鴨病毒性肝炎的流行病學(xué)、癥狀與防治

鴨病毒性肝炎的流行病學(xué)、癥狀與防治

1945年，美國首次發(fā)現(xiàn)鴨子病毒性肝炎（dap-iii），并于1953年傳播到世界各地。這是鴨子的急性致命感染。該病的特征是發(fā)病急,傳播迅速,死亡率高,主要感染5周齡以內(nèi)的小鴨,以2周齡內(nèi)的雛鴨最易感,對新生鴨的發(fā)病率高達(dá)100%,死亡率90%以上。近幾年來,該病在浙江省養(yǎng)鴨地區(qū)的發(fā)生率呈上升趨勢。現(xiàn)將鴨肝炎病毒Ⅰ型的分離及其雞胚適應(yīng)性的試驗(yàn)結(jié)果介紹如下。1材料和方法1.1鴨水魚鴨致病性阿拉克氏體的dhv-油乳劑滅活苗10日齡非免疫雞胚(杭州市蛋雞試驗(yàn)場提供),2日齡無DHV母源抗體的雛鴨,鴨病毒性肝炎-Ⅰ油乳劑滅活苗(浙江省農(nóng)科院惠贈(zèng))等。1.2鴨的免疫治療鴨病毒性肝炎-Ⅰ油乳劑滅活苗免疫100日齡麻鴨,1周后加強(qiáng)免疫1次,于最后一次接種2周后無菌采血,4000r/min離心15min分離血清,-20℃保存?zhèn)溆谩?.3凍融法制備液、法取典型病鴨的肝臟、腦組織剪碎,按1∶5的比例加入無菌生理鹽水(0.85%NaCl溶液,pH值6.8),在研缽中研磨后制成懸液,反復(fù)凍融3次,加入雙抗(青霉素、鏈霉素各2000IU/mL),置4℃過夜,6000r/min離心30min,取上清液,用0.45μm的細(xì)菌濾器過濾,-20℃保存?zhèn)溆谩?.4培養(yǎng)雞胚的工藝條件將上清液接種20枚10日齡雞胚的尿囊腔,0.2mL/個(gè),置37℃條件下培養(yǎng),棄去24h內(nèi)死亡的雞胚;以后每12h觀察1次,收集24h以后死亡雞胚的尿囊液,連續(xù)傳代5次(F1、F2、F3、F4、F5),記錄雞胚每次傳代的死亡時(shí)間和主要病理變化。1.5ld50的計(jì)算2日齡肉鴨30只,隨機(jī)分成6組,每組5只,F1和F5代尿囊液分別作10倍遞進(jìn)稀釋,每只肌肉注射0.1mL,記錄48h內(nèi)的死亡數(shù),用Spearman-Karber法計(jì)算LD50,lgLD50=L+d(S-0.5)(L為病毒的最低稀釋倍數(shù),d為組距,S為死亡數(shù)比值之和)。1.6ld50的計(jì)算將F5代尿囊液稀釋為200×LD50,與等量遞進(jìn)稀釋的待檢血清混合,37℃作用1h后,每一稀釋度接種4只2日齡的肉鴨,記錄72h內(nèi)每組肉鴨的存活數(shù)和死亡數(shù),用Spearman-Karber法計(jì)算lgPD50=L+d(S-0.5)(L為病毒的最低稀釋倍數(shù),d為組距,S為存活數(shù)比值之和)。1.7tf代尿囊液原液的制備2日齡的肉鴨分成4組,每組3只。試驗(yàn)組3組分別肌肉注射經(jīng)不同溫度(56,62,68℃)作用30min后的F5代尿囊液原液(0.1mL/羽);對照組鴨肌肉注射生理鹽水(0.1mL/羽),記錄肉鴨存活數(shù)和死亡數(shù)。1.8肌肉注射含有甲醛濃度的鹽水2日齡的肉鴨分成組7組,每組3只。試驗(yàn)組(1～3組)分別肌肉注射用不同甲醛濃度(0.1%、0.2%、0.4%)37℃作用30min后的F5代尿囊液原液(0.1mL/羽);對照組(4～6組)肌肉注射含有不同甲醛濃度的生理鹽水(0.1mL/羽);對照組(第7組)肌肉注射未經(jīng)處理的F5代尿囊液原液(0.1mL/羽),記錄肉鴨存活數(shù)和死亡數(shù)。2結(jié)果2.1亡時(shí)間延長隨著傳代次數(shù)的增加,DHV-Ⅰ逐漸適應(yīng)雞胚,雞胚的死亡時(shí)間縮短,而且死亡時(shí)間趨于一致(見表1)。雞胚在病毒連續(xù)傳代(Ⅰ～Ⅴ代)中的主要病理變化包括肝臟壞死、腫大、出血,腎臟出血,腦膜水腫、出血等(見表2)。2.2fps病毒的毒價(jià)根據(jù)表3結(jié)果,計(jì)算得到F1代病毒的毒價(jià)為104.7LD50/mL,F5代病毒的毒價(jià)為104.1LD50/mL。病死鴨表現(xiàn)為角弓反張,病理變化為肝臟出血,膽囊腫大,腎臟有尿酸鹽沉積。2.3中和試驗(yàn)見表4根據(jù)表4結(jié)果,計(jì)算血清的中和價(jià)為100.5PD50/mL。2.4接種后7d煤鴨病毒死亡56℃作用30min后,接種雛鴨死亡1只,表明仍有部分病毒存活,而62,68℃作用30min,接種后雛鴨均存活,表明病毒全部滅活。2.5甲醛對雞的致病性表6顯示,經(jīng)0.1%、0.2%的甲醛濃度作用后的尿囊液接種,雛鴨均死亡,表明病毒對該濃度甲醛具有一定的耐受性;而試驗(yàn)3組加入0.4%的甲醛,使病毒的毒力顯著下降;從對照組的結(jié)果分析,2日齡的肉鴨不能完全耐受過高濃度的甲醛,導(dǎo)致肉鴨死亡。3雞胚連續(xù)傳代用雞胚分離DHV-Ⅰ時(shí),主要病變集中在肝臟、腎臟和腦膜,但腎臟出血,腦膜水腫、出血等癥狀鮮見報(bào)道。同時(shí)DHV-Ⅰ在約經(jīng)過5～6次傳代后,在雞胚中的生長已基本適應(yīng),對雞胚的致死率增加,但病毒感染本動(dòng)物的能力隨著傳代次數(shù)增加而逐漸下降,與其他學(xué)者的研究結(jié)果基本一致。通過雞胚連續(xù)傳代的方法,使I型DHV逐漸失去對雛鴨的致死性和致病力,可以用于弱毒疫苗的開發(fā)。有人報(bào)道,從北京地區(qū)分離的北京株經(jīng)傳至54代得到DHV-54,對雛鴨的致死力消失,但仍對雛鴨有致病力,使雛鴨產(chǎn)生典型的肝臟腫大、出血等病理變化,在第79代雞胚適應(yīng)毒(