菠菜中葉綠素提取方法的比較研究

菠菜中葉綠素提取方法的比較研究

常綠葉子是植物交換的主要顏色。從植物中提取的純綠色葉子沒有中毒。它是中國允許使用的綠色涂料之一。它可以廣泛應(yīng)用于食品、制藥、日用化工等行業(yè)。但由于葉綠素是一種極不穩(wěn)定的物質(zhì),易受溫度、光照等各種環(huán)境因素影響,從而給葉綠素的提取帶來諸多麻煩,且影響其準(zhǔn)確性11.1儀器和檢測方法新鮮菠菜,購自本地市場。乙醇、丙酮等均為分析純。電子分析天平(萬分之一,上海光學(xué)儀器廠);722s分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);KQ-5200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);HZQ-F160全溫振蕩培養(yǎng)箱(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司制造)。1.21.2.1研缽加深刻性用電子天平準(zhǔn)確稱取清潔、去除大葉脈的菠菜葉片2.0g,將其剪碎置于研缽中。分別用80%丙酮、95%乙醇、丙酮與無水乙醇(1∶1)、丙酮與95%乙醇(2∶1)4種溶液作提取劑,加少量碳酸鈣(CaCO1.2.2振蕩浸提與采用丙酮的方法處理稱取新鮮菠菜(方法同1.2.1),分別用80%丙酮、95%乙醇、丙酮與無水乙醇(1∶1)、丙酮與95%乙醇(2∶1)、丙酮與95%乙醇(2∶1)加少量碳酸鈣為提取液(料液比為1∶10)(每種提取液3個處理),放入恒溫振蕩培養(yǎng)箱(28.1℃)中振蕩浸提。其中丙酮與95%乙醇(2∶1)加少量碳酸鈣一組進(jìn)行了靜止浸提的處理,以考察振蕩浸提與靜止浸提的差別。在浸提6.0h、7.0h、8.0h、9.0h、34h時取樣,用722s可見分光光度計(jì)在645nm和663nm波長下測定吸光度,計(jì)算出葉綠素的含量1.2.3超聲波清洗法測定葉綠素的含量稱取去除大葉脈的新鮮菠菜2.0g共15份,每一份剪成小于2mm的細(xì)絲,分別加入250ml的錐形瓶,以80%丙酮、95%乙醇、丙酮與無水乙醇(1∶1)、丙酮與95%乙醇(2∶1),丙酮與95%乙醇(2∶1)加碳酸鈣為提取液(料液比為1∶10),將其放入KQ-5200型超聲波清洗器(50HZ,150W,室溫28.1℃)中,在振蕩0.3h、0.4h、0.5h、0.6h、0.7h時取樣,用722s可見分光光度計(jì)在645nm和663nm波長下測定吸光度,計(jì)算得出葉綠素的含量。1.3數(shù)據(jù)計(jì)算用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件和MicrosoftOfficeExcel2003處理數(shù)據(jù)。22.1不同提取液提取葉綠素的量本方法選用80%丙酮、95%乙醇、丙酮與無水乙醇(1∶1)、丙酮與95%乙醇(2∶1)4種溶液為提取劑,試驗(yàn)結(jié)果見表1。從表1可以看出在室溫條件下不同提取液提取葉綠素的含量有所不同,其中葉綠素a和葉綠素b總量由高至低順序?yàn)椤帽靡掖?1∶1)>丙酮∶95%乙醇(2∶1)>80%丙酮>95%乙醇。其中80%丙酮和95%乙醇作提取劑的處理之間無顯著差異;二者與后兩種處理相比較差異極顯著(2.22.2.1不同提取劑為不同溶劑對葉綠素提取效果的影響由圖1可見,不同浸提時間所提取的葉綠素含量不同。在浸提初期所得到的葉綠素含量普遍較低,隨著浸提時間的延長,含量不斷增加。不同浸提液達(dá)到葉綠素峰值所用的時間也各不相同。當(dāng)以80%的丙酮,95%的乙醇,丙酮與無水乙醇(1∶1),丙酮與95%乙醇(2∶1)為浸提液時達(dá)到葉綠素峰值所需的時間分別為8h(0.240mg/g)、7h(0.58mg/g)、9h(0.91mg/g)和7h(1.302mg/g),說明葉綠素對上述4種提取液的親和力不同,因而導(dǎo)致提取效果存在差異。從丙酮與95%乙醇(2∶1)、丙酮與無水乙醇(1∶1)、95%乙醇到80%丙酮提取效果依次降低,這一結(jié)果與明華等2.2.2振蕩浸提液對葉綠素提取率的影響由圖2可以看出,浸提8h,靜止浸提與振蕩浸提的葉綠素含量均達(dá)最高,分別為0.144mg/g和0.240mg/g,振蕩浸提高于靜止浸提,T檢驗(yàn)結(jié)果差異達(dá)極顯著水平。2.2.3影響提取效果的碳鈣化CaCO2.32.3.1葉綠素峰值所需時間的確定圖4顯示萃取初期葉綠素含量普遍較低,隨著萃取時間的延長,含量不斷增加。不同的浸提液達(dá)到葉綠素含量最高所需的時間各異。除丙酮與95%乙醇(2∶1)為浸提液時達(dá)到葉綠素峰值所需的時間為0.5h外,其余3種處理達(dá)到葉綠素峰值所需的時間均為0.6h。不同浸提液提取效果明顯不同,從丙酮與95%乙醇(2∶1)、丙酮與無水乙醇(1∶1)、95%乙醇到80%丙酮提取效果依次降低。2.3.2影響提取效果的碳鈣化從圖5可見,以丙酮與95%乙醇(2∶1)加少許CaCO3提取方法的影響研磨法中,以丙酮與無水乙醇(1∶1)為提取液研磨提取效果最佳,比傳統(tǒng)的丙酮研磨法提取葉綠素的含量高28.3%。有機(jī)溶劑直接浸提法和超聲波萃取法中,以丙酮與95%乙醇(2∶1)作浸提液提取效果最佳;振蕩與往浸提液中加CaCO通過對試驗(yàn)結(jié)果的分析,可見混合液的提取效果比