遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

蠶豆微核設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)姓名：陳婷班級(jí)：生物技術(shù)0911組別：第六組一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?）了解微核測(cè)試的原理和毒理遺傳學(xué)在實(shí)際生活與工作中的應(yīng)用范圍及意義。2）學(xué)習(xí)蠶豆根尖的微核測(cè)試技術(shù)。尋找新的測(cè)試系統(tǒng)或測(cè)定更多的環(huán)境因素。二、實(shí)驗(yàn)原理微核簡(jiǎn)稱MCN，是真核生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，往往是細(xì)胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生。在細(xì)胞間期微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外，大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產(chǎn)生的，但有些實(shí)驗(yàn)也證明整條的染色體或多條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細(xì)胞分裂末期被兩個(gè)子細(xì)胞核所排斥便形成了第三核塊。已經(jīng)證實(shí)微核率的大小是和用藥的劑量或輻射積累效應(yīng)呈正相關(guān)，這一點(diǎn)和染色體畸變情況一樣，所以可用簡(jiǎn)易的間期微核數(shù)來代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。三、實(shí)驗(yàn)思路香煙及其燃燒物中含有多種致癌物質(zhì)和致癌前體物質(zhì)，通過收集，這些致突變物主要存在于水溶液中，流行病學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)都證實(shí)了這些物質(zhì)可引起遺傳物質(zhì)損傷。蠶豆根尖細(xì)胞微核技術(shù)是目前證實(shí)遺傳物質(zhì)損傷的快速、有效的方法。因此，我們選擇用煙頭浸出液為誘變劑。據(jù)俄《消息報(bào)》報(bào)道，科研人員發(fā)現(xiàn)，制作發(fā)酵食品時(shí)所使用的乳酸菌能夠釋放出蛋白酶，分解部分誘變劑的特定蛋白。乳酸菌在發(fā)酵時(shí)會(huì)合成乳酸，這種物質(zhì)可抑制多種誘變劑的活性。乳酸菌還能直接與部分誘變劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使后者失去誘變能力。所以，我們選擇了取材方便且富含乳酸菌的酸奶作為拮抗劑，來驗(yàn)證其功能。四、實(shí)驗(yàn)材料顯微鏡、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、固定液、改良苯酚品紅、蠶豆、煙頭浸出液（紅山茶<焦油含量：12mg/根）、酸奶（味全<原味>）五、實(shí)驗(yàn)步驟將蠶豆放入盛有蒸餾水的燒杯中，25℃浸泡24h。種子吸漲后放入加有棉花的培養(yǎng)基中催芽，24h左右。將20根煙頭處理后加至100ml蒸餾水于水浴鍋60°處理1h，得20/100的濃度煙頭浸出液。再分別稀釋后得到20/400,20/600,20/800,20/1000濃度的浸出液，每個(gè)濃度中投入三個(gè)長(zhǎng)勢(shì)相同蠶豆，培養(yǎng)箱中進(jìn)行誘變6h。另配三組20/600濃度的浸出液，分別滴加2滴，5滴，8滴酸奶作為拮抗組，同上訴誘變組一同培養(yǎng)。另加一組空白對(duì)照。將處理后的種子用蒸餾水浸洗三次，再將種子放入鋪好棉花的培養(yǎng)皿中在25℃的培養(yǎng)箱中恢復(fù)培養(yǎng)24h。將恢復(fù)后的種子根尖切下，放入卡納氏固定液中進(jìn)行固定。常規(guī)制片及鏡檢。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及圖片（圖片見附頁）每組濃度的三個(gè)制片，我們分別令三名同學(xué)分別計(jì)數(shù)，將計(jì)得的數(shù)據(jù)進(jìn)行取平均數(shù)，得到視野微核的千分率。如表所示，煙頭浸出液的濃度與微核率大致呈正比關(guān)系。七、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析與討論由于培養(yǎng)箱是共用的，不排除其他組的其他試劑通過紗布滴水，或是蒸發(fā)等途徑，間接污染本小組實(shí)驗(yàn)梯度，以造成部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有所偏差。本實(shí)驗(yàn)使用酸奶作為拮抗的機(jī)理是酸奶中富含乳酸菌，它能夠釋放出蛋白酶，分解部分誘變劑的特定蛋白，而且乳酸菌在發(fā)酵時(shí)會(huì)合成乳酸，這種物質(zhì)可抑制多種誘變劑的活性。乳酸菌還能直接與部分誘變劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使后者失去誘變能力。但本實(shí)驗(yàn)的煙草浸出液與其發(fā)生反應(yīng)的機(jī)制還不確定，有待進(jìn)一步探索。酸奶成分太過復(fù)雜，本次實(shí)驗(yàn)并未進(jìn)一步研究是其中的乳酸還是各種益生菌群起拮抗作用，可將乳酸和乳酸菌懸液分別進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行探索性研究。本組實(shí)驗(yàn)的誘變劑濃度是根據(jù)資料進(jìn)行決定的，經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)的分析，我們?cè)?0/600處滴加不同程度的酸奶量，以此來分析在不同濃度的拮抗劑下與未加拮抗劑的組別進(jìn)行對(duì)照和分析。根據(jù)拮抗組數(shù)據(jù)可以看出，生長(zhǎng)環(huán)境的ph對(duì)微核也有影響，酸奶的滴加量應(yīng)控制在5滴左右是較合適的，過酸或太少都不能促進(jìn)其拮抗作用。但是具體的分析還得對(duì)酸奶濃度進(jìn)行系統(tǒng)的規(guī)劃和測(cè)定后才能準(zhǔn)確定位，這也是本實(shí)驗(yàn)的不足之處。最后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，也存在不足，微核數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)有一定的人為觀察的影響，也與每個(gè)根尖的生長(zhǎng)狀況有關(guān)，本組僅僅是取了數(shù)據(jù)的平均數(shù)，并未對(duì)實(shí)驗(yàn)整體進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的估定，因此實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有誤差。八、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)蠶豆浸泡24h過程中，應(yīng)適當(dāng)換水兩次，在催芽培養(yǎng)過程中也要記得換水，大致長(zhǎng)到2mm左右就可以進(jìn)行下步誘變了，避免誘變過程中根尖過長(zhǎng)過老影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。誘變處理過程中記錄好濃度梯度的數(shù)據(jù)，科學(xué)有序的進(jìn)行。滴加拮抗劑時(shí)應(yīng)注意生長(zhǎng)環(huán)境的ph，保證其生長(zhǎng)力。誘變之后的蠶豆根尖必須進(jìn)行恢復(fù)培養(yǎng)。固定過程中的卡納氏固定液是現(xiàn)配現(xiàn)用的。制片鏡檢過程中，滴加染液的同時(shí)要將根尖搗碎，保證染色的成功，壓片時(shí)，盡量平整，減少氣泡?？茖W(xué)合理的對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析討論。九、實(shí)驗(yàn)心得第一次做遺傳學(xué)這樣大的設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，實(shí)話說，很有趣，很有挑戰(zhàn)性。大家一組六個(gè)同學(xué)，在實(shí)驗(yàn)中，分享、分析自己對(duì)實(shí)驗(yàn)的看法，共同對(duì)實(shí)驗(yàn)的方案進(jìn)行設(shè)計(jì)、討論，這種過程就是我們平時(shí)的學(xué)習(xí)或者是實(shí)驗(yàn)都體會(huì)不到的。也許老師您第一次提及這設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候我們都是比較擔(dān)憂的心態(tài)，可是真正投入了進(jìn)去之后，我們小組的所有成員都是可以非常自豪自信地說一句：我們成功了。從開始挑豆子開始，我們每一個(gè)人都全身心的付出了自己的那份力量，大家分工合作，有條不紊的進(jìn)行，我們組做了兩次預(yù)實(shí)驗(yàn)和一次單獨(dú)的正式實(shí)驗(yàn)，可以說是所有實(shí)驗(yàn)組