外源性化學(xué)刺激物誘導(dǎo)的balbc小鼠炎癥性腸病模型的比較研究

外源性化學(xué)刺激物誘導(dǎo)的balbc小鼠炎癥性腸病模型的比較研究

0外源性化學(xué)刺激物balb/c小鼠izact的制備炎癥性腸?。╥bd）是一種非特異性胃腸道疾病，包括克羅恩?。╟d）和潰瘍性胃炎（iu）。這種疾病是全球的，也是嚴(yán)重危害中國(guó)人民健康的疾病。近年來，它的發(fā)病率逐年上升。到目前為止，我不知道為什么imd的病因是如此。在這種疾病中，有免疫因素和各種炎癥因素的參與。目前，臨床上主要用于水楊酸制劑、皮質(zhì)素酸鹽和免疫抑制劑，但效果不令人滿意，長(zhǎng)期使用導(dǎo)致許多副作用。因此，建立理想的動(dòng)物模型對(duì)澄清病因、發(fā)病機(jī)制和觀察藥物的有效性具有重要意義。由于imd的病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，因此很難建立理想的動(dòng)物模型。外部化學(xué)試劑的誘導(dǎo)老鼠腸粘膜產(chǎn)生免疫反應(yīng)，建立批判的動(dòng)物模型是一種常見的方法。為了本研究中使用最小三硝基苯磺酸（2、4、6-環(huán)己二醇磺酸（tnbs）、葡萄糖硫酸鈉（sds）和惡唑酮（oxazolon）的外源性化學(xué)激物。建立了三個(gè)balb模式的模型balb。對(duì)于c個(gè)人化學(xué)，我們需要對(duì)該方法進(jìn)行全面的探討，并選擇相應(yīng)的cd和lc動(dòng)物模型。1材料和方法1.1動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)和模型動(dòng)物選用6-8wkSPF級(jí)BALB/C早小鼠,體質(zhì)量約20-25g,由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供.惡唑酮、TNBS、DSS(Mr5000)均由Sigma公司提供.1.2小鼠的術(shù)后處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理取50只小鼠隨機(jī)分為5組,分別為惡唑酮組、TNBS組、DSS組、A對(duì)照組、B對(duì)照組,每組10只.實(shí)驗(yàn)前5d30g/L惡唑酮無水乙醇溶液0.15mL涂抹惡唑酮組小鼠腹部皮膚暴露部位,范圍2cm×2cm.實(shí)驗(yàn)前24h,惡唑酮組、TNBS組、A對(duì)照組小鼠禁食(不禁水),先用50g/L水合氯醛0.15mL腹腔注射使小鼠輕度麻醉,約25min以后用套接了小號(hào)導(dǎo)尿管的1mL注射器抽吸藥液,從肛門將導(dǎo)尿管緩慢插入約3.5cm,然后將藥液緩慢注入,停20s后抽出導(dǎo)尿管,再將小鼠倒懸約30s后放入盒中.惡唑酮組灌注10g/L惡唑酮500mL/L乙醇溶液0.15mL,TNBS組灌注20g/LTNBS500mL/L乙醇溶液0.1mL,A對(duì)照組灌注500mL/L乙醇溶液0.15mL.DSS組、B對(duì)照組小鼠實(shí)驗(yàn)當(dāng)天早晨開始自由飲液,DSS組小鼠飲用液體為5g/LDSS蒸餾水溶液,B對(duì)照組小鼠飲用液體為蒸餾水,連續(xù)7d.實(shí)驗(yàn)第8d處死全部小鼠,大體觀察腸壁,分離結(jié)腸,沿腸系膜緣剪開腸腔,生理鹽水沖洗糞便,留取結(jié)腸標(biāo)本,40g/L甲醛固定,行病理切片,蘇木精-伊紅染色檢查.觀察指標(biāo)為疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)、病理組織學(xué)計(jì)分,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1、2.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有計(jì)算均用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件來完成,數(shù)據(jù)用mean±SD表述,各組數(shù)據(jù)之間的比較采用t檢驗(yàn).2結(jié)果2.1小鼠血便特征結(jié)果惡唑酮組、TNBS組、DSS組小鼠分別于第2、3d開始全部出現(xiàn)稀便及明顯體質(zhì)量下降,其中惡唑酮組4只小鼠出現(xiàn)血便,4只小鼠便潛血陽性;TNBS組7只小鼠出現(xiàn)血便,3只小鼠便潛血陽性;DSS組3只小鼠出現(xiàn)血便,5只小鼠便潛血陽性.A對(duì)照組小鼠第1d便開始出現(xiàn)松散便或稀便,但第7d大便已基本正常,其中5只小鼠體質(zhì)量稍下降.B對(duì)照組小鼠僅有2只出現(xiàn)體質(zhì)量稍下降.各組小鼠DAI評(píng)分見表3.2.2tnbs對(duì)小鼠病變的影響DSS組小鼠黏膜病變從肛門側(cè)自下向上連續(xù)性發(fā)展,逐漸減輕,直腸最為嚴(yán)重,近端結(jié)腸幾乎正常,病變部黏膜呈中、重度充血水腫,散在糜爛、淺潰瘍.TNBS組小鼠病變以結(jié)腸末端為主,但可達(dá)近端結(jié)腸,2只小鼠病變達(dá)末端小腸,病變部黏膜呈充血水腫,糜爛、壞死,多發(fā)潰瘍,潰瘍深大,壞死嚴(yán)重,腸腔狹窄.A、B對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜基本正常.2.3小鼠黏膜、黏膜染色惡唑酮組、DSS組小鼠黏膜均見中、重度充血水腫,淺潰瘍,僅1例惡唑酮組小鼠潰瘍達(dá)肌層,惡唑酮組小鼠黏膜、黏膜下層以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主,而DSS組小鼠黏膜、黏膜下層以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主.TNBS組小鼠黏膜充血水腫,上皮脫落、壞死,潰瘍形成,部分潰瘍達(dá)漿膜層,黏膜、黏膜下層以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主.A對(duì)照組4例出現(xiàn)黏膜、黏膜下層輕度細(xì)胞浸潤(rùn).B對(duì)照組僅2例小鼠出現(xiàn)黏膜、黏膜下層輕度細(xì)胞侵浸潤(rùn).各組小鼠病理計(jì)分見表4.3實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷幕钚猿煞諭BD的許多研究成果來源于IBD動(dòng)物模型,因而構(gòu)建合適的IBD動(dòng)物模型對(duì)IBD的研究非常重要.目前,建立IBD動(dòng)物模型的方法主要有4種:第1種是某些動(dòng)物可自然發(fā)生腸道黏膜炎癥,此類模型的存在提示炎癥性腸病的發(fā)生可能與某些基因特征有關(guān);第2種是通過基因敲除及轉(zhuǎn)基因技術(shù)誘導(dǎo)的模型,此模型可從基因水平闡明腸道炎癥的免疫發(fā)病機(jī)制;第3種是用異體結(jié)腸黏膜等作為抗原刺激造成慢性免疫性炎癥;第4種是通過外源性化學(xué)刺激物而誘發(fā)的模型,其中第4種方式應(yīng)用的較為普遍,而近年來應(yīng)用較多的用來誘導(dǎo)IBD動(dòng)物模型的化學(xué)刺激物是惡唑酮、TNBS及DSS.惡唑酮是一種半抗原,應(yīng)用其誘導(dǎo)IBD動(dòng)物模型時(shí),通過皮膚先致敏再灌腸給藥,較直接灌腸給藥能更好地模擬出IBD動(dòng)物模型,本實(shí)驗(yàn)即先予30g/L惡唑酮無水乙醇溶液0.15mL涂抹小鼠皮膚暴露部位,再予10g/L惡唑酮500mL/L乙醇溶液0.15mL灌腸,小鼠第2d迅速發(fā)病,臨床及病理表現(xiàn)均與UC相似.DSS是由蔗糖合成的一種硫酸多糖體,具有和肝素一樣的抗止血和抗凝血作用,其誘導(dǎo)的動(dòng)物模型被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)性IBD研究.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用50g/LDSS蒸餾水溶液,給小鼠自由飲用,連續(xù)7d,出現(xiàn)遠(yuǎn)端結(jié)腸急性炎癥表現(xiàn),病理及臨床表現(xiàn)與UC相似,說明DSS誘導(dǎo)的動(dòng)物模型適合UC的研究.TNBS誘導(dǎo)的IBD動(dòng)物模型具有CD的特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)TNBS組小鼠結(jié)腸病理可見黏膜充血水腫,糜爛、壞死,多發(fā)潰瘍,潰瘍深大,部分潰瘍達(dá)漿膜層,壞死嚴(yán)重,腸腔狹窄,病變可達(dá)小腸末端.惡唑酮、DSS及TNBS誘導(dǎo)IBD動(dòng)物模型的機(jī)制未完全闡明.大量證據(jù)顯示Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞的平衡失調(diào)可能與IBD的發(fā)病相關(guān).Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ(IFN-γ)、白介素-2(1L-2);Th2細(xì)胞主要分泌白介素-4(IL-4)、白介素-5(1L-5).Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子相互調(diào)節(jié)對(duì)方的生長(zhǎng)分化,從而維持Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞之間的平衡,