝦體重的5%,每周調(diào)整一次投喂量。試驗(yàn)期間每周換水一次,每次換水1/2,以保證水質(zhì)清潔。飼養(yǎng)試驗(yàn)從2011年8月30日開始至2011年10月28日結(jié)束,飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后將陽性對(duì)照組和3個(gè)試驗(yàn)組的蝦放入4℃冰箱中低溫處理5min,然后取其血清待測(cè)。1.2.3血清酚活力的測(cè)定葡萄糖(即血糖)含量采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法測(cè)定。AKP活力采用酚氧化比色法測(cè)定,酶活力單位定義為100mL血清在37℃與基質(zhì)作用15min產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)金氏單位。CAT活力采用鉬酸銨可見光比色法測(cè)定,酶活力單位定義為37℃下每毫升血清每秒分解1μmo的H1.3數(shù)據(jù)處理與分析試驗(yàn)測(cè)定的數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS17.0分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-wayAnova)分析,Duncan’s法進(jìn)行多重比較。2結(jié)果與分析2.1殼聚糖對(duì)兩組血糖含量的影響殼聚糖對(duì)低溫應(yīng)激下克氏原螯蝦血糖含量的影響如表1所示。從表1可以看出,與陰性對(duì)照組相比,陽性對(duì)照組的血糖含量顯著升高,比陰性對(duì)照組提高了183.19%;與陽性對(duì)照組相比,0.50%、1.00%及1.50%殼聚糖組的血糖含量均顯著降低,其中1.00%殼聚糖組血糖含量降低的幅度最大,0.50%殼聚糖組次之,1.50%殼聚糖組最小,3個(gè)試驗(yàn)組之間血糖含量差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果表明,飼料中添加適量的殼聚糖對(duì)低溫應(yīng)激下克氏原螯蝦的血糖含量有顯著影響。2.2殼聚糖對(duì)cat活力的影響從表1可以看出,飼料中添加殼聚糖對(duì)低溫應(yīng)激下克氏原螯蝦血清中CAT、AKP活力有顯著影響。與陰性對(duì)照組相比,陽性對(duì)照組克氏原螯蝦血清中CAT、AKP活力顯著降低。與陽性對(duì)照組相比,0.50%殼聚糖組、1.00%殼聚糖組及1.50%殼聚糖組血清中CAT活力均顯著升高,其中0.50%殼聚糖組和1.00%殼聚糖組血清中CAT活力之間無顯著差異,均顯著高于1.50%殼聚糖組,但3個(gè)試驗(yàn)組CAT活力均顯著低于陰性對(duì)照組。與陽性對(duì)照組相比,0.50%殼聚糖組和1.00%殼聚糖組血清中AKP活力均顯著升高,其中0.50%殼聚糖組血清中AKP活力顯著高于1.00%殼聚糖組,而飼料中添加1.50%殼聚糖不能顯著提高低溫應(yīng)激下克氏原螯蝦血清中AKP活力。3后記和討論3.1應(yīng)激程度與續(xù)升率應(yīng)激反應(yīng)中能量代謝上的改變突出表現(xiàn)為血糖含量的持續(xù)升高,其幅度也與應(yīng)激程度呈正相關(guān)。由于應(yīng)激時(shí)血糖升高的時(shí)效比血漿皮質(zhì)醇更遲緩,也更容易測(cè)定,因此血糖含量被廣泛用來監(jiān)測(cè)和量化魚類應(yīng)激反應(yīng)3.2低溫處理對(duì)克氏原螯蝦免疫功能的影響CAT是抗氧化系統(tǒng)的終端酶,是細(xì)胞內(nèi)清除自由基的主要酶類,它主要通過將細(xì)胞代謝產(chǎn)生的毒性物質(zhì)H從本研究結(jié)果看,陽性對(duì)照組的CAT、AKP活力顯著低于陰性對(duì)照組,說明低溫處理使克氏原螯蝦的免疫功能嚴(yán)重受損;而添加殼聚糖各組的CAT、AKP活力明顯高于陽性對(duì)照組,說明添加殼聚糖能夠提高低溫應(yīng)激狀態(tài)下克氏原螯蝦的免疫功能,其中0.50%殼聚糖組和1.00%殼聚糖組CAT活力較高,0.