小柴胡顆粒質(zhì)量標準的研究

小柴胡顆粒質(zhì)量標準的研究

小柴胡是中藥口服制劑，由黃鼠狼、柴胡、甘草、黨參等藥物制成。具有解表解熱、疏肝健胃的功效。它通常用于感冒、胸痛、腰痛、易怒、嘔吐、口苦、喉嚨干燥等疾病。它是衛(wèi)生部組織的藥物標準（中藥方劑成分ws3-b-1498-93）。原始標準中只有一個點和一個測試點。為有效控制其制劑質(zhì)量,采用HPLC法測定了黃芩中黃芩苷的含量,并對黃芩、,柴胡和甘草進行了薄層鑒別。1小柴胡顆粒及對照藥材高效液相色譜儀:島津LC-10ADVP泵;SPD-M10AVP二極管陣列檢測器;CLASS-VPLC色譜工作站。硅膠G(青島海洋化工廠生產(chǎn))。小柴胡顆粒(批號20021201,20021206,20021218)及處方中各味藥材由河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司提供。黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,0715-9909);甘草酸銨、柴胡對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供)。甲醇為色譜純,其它試劑試藥均為分析純。2方法和結(jié)果2.1胡蘿卜干的提取取本品10g,研細,加甲醇50mL,加熱回流1h,放冷,濾過,濾液蒸干,殘渣加水20mL使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用乙醚振搖提取3次(20,10,10mL),棄去乙醚液,水層用水飽和的正丁醇萃取3次(20,10,10mL),棄去水層,合并正丁醇層,加等體積氨試液,搖勻,放置分層,分取上層液,再加等體積正丁醇飽和的水洗滌1次,分取上層液蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材2g,加水30mL,加熱回流1.5h,放冷,濾過,濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,同上法制成對照藥材溶液。再取按處方工藝制成的不含柴胡的樣品,同法制成陰性對照液。吸取上述三種溶液各10μL,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-水(30∶8∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以含4%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯一個相同顏色的斑點,陰性對照液無干擾。2.2氯化鐵乙醇溶液的制備取本品10g,加甲醇50mL,加熱回流1h,放冷,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇2mL使溶解,作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作為對照品溶液。再取按處方工藝制成的不含黃芩的樣品,同法制成陰性對照液。吸取上述三種溶液各5μL,分別點于同一以含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照液無干擾。2.3正丁醇-冰醋酸-水5.2%取本品5g,研細,加水30mL,加熱回流30min,放冷,濾過,濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用水飽和正丁醇萃取2次,每次20mL,合并提取液,用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次30mL,棄去水層,分取正丁醇層,蒸干,殘渣加甲醇2mL使溶解,作為供試品溶液。另取甘草酸銨對照品,加甲醇制成每1mL含2mg的溶液,作為對照品溶液。再取按處方工藝制成的不含甘草的樣品,同法制成陰性對照液。吸取上述三種溶液各5μL,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上,以正丁醇-冰醋酸-水(6∶1∶3)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照液無干擾。2.4黃鼠的含量2.4.1流動相-冰醋酸柱色譜柱為USAAgilentZORBAXSB-C18柱(規(guī)格4.6mm×150mm,5μm);甲醇-水-冰醋酸(46∶54∶1)為流動相;檢測波長為277nm;流速1.0mL·min-1;柱溫:室溫。2.4.2超聲處理法取小柴胡顆粒適量,研細,精密稱取約0.8g,置50mL量瓶中,加50%甲醇適量,超聲處理20min使溶解,放置至室溫,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液5mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。2.4.3揮發(fā)油的提取精密稱取黃芩苷對照品約10mg,置25mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密吸取1mL至25mL容量瓶中,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(每1mL溶液中含黃芩苷15μg)。2.4.4準分離主溶液的制備取按處方比例及生產(chǎn)工藝制備的不含黃芩原藥材的小柴胡顆粒,按供試品溶液的制備同法操作即得。2.4.5標準曲線的繪制將濃度為2.978、5.956、9.4976、14.89、29.78、59.56、119.12μg·mL-1的對照品溶液分別吸取20μL注入HPLC,以進樣量(μg)為橫坐標,峰面積積分值A為縱坐標,繪制標準曲線,回歸方程為Y=86686333X-9891.5,r=0.99995(n=7)。試驗表明,黃芩苷對照品在0.05956～2.3824μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4.6儀器性能檢測精密吸取黃芩苷對照品溶液與某一供試品溶液各20μL重復進樣5次,測定峰面積積分值,對照品峰面積積分值的RSD為0.16%,供試品峰面積積分值的RSD為0.74%,說明儀器性能良好。2.4.7穩(wěn)定性試驗取同一對照品溶液與同一供試品溶液,分別在0,4,8,24,30h進樣測定,黃芩苷對照品峰面積積分值的RSD為0.16%,供試品黃芩苷峰面積積分值的RSD為0.42%,說明黃芩苷至少在30h內(nèi)穩(wěn)定。2.4.8總黃酮含量測定結(jié)果取同一批供試品按樣品測定項下方法操作,測定,計算含量。同一批供試品5次測定的黃芩苷平均含量為1.9440mg/g,RSD為:0.73%。說明方法重復性良好。2.4.9加樣回收率采用加樣回收試驗,取已知含量的同一批供試品各5份,精密稱定,分別精密添加一定量的黃芩苷對照品,按供試品制備所述方法測定含量(同時測定樣品含量),計算回收率。5次測定的平均回收率為99.88%,RSD為0.76%。結(jié)果見表1。4.4.10樣品測定取樣品3批,依法測定含量,結(jié)果見表2。3提取溶劑的選擇柴胡薄層色譜供試液的制備,是通過乙醚反復萃取以除去脂溶性雜質(zhì),再以氨試液洗滌以進一步除去雜質(zhì)。實驗證明,省