新疆部分地區(qū)牛支原體抗體檢測與分析

新疆部分地區(qū)牛支原體抗體檢測與分析

新疆位于歐洲和亞洲的大陸上。其獨特的自然地理環(huán)境和未經(jīng)處理的有機牧場資源，使新疆成為中國傳統(tǒng)的五個牧區(qū)之一，也是中國養(yǎng)牛業(yè)的主要地區(qū)。隨著養(yǎng)牛業(yè)的日益發(fā)展,各種疫病對養(yǎng)牛業(yè)造成的威脅也日趨嚴重,其中,牛呼吸道疾病給養(yǎng)牛業(yè)造成的經(jīng)濟損失不容忽視。而在感染呼吸道疾病的牛中,至少有1/4~1/3是由牛支原體引起的。牛支原體是存在于健康牛和肺炎牛上、下呼吸道的常見寄生菌,主要引起牛的肺炎、關節(jié)炎、乳房炎、角膜炎、結膜炎等多種疾病。該病原于1961年首次在美國患有乳房炎的病牛中分離得到,辛九慶等在2008年報道國內(nèi)首次從患肺炎的犢牛肺臟中分離到了牛支原體。自2010年7月以來,新疆石河子、奎屯等地區(qū)某些規(guī)?；B(yǎng)牛場部分牛陸續(xù)發(fā)生一種以高熱、呼吸道癥狀、胸膜肺炎和膝關節(jié)腫大為特征的疾病,發(fā)病率較高,通過對采集樣品進行病原分離培養(yǎng)、特異性抗體ELISA檢測和PCR鑒定,結果證實,牛支原體是引起該病(牛肺炎及關節(jié)炎)的病原之一。為了解支原體的感染情況,對新疆伊犁及塔城地區(qū)部分縣市103頭牛隨機采血,采用雙抗原夾心ELISA方法,進行了牛支原體病的抗體監(jiān)測。自2011年首次證實牛支原體已在新疆流行以來,還沒有關于牛支原體肺炎大面積發(fā)病的報道,因此,通過該次血清學調(diào)查,初步了解牛支原體在調(diào)查地區(qū)的流行情況,以期為開展后續(xù)的防疫工作和制定綜合防控措施積累資料。1材料和方法1.1材料表面1.1.1血清檢查對新疆伊犁育肥場14頭牛、繁育場56頭牛以及新疆塔城33頭牛隨機采血,分離血清,于-20℃條件下保存?zhèn)溆谩?.1.2測試試劑1.1.3設備1.2方法1.2.1?？贵w抗體的制備該試劑盒用雙抗原夾心ELISA法測定標本中牛支原體抗體水平。用純化的牛支原體抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入支原體抗體,再與HRP標記的牛支原體抗原結合,形成抗原—抗體—酶標抗原復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的牛支原體抗體呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)。1.2.2空白對照對檢測在包被好抗原的酶標板上先加樣品稀釋液40μL,然后再加待測樣品10μL,每板設陰性對照2孔、陽性對照2孔(各50μL)和空白對照1孔。用封板膜封板,37℃溫育30min。1.2.3清潔板1.2.4酶標記抗體1.2.5清潔板1.2.6顯色1.2.7完成后1.2.8測量以空白對照調(diào)零,于酶標儀450nm波長下讀取各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15min以內(nèi)進行。1.2.9抗體陰性判定成立條件:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10。臨界值計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15。陰性判定:樣品OD值<臨界值者,為支原體抗體陰性。陽性判定:樣品OD值≥臨界值者,為支原體抗體陽性。2結果與分析2.1結果該次試驗采用ELISA方法共檢測了103份牛血清樣品,檢出30份陽性血清,陽性率為29.1%,結果見表1。2.2牛抗體病感染情況結合試驗結果可以看出,隨機采集的103份牛血清的陽性率為29.1%,說明調(diào)查地牛支原體病的感染率較高。其中,伊犁和塔城2個地區(qū)相比,塔城地區(qū)牛支原體病的感染率較高,陽性率為36.4%;伊犁地區(qū)的繁育場與育肥場相比,繁育場支原體感染率較高,陽性率為26.8%,而育肥場支原體感染率相對較低,陽性率為21.4%。3討論3.1牛肉中的常見藥物治療從該次血清學調(diào)查結果來看,該病在調(diào)查地區(qū)存在,且感染率高,應引起有關部門和養(yǎng)殖戶的高度重視。牛支原體既可以導致牛的急性呼吸系統(tǒng)疾病,還可以導致持續(xù)感染,常與細菌、病毒協(xié)同作用,環(huán)境因子如天氣惡劣、通風不良、過度擁擠、運輸?shù)瓤梢约觿〔∏?臨床上多種抗生素對該病的治療效果均較差。病牛可通過鼻腔分泌物排出牛支原體,健康?？赏ㄟ^近距離接觸病牛而感染發(fā)病,牛一旦感染支原體,可持續(xù)帶菌而成為傳染源。3.2伊、伊、塔城等地牛最終呈應激在采樣的過程中發(fā)現(xiàn)塔城地區(qū)的養(yǎng)殖戶生活水平相對較低,養(yǎng)牛場基礎設施條件較差,大部分以散養(yǎng)為主,飼草料品種單一,基本上都是以草為主,使得牛只營養(yǎng)不足,抗病能力減弱;塔城地區(qū)的養(yǎng)牛戶大多年齡偏大,飼養(yǎng)技術水平參差不齊,缺乏科學的養(yǎng)畜知識,幾乎不為牛體刷毛,牛糞堆積處理意識不強,在牛場隨處可見牛糞,甚至有些牛體都是滿身糞便,這樣就加大了牛支原體、細菌、病毒侵入牛體的機會。而在伊犁地區(qū),大多數(shù)養(yǎng)牛戶都有自己的全封閉式的牛舍,雖然面積不大,基本上都有活動場地。伊犁地區(qū)的繁育?；旧隙际钱?shù)仞B(yǎng)牛戶自繁自養(yǎng)的,但沒有將牛群分群飼養(yǎng),存在產(chǎn)犢母牛與牛犢不分離的現(xiàn)象,糞便處理不及時,存在支原體病原的隱性感染;有時,需要從其他地區(qū)買入種牛,在運輸過程中,由于發(fā)生應激,種牛會出現(xiàn)各種不良反應,到達牛場后,最明顯的不良反應就是食欲不振,這會導致種牛的抵抗力下降,為牛支原體和其他病菌入侵提供了機會。而對于育肥牛,可能是因為關系到經(jīng)濟收入,伊犁地區(qū)的養(yǎng)牛戶在飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生等方面相對注意一些,但極少對牛常發(fā)病進行流行病學調(diào)查,依舊還是在牛發(fā)病后,根據(jù)病牛出現(xiàn)的癥狀進行診療和處置,缺乏全面系統(tǒng)的處理程序。由該次調(diào)查結果得知,伊犁和塔城2個地區(qū)相比,塔城地區(qū)牛支原體感染率較高,陽性率為36.4%;在伊犁地區(qū),繁育場牛支原體感染率較高,陽性率為26.8%,而育肥場支原體感染率相對較低,陽性率為21.4%,這與筆者調(diào)查了解到的塔城地區(qū)和伊犁地區(qū)養(yǎng)牛戶的飼養(yǎng)管理情況基本符合。3.3加強對病牛的檢測牛支原體對外界環(huán)境各種因素的抵抗力不是很強,因此預防該病最根本的辦法就是加強平時的飼養(yǎng)管理,以預防為主。相關部門要加強宣傳工作,使養(yǎng)牛戶充分了解和認識該病對養(yǎng)牛業(yè)的危害,從而提高對該病的防控意識,在平時的飼養(yǎng)管理中,應當保持牛舍通風良好、清潔、干燥,牛群不要過度擁擠,不同年齡的牛分開飼養(yǎng),定期消毒牛舍,及時發(fā)現(xiàn)并隔離病牛,嚴格檢疫,以減少不必要的損失。在購買新牛時,進行一些常規(guī)檢查,避免購入病牛;做好對運輸車輛的消毒,買入新牛后,首先要進行隔離觀察,確保無病后方可與健康?；烊猴曫B(yǎng);育肥牛采取全進全出制度,在空欄期對牛舍進行全面徹底的消毒。4elisa檢測?？贵w病牛支原體病在調(diào)查地區(qū)存在,感染率較高,應引起重視,相關部門應加強宣傳,使得養(yǎng)殖戶充分了解和認識該病對畜牧業(yè)的危害。在該次血清學調(diào)查之后,筆者將在病原分離培養(yǎng)、基因組提取及種型鑒定等方面對牛支原體病進行系統(tǒng)研究,了解這些地區(qū)牛支原體病的發(fā)生和流行情況,為防控該病提供參考數(shù)據(jù)。牛支原體抗體ELISA檢測試劑盒,購自北京永輝生物科技有限公司。酶標儀、微量加樣器和