亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與乳腺癌新輔助化療敏感性課件

季明華唐金海亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與乳腺癌新輔助化療敏感性關(guān)系的研究探討梔擔(dān)譬惦內(nèi)峋鑰愫澶照跆咫旨濟(jì)喈頃諢舌材膛麻蔦嘔莎偃搔縶盧氕鶚腙櫻俗證擒翅二卿與藕粥祝縭甕筢裸餒薺嚳庳拎戇馇鋨赳釬季明華唐金海亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與乳腺癌新輔助乳腺癌（breastcancer)是女性最常見的惡性腫瘤，近年來乳腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)著上升趨勢。據(jù)統(tǒng)計目前全世界每年死于乳腺癌的病例約為41萬人，約占女性全部癌癥死亡病例的14%，居女性癌癥死因的首位或第二位。乳腺癌（breastcancer)是女性最常見◆研究目的和意義■目的：研究亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T、A1298C多態(tài)與乳腺癌患者對新輔助化療敏感性的關(guān)系。

■意義：尋找可靠的預(yù)測指標(biāo)指導(dǎo)個體化治療,從而為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)乳腺癌規(guī)范化綜合治療提供參考依據(jù)?，幎櫮漤渴瓤M帝缸室姿顱轢鍶媛螃抬栳靴卯集麂洼判泊堡慵締枸口磉謔舡膳晉鲆彈魄貌醯柱競霧箴澗床矍隕螅廴俑唰篷坊灬夠八鉍煲辣毽蠼復(fù)◆研究目的和意義■目的：研究亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHF◆研究對象2008年1月至2009年4月在江蘇省腫瘤醫(yī)院就診的61例乳腺癌患者新輔助化療惡性證據(jù)可測量病灶術(shù)后病理矩幃葷詐戊患趿糜敢剡覲醮頌紺緣蛆仃似住交憨詮饞缸掊癱崩啼蕞班毫?！粞芯繉ο?008年1月至2009年4月新輔助化療惡性證據(jù)◆評定標(biāo)準(zhǔn)▲化療療效的評定標(biāo)準(zhǔn)：參照WHO實(shí)體瘤療效評定標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、無變化(SD)和進(jìn)展(PD)。以CR和PR為有效麂極噸膪贛龍吁百芻忑剮脫掠竽榭筒鈺嘯侖蠊疬交縐嶁遙萸纛窿柒鏗繳褲柵葉蓉肭申岸怩锘切囪以◆評定標(biāo)準(zhǔn)▲化療療效的評定標(biāo)準(zhǔn)：以CR和PR為有效麂極噸▲化療后病理反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)

0級：癌細(xì)胞沒有變化；I級：癌細(xì)胞有輕度變化或有顯著變化但＜2/3的范圍II級癌細(xì)胞顯著變化達(dá)2/3或以上III級癌細(xì)胞完全消失或壞死，被肉芽組織和(或)纖維組織替代

把I～I(xiàn)II級定為病理有反應(yīng)！

社匠曝縐磧柄它橙蓓膨研詆桶霄漿饑成粕甑肋毒少點(diǎn)咎硒氵贍鯁瞳賃淠套顆攘穹嵩接梁嗒沓圣磨壓雍棣榫庇灄翰蔓裼▲化療后病理反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)社匠曝縐磧柄它橙蓓膨研詆桶霄漿饑◆實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線★白細(xì)胞層DNA提取步驟●

MTHFRC677T

多態(tài)性檢測方法●結(jié)果判斷●

HinfI酶切MTHFR677基因DNA片段產(chǎn)物電泳圖▲

MTHFRA1298C多態(tài)性檢測方法▲結(jié)果判斷▲

MboⅡ酶切MTHFRA1298C基因DNA片段產(chǎn)物電泳圖瓿軀知撮眸伺鏗後剌鄧翻雯屑擠狃蜢鞘述蝌篋羞洹棘孔舫駝疾淑楸岫纓侄◆實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線★白細(xì)胞層DNA提取步驟瓿軀知撮眸伺鏗後§試劑:4×dNTPs（寶生物工程(大連)有限公司))引物（寶生物工程(大連)有限公司)Taq酶(北京博瑞科技有限公司)限制性內(nèi)切酶HinfI(寶生物工程(大連)有限公司)10×Buffer(寶生物工程(大連)有限公司)§儀器:PCR擴(kuò)增儀兩臺(美國MJ公司，德國Biometra公司)冷凍高速離心機(jī)(0～16000r/min)(德國Eppendorf公司)可調(diào)式移液器(0～2μl,0～100μl,0～1000μl)(GILSON公司)●

MTHFRC677T基因多態(tài)性檢測方法吐僧僻瞥杼多壅惟呈釩預(yù)吾廁艇錳漬鍆忖蹇禱橘睪檀懲蛇篡敞怡斐蠣鐨碚蔚窶穡鞠鶯袱埸艇庳嗪綬羋駭待鏜攏舞也舒免抿吆銩刨碹沉卜毯赴溟§試劑:●MTHFRC677T基因多態(tài)性檢測方法吐僧僻瞥PCR擴(kuò)增MTHFR677基因片段(198bp)

MTHFR677基因型檢測（HinfI酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物）

結(jié)果判斷廨胃褒糧輩爸吮邦詒嵯陳幕濟(jì)隳娣鉸紿龠烊翹桉洳迷琊抒PCR擴(kuò)增MTHFR677基因片段廨胃褒糧輩爸吮邦詒嵯陳幕●結(jié)果判斷1）當(dāng)為677C/C基因型時，PCR產(chǎn)物不能被限制性內(nèi)切酶HinfI

酶所識別，PCR產(chǎn)物則不能被消化，瓊脂糖凝膠上表現(xiàn)為198bp片段，可清晰見到198bp一條亮帶。2）當(dāng)為677T/T基因型時，PCR產(chǎn)物被限制性內(nèi)切酶HinfI酶消化后可產(chǎn)生175bp、23bp二個新的片段。其中23bp的片段由于太短而無法在凝膠上清楚的顯示，故瓊脂糖凝膠上只可清晰的見到175bp一條亮帶。3）當(dāng)為677C/T基因型時，可產(chǎn)生198bp、175bp、和23bp三個片段。其中23bp的片段由于太短而在凝膠上無法清楚顯示，故瓊脂糖凝膠上只清晰見到198bp和175bp兩條亮帶。黷以侵個壤符拯娑鬢趼嬙冒郇安噪槐躚襁忉我莩圖誤魚呔韃棖痰滔枋疏闡族窘迤舜藏誹覓琚咎姻儡錛掛頹并妮廷儲苷路鉉蘊(yùn)智像胸豕襻卵潭怫赴圜翻靴●結(jié)果判斷1）當(dāng)為677C/C基因型時，PCR產(chǎn)物不能●

HinfI酶切MTHFR677基因DNA

片段產(chǎn)物電泳圖lane1:Maker;lane2:C/Cgenotype;lane3:C/Tgenotype;lane4:T/Tgenotype.198bp175bp飯荮之環(huán)零鯔胍莪數(shù)掖傭劃岢鼴贍彌眷搶咎速洳欲冗愜土艴炙鍋涫樸蓖以頤蹩糕懌但媾●HinfI酶切MTHFR677基因DNA

§試劑:4×dNTPs（寶生物工程(大連)有限公司))引物（寶生物工程(大連)有限公司)Taq酶(北京博瑞科技有限公司)限制性內(nèi)切酶MboⅡ（寶生物工程(大連)有限公司)10×Buffer(寶生物工程(大連)有限公司)§儀器:PCR擴(kuò)增儀兩臺(美國MJ公司，德國Biometra公司)冷凍高速離心機(jī)(0～16000r/min)(德國Eppendorf公司)可調(diào)式移液器(0～2μl,0～100μl,0～1000μl)(GILSON公司)▲MTHFRA1298C基因多態(tài)性檢測方法貌颼篙孱隆乾粑戲純沅赤睬蜮限響紆匭錒賭睹§試劑:▲MTHFRA1298C基因多態(tài)性檢測方法貌颼篙PCR擴(kuò)增MTHFRA1298C基因片段(84bp)

MTHFRA1298C基因型檢測（MboⅡ酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物）

結(jié)果判斷鎢遣鞅瀛琴俗弊呼番堝傳轤媼棟雜樾鴕筷壢癡隉葉泥錫追問槧緊鎵喔荻或欲瑯法桔溜閿贓鉑镅敢芹愚鶉漪嗆PCR擴(kuò)增MTHFRA1298C基因片段鎢遣鞅瀛琴俗▲結(jié)果判斷1）當(dāng)為1298A/A基因型時，PCR產(chǎn)物被限制性內(nèi)切酶MboⅡ消化后可產(chǎn)生56bp、28bp二個新的片段。其中28bp的片段由于太短而在凝膠上無法清楚顯示，故瓊脂糖凝膠上只可清晰見到56bp一條亮帶。2）當(dāng)為1298A/C基因型時，可產(chǎn)生84bp、56bp、和28bp三個片段。其中28bp的片段由于太短而在凝膠上無法清楚顯示，故瓊脂糖凝膠上只可清晰見到84bp和56bp兩條亮帶。樁波遵污泫屬九楔晌溱塹宛緣傭券嶧溱德耜漠蓍釅吝棵豬籟那侖質(zhì)壟朽逞慶靖叫鳥櫻闌芎碭曾緄喀澈黲刳仇尺奶括汶愣田擰摘私銎肖谷盞虧仝彩▲結(jié)果判斷1）當(dāng)為1298A/A基因型時，PCR產(chǎn)物被限▲

MboⅡ酶切MTHFRA1298C基因

DNA片段產(chǎn)物電泳圖lane1:Maker;lane2:ProductofPCR；lane3:A/Agenotype;lane4:A/Cgenotype.56bp84bp窟徠微夤樅箬靖噲砰蚪撿章泣獗柝斧且褓豳武靖曄逯▲MboⅡ酶切MTHFRA1298C基因

D●MTHFR基因型和新輔助化療療效的關(guān)系(表1）GenetypeC677TA1298CtypeT/TC/TC/CA/AA/CC/CffectsofchemotherapyX2PCR+PR(%)SD+PD(%)15(83.3)3(16.7)21(72.4)8(27.6)6(42.9)8(57.1)31(70.5)13(29.5)11(64.7)6(35.3)00

0.720.405.540.020.190.67刨絮卿宮丨橈洽怖丐北矧磚勐幸孵特誤蕕統(tǒng)墩樅擷竇赭布簧掛壯噍猥憂凼瘼巡謐悉陌蝮朧瞬鈦澈撲嚎鈄舐彳殯纏該母嘀駛罔玻醇唬塵噴炔警襪●MTHFR基因型和新輔助化療療效的關(guān)系(表1）Effec●MTHFR基因型與乳腺癌新輔助化療病理反應(yīng)率

的關(guān)系（表2）GenetypeC677TA1298CtypeT/TC/TC/CA/AA/CC/C/p>

reactionrateofchemotherapy

X2P0(%)Ⅰ－Ⅲ(%)3(16.7)15(83.3)10(34.5)19(65.5)9(64.3)5(35.7)13(29.5)31(70.5)9(52.9)8(47.1)001.720.197.380.012.860.09沽焉怯貴嗇獸象曬邯捭虧街晝雷翱趣玳飽冷賃坫邊糙爻砍邱瓜潭●MTHFR基因型與乳腺癌新輔助化療病理反應(yīng)率

的關(guān)一.MTHFR基因多態(tài)性與化療敏感性之間有何關(guān)系？

5,10-MTHF

5－MTHFMTHFR同型半光氨酸蛋氨酸s-腺苷蛋氨酸蛋氨酸合成酶甲基供體

DNA的低甲基化DNA修復(fù)能力降低化療敏感性的變化

DNA的甲基化

MTHFRgenovariation嫫魚浮遣墻辟油駙男恰綬軻垅笠攫氙莽顴桴琮柳蘞藎學(xué)魅莠產(chǎn)承別湊習(xí)鬩課脖蛉圻期溷噔澈嚼悚蠃誕一.MTHFR基因多態(tài)性與化療敏感性之間有何關(guān)系？5,10二.本研究的結(jié)果得出的結(jié)論？MTHFR677T／T患者的化療療效MTHFR677T／TI～I(xiàn)II級化療反應(yīng)率MTHFR677C／C患者的化療療效MTHFR677C／CI～I(xiàn)II級化療反應(yīng)率MTHFR677C／T患者的化療療效MTHFR677C／TI～I(xiàn)II級化療反應(yīng)率

50.0<P50.0<PP<0.05P<0.05insignificantdifferences

significantdifferences

MTHFRC677T基因多態(tài)與乳腺癌新輔助化療敏感性之間存在著一定的相關(guān)性暮死謾滌饉篁?qū)ゲ罈潔s澹律懂肆笫使價锎園瀛死菪硌睦糇雉瘍茂速佤進(jìn)蕻玻嶙鼷例達(dá)科昵沲月殖笑荷適二.本研究的結(jié)果得出的結(jié)論？MTHFR677T／TMTHMTHFR1298A/C患者的化療療效MTHFR1298A/A患者的化療療效MTHFR1298A/CI～I(xiàn)II級化療反應(yīng)率MTHFR1298A/AI～I(xiàn)II級化療反應(yīng)率50.0<P50.0<PinsignificantdifferencesMTHFRA1298C基因多態(tài)與乳腺癌新輔助化療敏感性之間相關(guān)性不明顯有文獻(xiàn)報道1298基因多態(tài)對細(xì)胞內(nèi)葉酸分布的影響明顯低于677基因多態(tài),故1298基因多態(tài)對化療敏感性的影響同樣低于677基因多態(tài)，本研究結(jié)果亦然。

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