脯氨酸含量的測定

脯氨酸含量的測定

植物組織游離脯氨酸含量的測定一試驗原理植物在逆境條件下,游離脯氨酸便會大量積累,且積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。

因此,脯氨酸可作為植物抗逆性的一項生化指標(biāo)。

采納磺基水楊酸提取植物體內(nèi)的游離脯氨酸,不僅大大削減了其他氨基酸的干擾,快速簡便,而且不受樣品狀態(tài)干或鮮樣限制。

在酸性條件下,脯氨酸與茚三***反應(yīng)生成穩(wěn)定的紅色縮合物,用甲苯萃取后,此縮合物在波長520處有一最大汲取峰。

脯氨酸濃度的凹凸在肯定范圍內(nèi)與其消光度成正比。

二試驗材料、儀器設(shè)備及試劑1材料植物葉片2儀器設(shè)備分光光度計,恒溫水浴鍋,漏斗,具塞刻度試管20,移液槍1和5,5和1刻度試管,燒杯,吸水紙,玻璃棒,試管架,比色皿等。

3試劑13%磺基水楊酸溶液:萬分之一電子天平稱取3磺基水楊酸,然后將稱好藥品溶于100蒸餾水中。

2甲苯3%酸性茚三***顯色液:冰乙酸和6-磷酸以3:2混合,作為溶劑進行配制,此液在4℃下2~3天有效此步驟重要。

***放入燒杯中用混合液50放入70℃水浴鍋中溶解,冷卻。

.專業(yè)可編輯4脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:精確?????稱取25脯氨酸,用蒸餾水溶解后定容至250,其濃度為100。

再取此液10,用蒸餾水稀釋至100,即成10的脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。

1取7支具塞刻度試管按表2加入各試劑。

混勻后加玻璃球塞,在沸水中加熱40。

.***顯色液3333333脯氨酸含量μ02481216202取出冷卻后向各管加入5甲苯充分振蕩,以萃取紅色物質(zhì)。

靜置待分層后吸取甲苯層以0號管作為對比在波長520下比色。

3以消光值為縱坐標(biāo),脯氨酸含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求線性回歸方程。

.專業(yè)可編輯2樣品測定1脯氨酸提取:從-80℃冰箱中取出樣品,放入事先裝好液氮的保溫桶中。

,分別置于大試管中,加入5%磺基水楊酸溶液3,管口加蓋玻璃球,于沸水浴中浸提10。

2取出試管,待冷卻至室溫后,吸取上清液2,加2冰乙酸和3顯色液,于沸水浴中加熱40,下步操作按標(biāo)準(zhǔn)曲線制做方法進行甲苯萃取和比色向各管加入5甲苯充分振蕩,以萃取紅色物質(zhì)。

靜置待分層后吸取甲苯層以0號管作為對比在波長520下比色。

3結(jié)果計算:從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出測定液中脯氨酸濃度脯氨酸含量的百分?jǐn)?shù)。

脯氨酸[-1干或鮮重]=-1式中:一提取液中脯氨酸濃度,由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得:-提取液總體積測定時所吸取得體積樣品重.專業(yè)可編輯數(shù)據(jù)統(tǒng)計表提取液中脯氨測定時所吸取標(biāo)準(zhǔn)曲提取液總體積樣品重脯氨酸含量海拔處理編號吸光度稀釋倍數(shù)酸含量的體積平均值線斜率\5125**5235246116126133600614--1