臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)

臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)重點(diǎn)：末梢血采集方法和血涂片制備技術(shù)。難點(diǎn)：各種抗凝劑的優(yōu)缺點(diǎn)和使用選擇。

1精選課件緒論一、臨床檢驗(yàn)（clinicallaboratorytechnologyorscience）又稱實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，就是通過(guò)實(shí)驗(yàn)室的各種檢查方法，包括感官檢查、理學(xué)檢查、化學(xué)檢查、顯微鏡檢查以及自動(dòng)化儀器檢查等，對(duì)病人的血液、體液、分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行檢查、分析，以獲得病原、病理變化及臟器功能狀態(tài)等資料。2精選課件二、臨床檢驗(yàn)在醫(yī)學(xué)中的作用

1、為準(zhǔn)確診斷、及時(shí)治療提供依據(jù)臨床檢驗(yàn)的結(jié)果是支持診斷、鑒別診斷、甚至確定診斷的主要依據(jù)。例：anemia依據(jù)：血中紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少leukemia依據(jù)：血象和骨髓象腎臟有實(shí)質(zhì)性損傷的依據(jù)尿液中出現(xiàn)蛋白、細(xì)胞管型問(wèn)：tumor？3精選課件2、為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)在疾病過(guò)程中，血液、體液、分泌物和排泄物也會(huì)隨之發(fā)生相應(yīng)的變化3、為預(yù)防疾病提供資料如血象和腫瘤細(xì)胞學(xué)的普查等4精選課件三、臨床檢驗(yàn)的一般方法1、目視檢查直接觀察標(biāo)本：顏色、透明度、性狀，有無(wú)凝塊或寄生蟲(chóng)2、理學(xué)檢查液體的相對(duì)密度、血液比粘度、紅細(xì)胞沉降率、紅細(xì)胞比積等病理變化3、化學(xué)檢查定性和定量檢測(cè)標(biāo)本化學(xué)成分的病理變化4、顯微鏡檢查觀察有型成分的數(shù)量和形態(tài)5、自動(dòng)化儀器檢查電子技術(shù)、程序控制的發(fā)展5精選課件四、學(xué)習(xí)臨床檢驗(yàn)的目的和要求1、理論聯(lián)系實(shí)踐2、操作要求3、檢驗(yàn)結(jié)果必須和臨床表現(xiàn)結(jié)合4、檢驗(yàn)人員的醫(yī)德6精選課件第一章一般性操作技術(shù)血液學(xué)檢查：反應(yīng)造血系統(tǒng)本身、機(jī)體全身或局部病變有助于疾病的診斷及療效、預(yù)后的觀察只能反應(yīng)疾病某一方面的情況，不能認(rèn)為是病程的全部反應(yīng)；不同個(gè)體，對(duì)同一影響有不同的反應(yīng)，或也可對(duì)不同影響產(chǎn)生相同的反應(yīng)7精選課件一、血液標(biāo)本的采集1、毛細(xì)血管采血法部位：中指或無(wú)名指尖內(nèi)側(cè)，半歲以下拇指或足部，特殊人員視情況而定。b.所用器材：采血針、吸管c.采血步驟及注意事項(xiàng)8精選課件2、靜脈采血法部位：主要是肘靜脈。還可以在：手背部手腕部等幼兒可采用頸外靜脈采血。采血器材：一次性注射器，檢驗(yàn)用真空定量采血裝置c.采血步驟及注意事項(xiàng)9精選課件兩種采血方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較毛細(xì)血管靜脈血缺點(diǎn)限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點(diǎn)價(jià)廉、快速、操作簡(jiǎn)便，標(biāo)本可直接測(cè)定標(biāo)本代表性大，無(wú)組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加其他實(shí)驗(yàn)10精選課件二、常用血液標(biāo)本抗凝劑

及其使用選擇1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）a.抗凝原理：螯合鈣離子使用方法配成109mmol/L的濃度和血液1：9106mmol/L的濃度和血液1：4化學(xué)名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c.適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性小）11精選課件2.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b.使用方法草酸鈉0.1mol/L和血液1：9c.適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)12精選課件3.雙草酸鹽抗凝劑a.抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g,草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10（80°C以下烘干）適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)）不適于血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)13精選課件4.肝素（含硫酸基團(tuán)的粘多糖）抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)。

b.適用方法：1g/L濃度的肝素鈉與血液1：1014精選課件優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析15精選課件5.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：螯合鈣離子b.使用方法：15g/L濃度EDTA和血液1：10適用范圍：對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響小---血小板計(jì)數(shù)；影響血小板聚集和白細(xì)胞吞噬功能

---不易做止血學(xué)檢驗(yàn)及血小板功能檢驗(yàn)。

16精選課件物理方法抗凝：

脫纖維蛋白：將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑性狼瘡細(xì)胞檢查。17精選課件三、血涂片的制備技術(shù)血涂片的用途：血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、網(wǎng)織紅、異常

寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)。2.血涂片制備步驟：（手工推片法）18精選課件將推玻片向1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動(dòng)。19精選課件3.血涂片質(zhì)量評(píng)價(jià)：均勻、厚薄、頭體尾、邊緣、兩側(cè)注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚20精選課件21精選課件四、細(xì)胞染色技術(shù)

染料---生物學(xué)染色劑：將生物組織細(xì)胞和病原體染色，在顯微鏡下觀察結(jié)構(gòu)。（一）、染料（天然染料和人工染料）發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。22精選課件堿性染料：為陽(yáng)離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。3.復(fù)合染料：同時(shí)具有陰、陽(yáng)離子型的染料如瑞氏染料23精選課件（二）、細(xì)胞染色原理：一般以它們的物理現(xiàn)象和/或化學(xué)現(xiàn)象為依據(jù)1.物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：

a.

染料的化學(xué)成分：助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽(yáng)離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。24精選課件b.蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)，-NH2獲得一個(gè)H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個(gè)H+變成帶負(fù)電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。c.周?chē)h(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI（pI為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，pH＞pI，則結(jié)合堿性染料。25精選課件（三）、細(xì)胞染色法的類型1.普通染色法：經(jīng)物理和/或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合2.熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡3.細(xì)胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等4.細(xì)胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分。細(xì)胞免疫化學(xué)染色法（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)）

26精選課件五、瑞氏染色法（一）、染色原理分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青B與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲(chóng)的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。27精選課件（二）、試劑1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇：有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀等結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞與染料接觸表面積，提高對(duì)染料的吸附作用，增強(qiáng)染色效果。磷酸鹽緩沖液（PBS）：磷酸二氫鉀（無(wú)水）0.3g，磷酸氫二鈉（無(wú)水）0.2g,蒸餾水加到1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。28精選課件染色方法：

a.用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。

b.加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。

c.滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10分鐘。

d.用清水沖洗，待干后鏡檢。29精選課件注意事項(xiàng)：

a.

血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落

b.

染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時(shí)間長(zhǎng)些效果好。

c.

染液不能過(guò)少，以防蒸發(fā)沉淀。

d.

沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沉著。沖洗時(shí)間也不能長(zhǎng)。

e.

染色過(guò)淡，可復(fù)染。

f.

染色過(guò)深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色30精選