助溶劑對氟苯尼考水溶制劑穩(wěn)定性的影響

助溶劑對氟苯尼考水溶制劑穩(wěn)定性的影響

氟苯尼科又稱氟霉素，是20世紀80年代開發(fā)的一種新型抗凝劑。其具有抗菌譜廣、吸收良好、體內分布廣泛、無潛在的致再生障礙性貧血作用氟苯尼考為白色或類白色的結晶性粉末,無臭,其化學結構如圖1所示。氟苯尼考在二甲基甲酰胺中極易溶解,在甲醇中溶解,在冰醋酸中略溶,在水或氯仿中極微溶解氟苯尼考的水溶劑微量溶解的問題嚴重制約了其在養(yǎng)殖生產中的應用,也給其藥理、藥效相關方面的研究帶來了極大的困擾。目前,尚未見到關于提高氟苯尼考在水中的溶解度、各種助溶劑對其藥效的影響及最適用量等方面的相關報道。本文以常見、已報道的二甲基亞砜1材料和方法1.1實驗試劑與菌株1.1.1實驗藥品氟苯尼考粉劑(寧夏太平洋生物制藥有限公司,100%);氟苯尼考注射液(濟寧市萬生藥業(yè)有限公司,30%);二甲基亞砜、甲醇及乙醇等常用試劑購自天津市天力化學試劑有限公司;實驗用水均為超純水。1.1.2實驗菌株實驗所用嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)和克里斯坦森耶爾森氏菌(Yersiniakrislensenii)分離株為黑龍江水產研究所魚病研究室鑒定和保存的菌株。1.1.3培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基為普通蛋白胨水,固體培養(yǎng)基為普通瓊脂培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所用成分購自北京奧博星生物技術責任有限公司。1.2氟苯尼考的制備1.2.1三種助溶劑對氟苯尼考的助溶效果實驗使用二甲基亞砜、甲醇、乙醇三種助溶劑來促進氟苯尼考在其水溶液中的溶解度。經預實驗粗篩,分別選取最低助溶劑添加量,且在助溶劑最大添加量不超過70%的前提下,分別配制不同助溶劑比例的氟苯尼考最高濃度水溶液。二甲基亞砜助溶的氟苯尼考水溶液濃度為0.1%~30%;甲醇助溶組為0.1%~2%;乙醇助溶組為0.1%~0.7%。1.2.2溫度對氟苯尼考溶解度的影響實驗將目測能充分溶解的各實驗溶解管分別置于4℃(低溫)、20℃(常溫)、30℃(高溫)三個溫度下7d,連續(xù)目測觀察藥物是否有析出,以判定其溶解穩(wěn)定性。低溫及常溫控制分別于4℃藥品保存柜及恒溫烘箱中進行。1.2.4藥敏片的制作將自制的直徑為6mm的圓形濾紙片高溫高壓滅菌,烘干,然后分別浸潤于含三種助溶劑的3g/L的氟苯尼考水溶液中1h,最終使每個濾紙片含氟苯尼考30μg,取出低溫烘干,制成藥敏片D(二甲基亞砜助溶)、E(乙醇助溶)和M(甲醇助溶)。用購買的30%氟苯尼考注射液按照同樣的方法制成對照藥敏片。1.2.5抑菌試驗分別取嗜水氣單胞菌和克里斯坦森耶爾森氏菌16%甘油保存菌液200μL,接種到3mL普通蛋白胨水中,28℃震蕩培養(yǎng)過夜。取0.1mL對數生長期培養(yǎng)菌液均勻涂板于普通瓊脂培養(yǎng)基平板上,然后等距離貼上對照及D、E、M四種自制藥敏片,28℃恒溫培養(yǎng)24h,測量抑菌圈直徑。2結果2.1甲基亞添加量對氟苯尼考的影響隨著助溶劑添加量的升高,氟苯尼考在水溶液中的溶解度也逐漸增大。各助溶劑的助溶效果見表1。由表1可見,隨著二甲基亞砜添加量的不斷升高,氟苯尼考在其水溶液中的溶解度也逐漸增大。當二甲基亞砜的添加量從10%逐漸升高到70%時,氟苯尼考水溶液最大濃度也從0.1%提升至30%。值得注意的是,在二甲基亞砜添加量為20%、30%和40%時,氟苯尼考的溶解度不變,其水溶液最大濃度均為0.5%。由表2可見,水溶液中甲醇濃度低于50%時,氟苯尼考的溶解度極小,低于0.1%。而在甲醇添加量為50%、55%、60%時,可配制穩(wěn)定的0.1%、0.5%、1%的氟苯尼考水溶液,當甲醇的添加量達到70%時,氟苯尼考水溶液的最高濃度僅為2%。由表3可見,配制0.1%和0.5%的氟苯尼考需要添加的乙醇量為10%和50%,在保證乙醇的添加量不超過70%的情況下,最大只能配制出0.7%的氟苯尼考水溶液。由實驗數據可見,1mL乙醇可以助溶0.01g氟苯尼考原粉。2.2氟苯尼考溶解組藥物出用時間經連續(xù)7d目測觀察,使用10%、20%、50%、60%、62.5%、65%、70%的二甲基亞砜配制出的0.1%、0.5%、1%、5%、10%、20%、30%的氟苯尼考溶解組在低溫下均有藥物析出,藥物析出時間與藥液濃度有關。而以甲醇和乙醇為助溶劑的溶解組在低溫、常溫和高溫條件下均無藥物析出,溶解效果較穩(wěn)定。2.3藥物含量測定在氟苯尼考溶解后1d和7d時,用紫外分光光度法實驗所選定的三個溫度下,無結晶析出的助溶劑溶解管中藥物的含量,各助溶劑溶解管的含量未發(fā)生改變,與藥物配制濃度基本一致。2.4抑菌圈直徑測定對照及D、E、M四種自制藥敏片分別貼于普通瓊脂培養(yǎng)基上,28℃恒溫培養(yǎng)24h后,測定其抑菌圈直徑大小,具體數值詳見表4。從表4中可以看出,與對照組相比,E組抑菌圈直徑明顯增大,而M,D的抑菌圈直徑與對照組基本一致。3甲基亞對氟苯尼考的助溶效果液體制劑與其他劑型相比具有分散度大、便于分劑量、易于服用、吸收快、作用迅速、刺激性小等特點本實驗采用添加助溶劑的方法用以增加氟苯尼考在其水溶液中的溶解度,使其達到速效、高效的目的。根據市面現主要銷售的氟苯尼考各劑型的濃度來確定所配藥液濃度,以商品化氟苯尼考溶液助溶劑最大添加量不超過70%為限,測定了二甲基亞砜、乙醇及甲醇對其助溶效果及藥效影響。實驗結果表明,三種助溶劑對氟苯尼考均有一定助溶作用,以二甲基亞砜助溶效果最好,甲醇次之,乙醇效果較小。當二甲基亞砜添加量達到70%時,可配制出與商品化最大濃度氟苯尼考溶液(30%)的濃度一致,而甲醇及乙醇助溶的氟苯尼考水溶液最大濃度僅為2%和0.7%。二甲基亞砜是一種強極性惰性溶劑,常溫下為無色透明液體,熱穩(wěn)定性好,能溶于水、乙醇、氯仿等大多數有機物中,一向被稱為“萬能溶媒”,廣泛應用于醫(yī)藥、石油、化工、印染等行業(yè)中尿、鎮(zhèn)靜作用。能增加藥物吸收和提高療效,因此在國外叫做“萬能藥”。中國藥物檢測中心等在60年代進行了全面的毒理檢驗及病理解剖證明:二甲基亞砜的半數致死量LD與二甲基亞砜相比,乙醇及甲醇對氟苯尼考的助溶效果較差,大量助溶劑的添加對藥物溶解度提升作用不大,其優(yōu)點是助溶的藥物溶液穩(wěn)定性高,低溫下不易析出。而乙醇助溶組對藥物抑菌效果影響較大,可能乙醇本身具有一定的殺菌效果,在大量添加助溶劑的同時,影響了正常藥物抑菌效果的判定,而甲醇具有一定毒性,也可能對藥物效果及抑菌實驗有較大干擾作用。本實驗結果表明,二甲基亞砜助溶效果最好,對藥效影響最小,可作為氟苯尼考水溶制劑的首選助溶劑。配制溶液時應注意:1.配制氟苯尼考水溶液時,先加助溶劑,充分溶解氟苯尼考后,再加水。2.二甲基亞砜配制