確證化學(xué)結(jié)構(gòu)或組分研究資料撰寫的基本要求講課稿北京申報資料市公開課一等獎百校聯(lián)賽特等獎?wù)n件

確證化學(xué)結(jié)構(gòu)或組分研究

資料撰寫基本要求

---申報資料9第1頁申報資料格式和內(nèi)容

一.新藥化學(xué)結(jié)構(gòu)式、分子式及分子量二.供確認(rèn)化學(xué)結(jié)構(gòu)用供試品純度及檢驗純度方法三.確證化學(xué)結(jié)構(gòu)方法理化常數(shù)元素分析紫外吸收光譜紅外吸收光譜核磁共振氫譜核磁共振碳譜質(zhì)譜差熱分析X-射線衍射譜其它四.綜合解析五.參考文件

第2頁(一)結(jié)構(gòu)確證研究普通標(biāo)準(zhǔn)

和要求

1.結(jié)構(gòu)確證研究主要對象2.結(jié)構(gòu)確證研究基本方法3.結(jié)構(gòu)確證研究主要內(nèi)容4.結(jié)構(gòu)確證研究普通要求第3頁1.結(jié)構(gòu)確證研究主要對象

經(jīng)化學(xué)全合成或半合成、微生物發(fā)酵以及從動、植物中提取原料藥,包含新藥、進(jìn)口藥和已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品.第4頁按起源：

化學(xué)合成、半合成、天然產(chǎn)物中提取、發(fā)酵等;按組分：

單一組分、多組分混合物;按分子量：

小分子化合物、大分子化合物;按結(jié)構(gòu)特點：

成鹽化合物和非成鹽化合物、手性化合物和非手性化合物、含結(jié)晶水/溶劑和不含結(jié)晶水/溶劑等;第5頁2.結(jié)構(gòu)確證研究基本方法

①化學(xué)方法：理化分析、元素分析、化學(xué)關(guān)聯(lián)等②物理方法：波譜方法、衍射技術(shù)

a.射頻波、微波與物質(zhì)相互作用：核磁共振、電子順磁共振等b.紅外、可見、紫外光與物質(zhì)相互作用：紅外光譜、紫外光譜、拉曼光譜等c.X－射線與物質(zhì)相互作用：X－射線衍射等d.電子與物質(zhì)相互作用：質(zhì)譜、電鏡等e.其它：熱分析、原子吸收、原子發(fā)射等第6頁3.結(jié)構(gòu)確證研究主要內(nèi)容

①骨架結(jié)構(gòu)：

分子中各原子之間連接次序和方式;②構(gòu)型：

分子中各原子之間空間相對位置;③結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑：

與水、有機(jī)溶劑經(jīng)過氫鍵等結(jié)合;④晶型：

分子（或原子）在晶體中排列方式;

第7頁骨架結(jié)構(gòu)

例：氟嗎西尼第8頁

骨架結(jié)構(gòu)研究:a.單晶X－射線衍射;b.常規(guī)方法，如元素分析（或高分辨質(zhì)譜）、UV、IR、NMR（包含二維譜）、MS等組合;應(yīng)依據(jù)化合物骨架結(jié)構(gòu)特點及其復(fù)雜程度、有沒有對照品及參考文件，合理選取測試項目。第9頁

構(gòu)型

幾何構(gòu)型:雙鍵、環(huán)狀化合物，慣用順－反（cis－trans）或Z－E表示

例：西尼地平（±）-3-（2-甲氧基乙基）-5-[3-苯基-2（E）-丙烯基]-2,6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸酯第10頁

例：拉米夫定

(2R-順式)-4-氨基-1-(2-羥甲基-1，3-氧硫雜環(huán)戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮

第11頁

幾何構(gòu)型研究：理化性質(zhì)差異顯著

a.理化常數(shù)，比如熔點等;

b.氫譜、碳譜;

c.紅外光譜、紫外光譜等;第12頁

光學(xué)異構(gòu)：因為分子不對稱性引發(fā)，慣用D-L或R-S表示。

例：那格列奈（－）－N-（反-4-異丙基環(huán)基甲?；?D-苯丙氨酸第13頁例：前列腺素E1（1R，2R，3R）-3-羥基-2-[（E）-（3S）-3-羥基-1-辛烯基]-5-氧代環(huán)戊烷庚酸

第14頁

光學(xué)異構(gòu)研究：a.

比旋度測定b.手性柱色譜（HPLC、GC）c.

核磁共振（NMR）d.

單晶X—射線衍射（SXRD）e.

旋光光譜（ORD）f.

圓二色譜（CD）第15頁g.其它方法對照品法——依據(jù)對照品構(gòu)型推定化學(xué)關(guān)聯(lián)法——利用合成工藝分析

比如，左旋西替利嗪構(gòu)型確證：手性柱色譜定位（與對照品對比)、比旋度數(shù)據(jù)、光學(xué)純度分析第16頁

晶型研究:a.粉末X-射線衍射法b.紅外光譜法、拉曼光譜法c.熔點法d.熱分析e.光學(xué)顯微鏡法

第17頁無對照品和文件報道：

考查不一樣結(jié)晶條件下（溶劑、溫度、結(jié)晶速率等）制備樣品熔點、紅外光譜、粉末X－射線衍射等;

有對照品:

對比自制藥品與已上市藥品熔點、紅外光譜圖、粉末X－射線衍射圖譜等;有文件報道:

對文件資料進(jìn)行分析，選取能夠準(zhǔn)確反應(yīng)產(chǎn)品晶型測試項目;第18頁

結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑研究:

a.元素分析b.熱分析c.干燥失重、水分檢驗d.單晶X-射線衍射第19頁創(chuàng)新藥：

在干燥失重、水分測定研究基礎(chǔ)上，經(jīng)過熱分析、元素分析等確證樣品分子中結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑數(shù)量;已上市藥品：

采取適當(dāng)分析方法對樣品進(jìn)行分析，以確證其結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑情況與已上市產(chǎn)品一致;第20頁4.結(jié)構(gòu)確證研究普通要求第21頁

①對測試樣品和對照樣品要求：

測試樣品:a.精制方法b.純度要求

大于99.0%，雜質(zhì)含量應(yīng)小于0.5%；對于手性藥品，應(yīng)增加對對映體、非對映體純度要求，普通不低于99.5%。

第22頁

對照品:a.正當(dāng)起源證實

購得標(biāo)準(zhǔn)品(已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品)市售原料藥市售制劑中提取得到原料藥從正規(guī)試劑企業(yè)購得試劑等

b.精制方法c.純度檢驗

第23頁②對圖譜、數(shù)據(jù)要求

附圖應(yīng)為原圖復(fù)印件或照片;圖譜及圖譜上標(biāo)識、數(shù)據(jù)應(yīng)清楚，并有完整檢測日期、各項參數(shù)、測試條件、儀器型號及樣品編號等統(tǒng)計。各項檢測數(shù)據(jù)應(yīng)按要求列表說明，注明其次序。有對照品應(yīng)將測試品和對照品同一波譜數(shù)據(jù)在一個表中對比列出。如有可作參考文件數(shù)據(jù)，也可列在同一表中。質(zhì)譜應(yīng)附離子裂解圖。第24頁(二)對不一樣類別藥品結(jié)構(gòu)確證要求未知結(jié)構(gòu)化合物：推論結(jié)構(gòu)已知結(jié)構(gòu)化合物：驗證結(jié)構(gòu)第25頁①未在國內(nèi)外上市銷售原料藥

按全新化學(xué)單體要求：推論結(jié)構(gòu)a.完成必要各項測試;b.應(yīng)提供充分試驗圖譜和數(shù)據(jù);c.按新化合物要求進(jìn)行圖譜解析和綜合解析;如有參考文件資料，可提供作參考。第26頁②已在國外上市銷售但還未在國內(nèi)銷售原料藥或已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)原料藥

按已知化學(xué)結(jié)構(gòu)藥品：驗證結(jié)構(gòu)

能夠使用對照品能夠參考文件

第27頁

a.有合格對照品化合物：

提供測試樣品和對照品在完全相同條件和同一儀器上測得各項圖譜和數(shù)據(jù)，完成所需各項目測試，若二者完全相同，并對主要波譜訊號和測試數(shù)據(jù)進(jìn)行了正確解析，即可得出二者化學(xué)結(jié)構(gòu)一致結(jié)論。

第28頁b.有詳細(xì)文件數(shù)據(jù)化合物：

可對結(jié)構(gòu)確證研究內(nèi)容、方法提供線索，并為解析提供參考，不過不能作為結(jié)構(gòu)確證研究充分證據(jù)，仍需要進(jìn)行較為詳盡圖譜解析和綜合解析。

第29頁c.無對照品和文件數(shù)據(jù)化合物：

除了目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)外，缺乏其它支持性資料，所以標(biāo)準(zhǔn)上應(yīng)按全新化學(xué)單體要求進(jìn)行全方面研究，提供充分試驗圖譜和數(shù)據(jù)，可結(jié)合其它研究工作（比如合成工藝路線確實定）以深入推論化合物結(jié)構(gòu)。第30頁(三)對特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)藥品結(jié)構(gòu)確證要求

第31頁1.立體異構(gòu)體藥品

立體異構(gòu)體：①光學(xué)異構(gòu)體a.對映異構(gòu)體

b.非對映異構(gòu)體

②幾何異構(gòu)體（順、反異構(gòu)體）第32頁手性藥品----絕對構(gòu)型和相對構(gòu)型

a.單一對映體----絕對構(gòu)型

比旋度測定手性柱色譜(手性HPLC和GC)核磁共振單晶X-衍射圓二色譜旋光光譜第33頁

b.消旋體----有多個手性中心時要求確定相對構(gòu)型;c.立體異構(gòu)混合物----確定異構(gòu)體組成和百分比;第34頁“手性藥品申報資料及審評關(guān)鍵點”

(藥審中心)

①應(yīng)注意確證產(chǎn)品立體構(gòu)型?？梢罁?jù)手性中心多少、文件數(shù)據(jù)是否充分、對照品有沒有來選擇適當(dāng)確實證方法，必要時可采取單晶X－射線衍射進(jìn)行確證。②比旋度是必須檢測項目之一，已知起始原料構(gòu)型和化學(xué)合成方法立體選擇性也可作為依據(jù)之一。第35頁2.含有多晶型藥品晶型:是指結(jié)晶物質(zhì)晶格內(nèi)分子排列形式。

多晶型物質(zhì)晶格內(nèi)部分子間力差異可能引發(fā)藥品各種理化性質(zhì)改變，主要對熔點、溶解度及溶出速率、穩(wěn)定性、有效性影響。第36頁

重點：以適宜方法取得藥品晶型數(shù)據(jù)。慣用方法：

粉末X-衍射法紅外吸收光譜法熔點熱分析光學(xué)顯微鏡第37頁

①創(chuàng)新藥品a.不一樣結(jié)晶條件下（溶劑、溫度、結(jié)晶速率等）晶型一致性；b.不一樣晶型是否影響藥品活性和毒性等;第38頁②結(jié)構(gòu)已知仿制藥品a.力爭與被仿制品保持一致；

尤其是被仿制藥為晶型選擇性藥品，且各晶型理化性質(zhì)及生物藥劑學(xué)性質(zhì)有顯著差異仿制藥品，要重點確定與被仿制品種晶型完全一致性（熔點、紅外吸收光譜、粉末X—射線衍射圖等)。

b.重點關(guān)注難溶性固體口服制劑晶型研究；第39頁那格列奈晶型研討會紀(jì)要

（藥審中心）

在臨床前，那格列奈晶型應(yīng)到達(dá)以下要求：

a.紅外光吸收圖譜,應(yīng)能清楚分辨出Ｈ晶型特征吸收峰，即在1714cm-1、1649cm-1、1542cm-1、1214cm-1處有強(qiáng)吸收峰；b.粉末Ｘ-射線衍射圖譜中在２θ=4.82°-4.9°處不得出現(xiàn)Ｂ型衍射峰，同時在２θ=19.6°與19.9°兩個強(qiáng)衍射峰應(yīng)能夠識別（應(yīng)分離）．c.熔點控制在137℃-141℃范圍內(nèi)，熔距限定為２℃。第40頁在臨床期間,對那格列奈晶型進(jìn)行以下工作:

a.熔點:測定本品H晶型與B晶型分別以不一樣百分比混合后熔點,并進(jìn)行差熱分析試驗工作;b.溶解度:對H、B晶型及熔點為170°C左右第三種晶型分別進(jìn)行溶解度測試;c.粉末X-射線衍射譜:對當(dāng)前原料中在19.6°、19.9°(２θ)衍射情況作深入研究;d.IR:完成使用IR法控制H晶型中夾雜B晶型方法學(xué)研究;與粉末X-射線衍射方法進(jìn)行比較研究,以提供制訂生產(chǎn)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。第41頁3.合成多肽類藥品

氨基酸分析（證實多肽組成是否正確）；質(zhì)譜測定（提供相對分子質(zhì)量及序列信息）；序列分析以及肽圖測繪等；紫外：對含有生色團(tuán)結(jié)構(gòu)小肽有一定測試意義；

紅外：適合用于小肽（含三個氨基酸肽）、擬肽等；

核磁共振：可對小肽結(jié)構(gòu)提供部分信息；

其它方法：HPLC、比旋度測定等。第42頁

藥品結(jié)構(gòu)中有半胱氨酸，應(yīng)明確其狀態(tài)（氧化態(tài)或還原態(tài)）；藥品結(jié)構(gòu)中存在二硫鍵，應(yīng)明確二硫鍵正確連接點；結(jié)合合成工藝對中間體研究，對終產(chǎn)品結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。第43頁4.多糖類藥品多糖結(jié)構(gòu)描述包含:①多糖分子量范圍；②多糖單糖組分；③單糖連接點類型；④單糖和糖苷鍵構(gòu)型；⑤重復(fù)單位;第44頁確證方法：單糖分離、判定：紙色譜法、TLC、HPLC、氣-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)等；多糖相對分子量及分子量分布測定：凝膠色譜法；糖苷鍵連接方式及糖苷鍵位置：紅外、核磁共振、化學(xué)反應(yīng)后產(chǎn)物分析等；第45頁5.多組分藥品

明確各組分組成百分比，對影響藥效和毒性主要成份進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證?？墒褂媒?jīng)典提取方法或其它分離技術(shù)，如制備色譜（TLC，HPLC），分離得到主要藥效成份單體，按單體項目要求進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)確證。

在組分多，含量少，難于得到單體時，可使用聯(lián)機(jī)分析技術(shù)，如氣一質(zhì)聯(lián)用（GC—MS），液—質(zhì)聯(lián)用（LC—MS），氣—付利葉紅外聯(lián)用（GC—FTIR），質(zhì)—質(zhì)聯(lián)用（MS—MS），輔助組分結(jié)構(gòu)驗證及定量分析。第46頁6.不含金屬元素有機(jī)鹽類或

復(fù)合物

應(yīng)同時提供成鹽前后兩套波譜和試驗數(shù)據(jù)。對于一些波譜測定有困難或不易說明其結(jié)構(gòu)鹽或復(fù)合物，可測定藥品酸根或堿基波譜，并結(jié)合其它試驗項目進(jìn)行確證。第47頁7.金屬鹽類和絡(luò)合物

除通常要求各項測試外，還應(yīng)提供確證分子中金屬元素種類、存在形式和含量相關(guān)圖譜和分析數(shù)據(jù)。不適于或不能測試金屬鹽本身項目，能夠用成鹽前酸分子或配位體對應(yīng)測試結(jié)果進(jìn)行佐證。第48頁8.半合成化合物

分子母核結(jié)構(gòu)為已知并能夠確證其原分子母核結(jié)構(gòu)在合成過程中未發(fā)生改變，可適當(dāng)簡化對母核部分結(jié)構(gòu)確實證工作。重點對新引入基團(tuán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，能夠結(jié)合原料結(jié)構(gòu)和合成路線進(jìn)行論證和說明。如包括構(gòu)型確證，若母核手性中心構(gòu)型沒有改變時，重點在于側(cè)鏈和取代基中新引入手性中心構(gòu)型確定。第49頁(四)各項波譜和測試技術(shù)要求第50頁1.紅外吸收光譜(IR)

①基本原理：分子中化學(xué)鍵振動能級躍遷。②主要應(yīng)用：a.判定化合物結(jié)構(gòu)——有對照品、標(biāo)準(zhǔn)圖譜b.推測化合物結(jié)構(gòu)——確定特征官能團(tuán)、區(qū)分晶型等第51頁③技術(shù)要求：a.按藥典要求方法校正和檢定儀器；b.正確選擇測試方法和條件

固體樣品首選溴化鉀壓片法；離子交換-----氯化鉀壓片；晶型改變-----糊法；c.準(zhǔn)確、合理、充分圖譜解析;d.按要求格式列表和撰寫資料;

第52頁

④資料撰寫格式

儀器測試條件儀器校正和檢定數(shù)據(jù)表

解析吸收峰(cm-1)強(qiáng)度振動類型基團(tuán)第53頁

2.紫外吸收光譜(UV)①基本原理：電子躍遷②主要應(yīng)用：推測共軛體系骨架結(jié)構(gòu)（發(fā)色團(tuán)、助色團(tuán)）紫外光譜——定性吸收系數(shù)——定量第54頁③技術(shù)要求

a.按藥典要求方法校正和檢定儀器；b.通常要求三種溶劑：中性、0.1NHCl、0.1NNaOH；c.要求定量，準(zhǔn)確計算摩爾吸收系數(shù)；d.歸屬主要吸收譜帶；e.數(shù)據(jù)列表說明；第55頁④資料撰寫格式

儀器測試條件儀器校正和檢定數(shù)據(jù)表

解析溶劑λmax

ε值基團(tuán)和吸收帶第56頁3.核磁共振氫譜(1H-NMR)

①基本原理：利用原子核核自旋現(xiàn)象，經(jīng)過一定振動頻率電磁波照射時，原子核吸收電磁波從低能態(tài)向高能態(tài)躍遷，即核磁共振。②主要應(yīng)用可提供供試品中氫原子數(shù)目、周圍化學(xué)環(huán)境、相互間關(guān)系、空間排列等信息。

第57頁③技術(shù)要求

a.應(yīng)使用200MHz以上高分辨NMR儀。b.對各項測試條件應(yīng)有明確、詳盡說明，如儀器型號、規(guī)格、溶劑、內(nèi)標(biāo)。c.對分子中全部H原子均要有明確解析和歸屬。d.對復(fù)雜結(jié)構(gòu)化合物，應(yīng)考慮采取適當(dāng)其它技術(shù)加以佐證。第58頁④資料撰寫格式儀器溶劑、內(nèi)標(biāo)給出原子編號分子結(jié)構(gòu)式數(shù)據(jù)表

(如有對照品或文件數(shù)據(jù)能夠?qū)Ρ攘腥氡碇?

解析原子序號化學(xué)位移質(zhì)子數(shù)多重性J值對應(yīng)質(zhì)子第59頁4.核磁共振碳譜(13C-NMR)

①基本原理：

利用原子核核自旋現(xiàn)象，經(jīng)過一定振動頻率電磁波照射時，原子核吸收電磁波從低能態(tài)向高能態(tài)躍遷，即核磁共振。②主要應(yīng)用:可提供供試品中碳原子數(shù)目、所處不一樣化學(xué)環(huán)境信息。

第60頁③技術(shù)要求

a.對各項測試條件應(yīng)有明確、詳盡說明，如儀器型號、規(guī)格、溶劑、內(nèi)標(biāo)。b.在圖譜復(fù)雜時，應(yīng)使用質(zhì)子噪聲去偶或偏共振去偶技術(shù)，使圖譜簡化。c.對分子中全部C原子均要有明確解析和歸屬。d.對復(fù)雜結(jié)構(gòu)化合物，可與類似結(jié)構(gòu)化合物化學(xué)位移進(jìn)行計算比較，確定合理結(jié)構(gòu)。第61頁④資料撰寫格式儀器溶劑給出碳原子編號分子結(jié)構(gòu)式數(shù)據(jù)表

(如有對照品或文件數(shù)據(jù)能夠?qū)Ρ攘腥氡碇?

解析碳原子序號化學(xué)位移碳原子類型第62頁5.其它核磁共振譜

DEPT譜:可區(qū)分碳原子類型;1H－1Hcosy:能夠顯示相隔2～3鍵相互之間存在偶合質(zhì)子對信息;C-Hcosy(HMQC,異核多量子相關(guān)譜):能夠了解分子中C-H聯(lián)結(jié)情況;

第63頁HSQC(異核單量子相關(guān)譜):用于測定1H-13C相關(guān)信息，能夠直接明確C、H之間連接關(guān)系;HMBC(異核多重鍵相關(guān)譜):能夠顯示1H、13C之間遠(yuǎn)程偶合信息，即相隔二鍵和三鍵1H、13C之間相關(guān)信號;解析化合物中存在結(jié)構(gòu)單元，推測化合物中各官能團(tuán)、結(jié)構(gòu)單元之間連接關(guān)系;

19F、31P等:可提供對應(yīng)元素種類及數(shù)目、在分子中所處化學(xué)環(huán)境等信息;

第64頁6.質(zhì)譜(MS)

①基本原理：將氣體分子經(jīng)電子流轟擊,使分子中電子成為帶正電荷分子離子,而后裂解成一系列碎片離子,再經(jīng)過磁場使不一樣質(zhì)荷比正離子分離并統(tǒng)計其相對強(qiáng)度,畫出質(zhì)譜圖。

第65頁②主要應(yīng)用：提供分子離子峰、碎片峰、豐度等信息，能夠確定分子量、分子式以及推測部分結(jié)構(gòu)單元。對含有同位素元素(如Cl、Br等)藥品,利用同位素簇豐度比，可推斷藥品中部分元素種類、數(shù)量，乃至分子式、裂解方式等。第66頁③技術(shù)要求:a.應(yīng)盡可能設(shè)法取得化合物分子離子峰。當(dāng)用EI法不能出現(xiàn)分子離子峰時，可試用其它電離源，如CI，F(xiàn)AB，F(xiàn)I，F(xiàn)D等。b.所獲數(shù)據(jù)按要求列表，并對主要碎片離子峰產(chǎn)生進(jìn)行解釋，提供離子裂解圖。c.高分辨質(zhì)譜不能反應(yīng)藥品純度和結(jié)晶水，結(jié)晶溶劑，殘留溶劑情況。第67頁④資料撰寫格式儀器測試條件數(shù)據(jù)表

裂解圖解析

M/Z相對豐度碎片離子第68頁7.元素分析

①主要應(yīng)用：確定元素組成、分子式;除氧元素外，其余各種元素普通均能準(zhǔn)確測定其含量。能夠反應(yīng)結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑、成鹽化合物酸根和堿基等。C、H、N元素可采取自動元素分析儀測定，其它元素可采取適宜物理或化學(xué)方法測定。

第69頁

②技術(shù)要求：a.應(yīng)詳細(xì)說明使用儀器、測定方法及條件。尤其是對測試樣品預(yù)處理方法、條件。b.同一樣品測定兩次，兩次試驗數(shù)據(jù)同時列出，不取平均值。c.應(yīng)給出計算理論值所依據(jù)分子式，包含結(jié)晶水（或結(jié)晶溶劑)。列表比較實測值與理論值（普通要求誤差不超出0.3％），初步判定供試品與目標(biāo)化合物分子組成是否一致。d.附測試匯報單復(fù)印件。第70頁8.熱分析①基本原理：采取程序控溫下，準(zhǔn)確統(tǒng)計待測物質(zhì)理化性質(zhì)與溫度關(guān)系，研究其受熱過程中晶型轉(zhuǎn)變、熔融、升華等物理改變和脫水、熱分解、氧化、還原等化學(xué)改變。

第71頁

②主要應(yīng)用：差示掃描量熱法（DSC):測定熔點、結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑、考查晶型等。熱重法（TGA):測定結(jié)晶水、吸附水和結(jié)晶溶劑、分解溫度等。第72頁

③技術(shù)要求：a.應(yīng)說明使用儀器型號、參數(shù)設(shè)定值，包含升溫度速度、樣品重量、溫度范圍。b.供試品與對照品應(yīng)在同一儀器、相同條件下測定。c.差熱分析曲線表示：縱坐標(biāo)為熱流率（dp/dt），恒坐標(biāo)為溫度（℃）。氣體普通為氮氣，流速為40ml/min。熱重分析曲線表示：縱坐標(biāo)為重量（mg）或重量百分?jǐn)?shù)，橫坐標(biāo)為溫度（℃），氣體普通為氮氣，流速為40ml/min。

第73頁④資料撰寫格式

儀器測試條件測試結(jié)果和討論第74頁9.X－射線衍射粉末X-射線衍射主要應(yīng)用:a.固體狀態(tài)下單一化合物判別b.晶型確定c.晶態(tài)與非晶態(tài)物質(zhì)判斷等

第75頁

單晶X－射線衍射①主要應(yīng)用:a.化合物骨架結(jié)構(gòu)信息b.化合物相對或絕對構(gòu)型c.構(gòu)象及差向異構(gòu)d.鹽鍵及配位鍵f.結(jié)晶水/溶劑第76頁②資料撰寫格式儀器測試條件結(jié)構(gòu)解析晶體學(xué)參數(shù)結(jié)構(gòu)測定方法結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)圖結(jié)論第77頁10.綜合解析①綜合解析普通過程:a.確定化合物分子式

元素分析質(zhì)譜法（尤其是高分辨質(zhì)譜）綜合各種譜圖提供碳、氫等原子數(shù)b.依據(jù)分子式計算不飽和度c.確定分子中存在主要官能團(tuán)和結(jié)構(gòu)單元d.明確各官能團(tuán)、結(jié)構(gòu)單元連接方式e.對構(gòu)型、晶型、結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑進(jìn)行分析第78頁

②技術(shù)要求：

a.有對照品

樣品和對照品測試結(jié)果是否一致波譜信號歸屬b.無對照品

詳細(xì)解析、正確歸屬參考文件能夠作為主要參考資料第79頁③資料撰寫要求：

簡明扼要有機(jī)合理深入

第80頁穩(wěn)定性研究資料撰寫

基本要求

----申報資料14第81頁申報資料格式和內(nèi)容

一.供試品起源及批號二.試驗內(nèi)容

1.加速試驗

(40±2℃、RH75±5％

)2.長久試驗(25±2℃、RH60±10％

三.考查項目四.試驗結(jié)果五.結(jié)論與討論六.附圖

第82頁(一)穩(wěn)定性研究基本內(nèi)容

和特點影響原因試驗加速試驗長久留樣試驗

第83頁三種試驗比較

時間條件目影響原因試驗10天最為猛烈初步確定藥品性質(zhì)及包裝容器和材料，估測加速與長久留樣應(yīng)采取溫度和濕度。加速試驗6個月較為猛烈初步評定正常條件下放置更長時間穩(wěn)定性。長久試驗時間最長，貫通研究工作一直模擬上市產(chǎn)品儲存條件是確定使用期、儲存條件和包裝材料最終依據(jù)。第84頁1.影響原因試驗

新藥:原料藥和制劑均提議進(jìn)行該項試驗，制劑穩(wěn)定性試驗?zāi)軌蛟谔幏胶Y選和工藝設(shè)計過程中進(jìn)行;

已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品種:暫不要求，但勉勵研發(fā)企業(yè)進(jìn)行制劑影響原因考查;

第85頁

(1)試驗?zāi)繕?biāo)

a.考查藥品在極端條件下固有穩(wěn)定性，了解其降解路徑和可能降解產(chǎn)物；同時得到降解產(chǎn)物也可用于相關(guān)雜質(zhì)檢驗方法適用性評定。

b.為制劑工藝篩選、包裝材料和容器選擇、貯存條件確實定等提供依據(jù)。c.為加速試驗和長久試驗應(yīng)采取溫度和濕度等條件提供依據(jù)。

第86頁

(2)試驗普通要求

經(jīng)典影響原因試驗:

光照

高溫

高濕

其它：氧化、pH影響等。

第87頁

原料藥:將一批供試品置適宜容器中(量瓶或培養(yǎng)皿),攤成≤5mm厚薄層(疏松原料藥攤成≤10mm厚薄層)進(jìn)行試驗。

制劑:除去內(nèi)包裝最小制劑單位,分散為單層置適宜條件下進(jìn)行。

如試驗結(jié)果不明確,應(yīng)加試2個批號樣品。第88頁

光照試驗

供試品放在裝有日光燈光照箱內(nèi),于照度4500lux±500lux下放置10天，于第5天和第10天取樣。

ICHQ1B要求樣品總照度不低于1.2*106Lux.hr，近紫外能量不低于200w.hr/m2。

第89頁

高溫試驗

60℃下放置10天，于第5天和第10天取樣，檢測評價指標(biāo)。

若供試品有顯著改變（如含量下降5%），則在40℃下同法進(jìn)行試驗。

若60℃無顯著改變，不再進(jìn)行40℃試驗。

ICH要求試驗溫度為:高于加速試驗溫度10℃，如50℃、60℃進(jìn)行。

第90頁

高濕試驗

在25℃、90％±5％RH下放置10天，于第5天和第10天取樣，指標(biāo)可包含吸濕增重項。

若吸濕增重5%以上，則在25℃、75±5％RH下同法進(jìn)行試驗；若吸濕增重5%以下，且其它考查項目符合要求，則不再進(jìn)行此項試驗。

ICH要求試驗濕度為:高于加速試驗75%RH濕度進(jìn)行。

第91頁

熱循環(huán)（凍融）試驗對于一些特殊藥品，如溫度改變可能引發(fā)物相分離、黏度減小、沉淀或聚集藥品，還需要經(jīng)過熱循環(huán)試驗來驗證其運輸或使用過程中穩(wěn)定性。如：凝膠劑、霜劑、軟膏劑、栓劑、難溶性藥品注射劑等。第92頁美FDA關(guān)于“穩(wěn)定性指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)

草案”

（1998年6月發(fā)表）

對于易發(fā)生物相分離、黏度減小、沉淀或聚集藥品需經(jīng)過熱循環(huán)試驗來驗證其運輸或使用過程中穩(wěn)定性。作為影響原因試驗一部分，應(yīng)模擬藥品在運輸與使用過程中可能碰到溫度條件下，循環(huán)考查上市包裝藥品穩(wěn)定性。第93頁

詳細(xì)方法以下：a.對于溫度改變范圍在冰點以上藥品，熱循環(huán)試驗應(yīng)包含三次循環(huán)，每次循環(huán)應(yīng)在2～8℃兩天，然后在40℃加速條件下考查兩天。b.對于可能暴露于冰點以下藥品，熱循環(huán)試驗應(yīng)包含三次循環(huán)，每次循環(huán)應(yīng)在-10～-20℃兩天，然后在40℃加速條件下考查兩天。

第94頁

c.對于吸入氣霧劑，推薦熱循環(huán)試驗包含一天內(nèi)進(jìn)行三到四次六小時循環(huán)，溫度在冰點以下和40℃（75～85%RH）之間，該試驗需連續(xù)考查六周。d.對于冷凍保留藥品，應(yīng)考查該藥在微波爐或熱水浴中加速融化時穩(wěn)定性，除非說明書中明確禁止如此操作。第95頁2.加速試驗

新藥申請以及已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品種申請，均需進(jìn)行該項試驗。第96頁(1)試驗?zāi)繕?biāo)

a.

經(jīng)過加緊市售包裝中藥品化學(xué)或物理改變速度，考查藥品穩(wěn)定性，為包裝、配送及貯存提供必要資料。

b.初步估測短時期內(nèi)超出正常貯存條件（如運輸中可能出現(xiàn)連續(xù)幾天高溫）時對樣品穩(wěn)定性影響。

C.加速試驗結(jié)果能夠作為長久穩(wěn)定試驗補充，估算在非加速條件下更長時間內(nèi)化學(xué)改變，為初步確定產(chǎn)品使用期提供依據(jù)。

第97頁(2)試驗普通要求

模擬市售包裝三批樣品，比長久放置溫度最少高15℃條件下進(jìn)行。

普通可選擇40℃±2℃、75％±5％RH條件下，進(jìn)行6個月試驗，在試驗期間第0、1、2、3、6個月末取樣。如不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，則應(yīng)在中間條件即30℃±2℃、60％±5％RH同法進(jìn)行6個月以上試驗。

第98頁

對采取不可透過性包裝含有水性介質(zhì)制劑(如:溶液劑、混懸劑、乳劑、注射劑等):可不要求相對濕度;對采取半通透性容器包裝制劑(如:多層共擠PVC軟袋裝注射液,塑料瓶裝滴眼液、滴鼻液等):應(yīng)在40℃±2℃、20％±5％RH條件下進(jìn)行;乳劑、混懸劑、軟膏劑、糊劑、凝膠劑、眼膏劑、栓劑、氣霧劑、泡騰片及泡騰顆粒等:直接采取:30℃±2℃、65％±5％RH條件下進(jìn)行;對熱敏感藥品加速試驗可在25℃±2℃、

60％±5％RH條件下同法進(jìn)行。第99頁3.長久試驗

新藥申請以及已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品種申請，均需進(jìn)行該項試驗。

第100頁(1)試驗?zāi)繕?biāo)

主要考查原料藥或制劑在市售包裝條件下,在運輸、保留、使用過程中穩(wěn)定性,更直接地反應(yīng)藥品穩(wěn)定性特征。

第101頁(2)試驗普通要求

模擬市售包裝三批樣品在25℃±2℃、60％±10％RH條件進(jìn)行試驗，取樣普通為第一年每3個月末一次，第二年每6個月末一次，以后每年末一次。

對熱敏感藥品，可在確定溫度下考查。比如，對于需在冰箱中冷藏保留藥品，其長久留樣考查溫度就能夠設(shè)定為6℃±2℃；而對于需冷凍保留藥品，長久留樣考查溫度就能夠設(shè)定-20℃±5℃。

第102頁

對于申請臨床研究新藥和已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品種注冊申請，長久試驗應(yīng)進(jìn)行最少6個月。

對于申請生產(chǎn)研究新藥，應(yīng)提供足夠長時間長久試驗資料。

第103頁ICH/WHO關(guān)于長久試驗和加速試驗

條件新要求（2月）

ICH要求不一樣氣候帶，不一樣長久試驗條件:氣候帶Ⅰ：溫帶21℃45%RH

氣候帶Ⅱ：高濕亞熱帶25℃60%RH

氣候帶Ⅲ：干熱30℃35%RH

氣候帶Ⅳ：濕熱30℃70%RH第104頁

溫帶:英國、北歐、加拿大、俄羅斯；

亞熱帶:美國、日本、西歐（葡萄牙-希臘）；

干熱帶:伊朗、伊拉克、蘇丹；

濕熱帶:巴西、加納、印度尼西亞、尼加拉瓜、菲律賓。第105頁7月，ICH公布Q1F以調(diào)整后氣候帶Ⅳ儲備條件作為長久穩(wěn)定性試驗測定條件：30℃（±2℃）/65%（±5%）RH

第106頁對我國氣候帶和穩(wěn)定性試驗條件

思索

①我國氣候情況較為復(fù)雜，不能單純認(rèn)為屬于氣候帶Ⅱ；②盡可能綜合考慮到上市產(chǎn)品所處不一樣環(huán)境，以確保在一些條件下，如高濕高熱、干燥地域、嚴(yán)寒地域產(chǎn)品穩(wěn)定性。第107頁

進(jìn)口中國樣品，提議按照ICH新指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行30℃（±2℃）/65%（±5%）RH條件長久留樣穩(wěn)定性研究。

第108頁(二)穩(wěn)定性研究內(nèi)在規(guī)律

1.含有整體性和系統(tǒng)性和制備工藝、質(zhì)量研究相互關(guān)聯(lián)。所使用分析方法應(yīng)是質(zhì)量研究中經(jīng)過驗證方法;研究結(jié)果為質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供依據(jù)；與制劑處方工藝有親密聯(lián)絡(luò)；2.含有階段性貫通藥品研發(fā)一直。臨床前申報生產(chǎn)獲準(zhǔn)上市后第109頁（三）穩(wěn)定性研究須關(guān)注幾個問題第110頁1.對樣品要求①規(guī)模

穩(wěn)定性研究用樣品應(yīng)為中試規(guī)模產(chǎn)品.

②生產(chǎn)工藝、設(shè)備

樣品應(yīng)與大生產(chǎn)所用工藝、設(shè)備、流程一致.

③批次

影響原因試驗采取1批樣品進(jìn)行;

加速試驗和長久試驗采取3批樣品進(jìn)行.

第111頁ICH關(guān)于新原料藥及其制劑穩(wěn)定性指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)（Q1A）最新修訂稿原料藥:所考查三批樣品最少應(yīng)為中試規(guī)模，其合成路線應(yīng)與工業(yè)化生產(chǎn)一致，生產(chǎn)流程應(yīng)仿照工業(yè)化生產(chǎn)流程，其質(zhì)量應(yīng)能代表工業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)品質(zhì)量。制劑:所考查三批樣品中有兩批應(yīng)為中試規(guī)模，另一批批量在合理情況下可適當(dāng)減小。該三批樣品應(yīng)盡可能采取不一樣批次原料藥生產(chǎn)。第112頁2.考察項目設(shè)置①檢測項目齊全性物理穩(wěn)定性化學(xué)穩(wěn)定性微生物學(xué)穩(wěn)定性

第113頁物理穩(wěn)定性是指在要求條件下使用期內(nèi),該藥品原有物理性質(zhì)(包含外觀、性狀、均勻性、溶出性、懸浮性等很多物理特征)保持不變。第114頁影響物理穩(wěn)定性相關(guān)原因

（1）引濕增重所致性狀改變；（2）相變造成呈色改變；

----原料藥晶型改變----制劑中晶型改變----制劑中其它相變

（3）溶解性改變；（4）熔點改變；（5）分散性改變；

----包合物包封率改變----懸浮性改變----聚合影響

第115頁化學(xué)穩(wěn)定性指在要求條件下整個使用期內(nèi)，該藥品每一個活性成份均能保持其化學(xué)完整性與要求程度標(biāo)示活性程度。第116頁影響化學(xué)穩(wěn)定性相關(guān)原因

（1）溶液pH；

----對水解反應(yīng)影響----對氧化反應(yīng)影響

（2）廣義酸堿對水解反應(yīng)催化；（3）金屬離子對氧化反應(yīng)影響；第117頁微生物學(xué)穩(wěn)定性指在要求條件下全部使用期內(nèi)，該藥品按照要求無菌或微生物生長程度狀態(tài)能被保持程度。第118頁影響微生物學(xué)穩(wěn)定性相關(guān)原因（1）微生物污染和繁殖可造成藥品質(zhì)量改變；

----物理性狀破壞：顏色、嗅味、澄明度、粘稠度、均勻度等；----有效成份破壞；----產(chǎn)生微粒物質(zhì)；（2）制劑處方組成與性質(zhì)是微生物污染內(nèi)在原因；

----制劑處方組成中很多成份是微生物營養(yǎng)源；----制劑本身pH可適合微生物生長；第119頁

酸堿度對大多數(shù)微生物生長影響酸性條件（pH)堿性條件（pH)微生物生長情況6-74-63-42-3﹤1.57-99-1010-11﹥12生長最繁茂生長良好略受抑制，尚能生長生長受嚴(yán)重抑制不能生長第120頁

一些微生物pH耐受范圍微生物類別pH耐受范圍酵母菌霉菌乳酸桿菌假單孢菌束大腸菌類腸球菌屬1.5-8.51.5-11.03.0-6.53.0-11.03.0-10.04.8-11.0第121頁關(guān)于化學(xué)藥穩(wěn)定性申報要求常見問題答疑（藥審中心）

申報小針、粉針、輸液劑穩(wěn)定性研究除進(jìn)行外觀色澤、含量、pH、澄明度、相關(guān)物質(zhì)等考查外，為了確保效期內(nèi)產(chǎn)品質(zhì)量，需在效期末增加無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）、不溶性微粒（輸液劑）等考查。第122頁②檢測項目標(biāo)特異性應(yīng)依據(jù)原料藥結(jié)構(gòu)和制劑特征設(shè)定必要檢測項目。如：

例1.手性藥品：應(yīng)考查其立體構(gòu)型改變；例2.分子中存在易水解酯基:應(yīng)考查該藥品在不一樣酸堿條件下穩(wěn)定性；例3.水合物:應(yīng)增加水分檢驗，以確定結(jié)晶水穩(wěn)定性；例4.脂質(zhì)體制劑：應(yīng)檢驗主藥泄漏率與粒徑改變；

第123頁3.放置條件選擇

①放置條件應(yīng)充分考慮到日后產(chǎn)品貯藏、運輸及使用過程中可能碰到環(huán)境原因;②考查放置條件應(yīng)考慮劑型、包材等各種原因;第124頁

如:半透過性容器包裝（塑料瓶、多層非PVC共擠袋）內(nèi)制劑，除了對常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行考查外，還應(yīng)該對其可能發(fā)生水損失進(jìn)行評價。

這類產(chǎn)品加速試驗應(yīng)在較低相對濕度條件下進(jìn)行，如:20％RH，以驗證是否存在水分丟失。第125頁4.考查時間點設(shè)置

①普通需要設(shè)置多個時間點考查樣品質(zhì)量;②穩(wěn)定性趨勢判定要求和試驗?zāi)繕?biāo)來設(shè)置;

如長久試驗中，總考查時間應(yīng)含蓋所預(yù)期使用期;對于一些不穩(wěn)定產(chǎn)品，可考慮適當(dāng)增加取樣時間點;第126頁5.對分析方法要求

應(yīng)經(jīng)過充分驗證，含有一定專屬性、準(zhǔn)確性、精密度、靈敏度等。方法確實定和方法驗證內(nèi)容應(yīng)結(jié)合質(zhì)量研究工作進(jìn)行。第127頁6.“顯著改變”概念

原料藥“顯著改變”應(yīng)包含:①性狀,如顏色、熔點、溶解度、比旋度超出標(biāo)準(zhǔn)要求,晶型、水分等改變超出標(biāo)準(zhǔn)要求;②含量測定超出標(biāo)準(zhǔn)要求;③相關(guān)物質(zhì),如降解產(chǎn)物、異構(gòu)體改變超出標(biāo)準(zhǔn)要求;④結(jié)晶水發(fā)生改變;

第128頁

制劑“顯著改變”應(yīng)包含:

①含量測定中發(fā)生5%改變;或者不能到達(dá)生物學(xué)或者免疫學(xué)檢測過程效價指標(biāo);②藥品任何一個降解產(chǎn)物超出標(biāo)準(zhǔn)要求;③性狀、物理性質(zhì)以及特殊制劑功效性試驗(如顏色、相分離、再混懸能力、結(jié)快、硬度、每撳給藥劑量等)超出標(biāo)準(zhǔn)要求;④pH值超出標(biāo)準(zhǔn)要求;⑤溶出度或釋放度超出標(biāo)準(zhǔn)要求;第129頁

對包裝在半通透性容器內(nèi)藥品：

在經(jīng)過30℃（±2℃）/40%（±5%）RH條件下平衡放置3個月后，與其初始值發(fā)生5%水分減失被認(rèn)為是“顯著改變”。第130頁7.需重新配制使用藥品

穩(wěn)定性要求

對注射用粉針劑、溶液片劑等應(yīng)考查臨床使用條件下穩(wěn)定性。

方法：在實際使用條件下時間周期內(nèi)，采取溶解或者稀釋后制劑產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量評價，在試驗起始點、中間時間點和結(jié)束時間點分別檢測評價指標(biāo)。第131頁8.多劑量包裝產(chǎn)品拆封后

穩(wěn)定性考查：

對于多劑量產(chǎn)品使用，拆封后產(chǎn)品暴露于外界環(huán)境原因，可能變得不穩(wěn)定，輕易使微生物超標(biāo)，產(chǎn)生降解產(chǎn)物等；為確保產(chǎn)品安全、有效，應(yīng)深入進(jìn)行穩(wěn)定性研究，將研究結(jié)果寫入使用說明書。第132頁考查樣品：選擇1-3批中試樣品，其中有一批應(yīng)臨近效期末；假如是多規(guī)格、多包裝產(chǎn)品，應(yīng)選擇最輕易產(chǎn)生改變規(guī)格和包裝樣品進(jìn)行試驗。

模擬臨床使用方法和環(huán)境，考查屢次拆封后穩(wěn)定性。考查項目應(yīng)與貨架期標(biāo)準(zhǔn)一致，包含樣品物理、化學(xué)、生物學(xué)性質(zhì)。

考查時間應(yīng)足夠長。

第133頁

(五)穩(wěn)定性研究結(jié)果評價

系統(tǒng)分析和評價，整體評判產(chǎn)品穩(wěn)定性;確定藥品保留條件、包裝材料/容器、使用期。第134頁1.保存條件確定新藥需要綜合三種穩(wěn)定性試驗結(jié)果加以分析;考慮到藥品在流經(jīng)過程中可能碰到情況;貯存條件應(yīng)該按照規(guī)范術(shù)語加以描述;已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品種保留條件可參考已上市同品種貯存條件。第135頁

中國藥典要求

遮光（不透光容器）

密閉（預(yù)防塵土和異物進(jìn)入）

密封（預(yù)防風(fēng)化、吸潮、揮發(fā)、異物進(jìn)入）

熔封或嚴(yán)封（預(yù)防空氣和水份進(jìn)入）

陰涼處（不超出20℃）

涼暗處（避光，不超出20℃）

冷處（2-1