選修1.4-生物技術(shù)在其他方面的應(yīng)用市公開課一等獎百校聯(lián)賽優(yōu)質(zhì)課金獎名師賽課獲獎?wù)n件

專題4生物技術(shù)在其它方面應(yīng)用1/59一、植物組織培養(yǎng)技術(shù)1.基本過程2.菊花組織培養(yǎng)(1)影響植物組織培養(yǎng)原因①材料：_____、年紀、保留時間長短等。脫分化再分化種類2/59③激素：____________________。④菊花組織培養(yǎng)環(huán)境(2)試驗操作過程制備______________→_______消毒→_____→培養(yǎng)→移栽→栽培維生素蔗糖生長素和細胞分裂素5.8左右18℃～22℃12hMS固體培養(yǎng)基外植體接種條件pH：________溫度：____________光照：每日光照_____3/593.月季花藥培養(yǎng)(1)花粉發(fā)育過程：_____________時期、_____期、_____期等階段。(2)產(chǎn)生花粉植株兩種路徑小孢子四分體單核雙核花粉脫分化胚狀體愈傷組織叢芽分化叢芽再分化生根移栽誘導(dǎo)4/59(3)影響花藥培養(yǎng)原因①主要原因：_____選擇和_______組成。②其它原因：親本植株_________、材料___________、接種_____。(4)試驗操作①材料選?。禾暨x完全_______花蕾，確定花粉發(fā)育時期最慣用方法是_________法。②接種：滅菌后花蕾，在_____條件下除去萼片和花瓣，并馬上將花藥接種到培養(yǎng)基上。剝離花藥時盡可能不要損傷花藥。

材料培養(yǎng)基生長條件低溫預(yù)處理未開放醋酸洋紅無菌密度5/59③培養(yǎng)：溫度控制在______左右，幼小植株形成后才需要______。假如花藥開裂釋放出胚狀體，就要在_____開裂后盡快將幼小植株分開。二、植物有效成份提取1.植物芳香油提取(1)植物芳香油主要化學(xué)成份：___________及其衍生物，含有很強揮發(fā)性。提取方法有蒸餾、_____和萃取等。(2)提取玫瑰精油①方法：____________法。25℃光照花藥萜類化合物壓榨水蒸氣蒸餾6/59②試驗流程：(3)提取橘皮精油①方法：普通用_____法。②試驗流程：石灰水浸泡→漂洗→_____→過濾→靜置→再次_____→橘皮油。水蒸氣蒸餾NaCl無水Na2SO4

過濾壓榨壓榨過濾7/592.胡蘿卜素提取(1)胡蘿卜素性質(zhì)：___溶于水，___溶于乙醇，___溶于石油醚等有機溶劑。(2)試驗設(shè)計①方法：_____法，_______最適宜作萃取劑。②試驗流程：胡蘿卜→粉碎→_____→萃取→_____→濃縮→胡蘿卜素。(3)判定方法：_______法?！军c撥】①水蒸氣蒸餾要適當延長蒸餾時間，嚴格控制蒸餾溫度。②用于萃取有機溶劑必須事先精制，除去雜質(zhì)。③萃取過程中濃縮本質(zhì)為蒸發(fā)有機溶劑。

不微易萃取石油醚干燥過濾紙層析8/59三、DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)1.DNA粗提取與判定(1)提取原理：DNA與雜質(zhì)_______不一樣，DNA與雜質(zhì)對酶、高溫、洗滌劑_______不一樣。(2)提取DNA詳細步驟①試驗材料選?。罕驹囼炗胈____細胞做試驗材料。②破碎細胞，釋放DNA：利用血細胞__________原理，注意玻璃棒___向攪拌，過濾取濾液。③溶解細胞核內(nèi)DNA：在高濃度NaCl溶液中，核蛋白輕易集聚，游離出DNA溶解。溶解度耐受性雞血吸水漲破單9/59④DNA析出：加蒸餾水降低NaCl溶液濃度，使DNA_____。⑤DNA初步純化：將DNA絲狀物再溶解、過濾，向濾液中加入體積分數(shù)為95%_______溶液進行提純。(3)DNA判定：DNA在_______條件下，與_______呈___色。2.多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段(1)PCR相關(guān)技術(shù)原理與條件①PCR：___________反應(yīng)簡稱，是一個體外快速擴增_______技術(shù)。②引物：是一小段______________，它能與DNA母鏈一段堿基序列_________。析出冷酒精沸水浴二苯胺藍多聚酶鏈式DNA片段RNA或單鏈DNA互補配對10/59③擴增方向：總是從子鏈____端向____端延伸。④解旋：利用了_____________原理，經(jīng)過控制溫度來控制雙鏈解聚與結(jié)合，即雙鏈DNA單鏈DNA。⑤酶：_______TaqDNA聚合酶，高溫不會失活。⑥PCR條件：一定_________下才能進行，需提供_____模板、兩種_____、___種脫氧核苷酸、_____DNA聚合酶，同時要控制_____。(2)PCR過程①變性：當溫度上升到_______以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈。5′3′DNA熱變性耐高溫緩沖溶液DNA引物四耐熱溫度90℃11/59②復(fù)性：溫度下降到_______左右，兩種引物經(jīng)過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。③延伸：溫度上升到_______左右，溶液中四種脫氧核苷酸(A、T、C、G)在___________作用下，依據(jù)_____________標準合成新DNA鏈。(3)結(jié)果①PCR普通要經(jīng)歷___屢次循環(huán)，每次循環(huán)能夠分為_____、_____和_____三步。②兩引物間固定長度DNA序列呈_____擴增(即___)。50℃72℃DNA聚合酶堿基互補配對30變性復(fù)性延伸指數(shù)2n12/593.血紅蛋白提取和分離試驗(1)慣用分離方法：___________法、凝膠電泳法等。(2)基本原理①凝膠色譜法原理：相對分子質(zhì)量大分子經(jīng)過多孔凝膠顆粒間隙，旅程___，流動___；相對分子質(zhì)量小分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，旅程___，流動___。②凝膠電泳法原理：不一樣蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)、_____、形狀和_____不一樣，在電場中受到作用力大小、_____、阻力不同，造成不一樣蛋白質(zhì)在電場中運動_____和運動_____不一樣。凝膠色譜短快長慢電量大小方向速度方向13/59(3)血紅蛋白提取和分離程序①樣品處理紅細胞洗滌→__________釋放→分離血紅蛋白溶液②粗分離——_____：除去樣品中相對分子質(zhì)量較___雜質(zhì)。③純化：普通采取_________法對血紅蛋白進行分離和純化。④純度判定：普通用_________________________來測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量，即對血紅蛋白進行純度判定。

血紅蛋白透析小凝膠色譜SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法14/59【點撥】①提純出DNA判定還可用甲基綠染色方法進行，甲基綠可將DNA染成綠色。②DNA聚合酶不能從頭合成DNA子鏈，只能從引物3′端開始延伸，從子鏈5′端開始合成。引物3′端與子鏈5′端交匯于一點，屬于對模板和產(chǎn)物描述，兩種說法都正確。③SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實質(zhì)上測定是組成蛋白質(zhì)多肽鏈相對分子質(zhì)量，電泳后形成兩條或多條帶并不一定是雜質(zhì)，如血紅蛋白由2條α鏈和2條β鏈組成，本身就會形成2條帶。15/59植物組織培養(yǎng)1.植物激素在組織培養(yǎng)過程中主要作用生長素和細胞分裂素是開啟細胞分裂、脫分化和再分化關(guān)鍵性激素，其作用及特點為：(1)在生長素存在情況下，細胞分裂素作用展現(xiàn)加強趨勢。16/59(2)使用次序不一樣，結(jié)果不一樣

(3)生長素用量與細胞分裂素用量百分比不一樣，結(jié)果也不一樣。①高：利于根分化、抑制芽形成；②低：利于芽分化、抑制根形成；③適中：促進愈傷組織形成。使用次序試驗結(jié)果先使用生長素，后使用細胞分裂素有利于細胞分裂，但細胞不分化先使用細胞分裂素，后使用生長素細胞既分裂也分化同時使用分化頻率提升17/592.植物組織培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)比較項目內(nèi)容菊花組織培養(yǎng)月季花藥培養(yǎng)理論依據(jù)基本過程外植體細胞類型操作流程植物細胞全能性脫分化→再分化體細胞生殖細胞制備培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)→移栽→栽培選材→消毒→接種和培養(yǎng)→篩選和誘導(dǎo)→移栽→栽培選育18/59項目內(nèi)容菊花組織培養(yǎng)月季花藥培養(yǎng)影響原因培養(yǎng)結(jié)果生殖方式可育性選材、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、陽光等正常植株單倍體植株無性生殖有性生殖可育高度不育,秋水仙素處理后可育19/59【高考警示鐘】試驗操作中易錯幾個問題(1)材料選?。壕栈ńM織培養(yǎng)試驗中，應(yīng)選擇未開花植株莖上部新萌生側(cè)枝；月季花藥培養(yǎng)試驗中，應(yīng)選擇花粉發(fā)育過程中單核靠邊期花粉進行培養(yǎng)。(2)外植體消毒：所用消毒劑為體積分數(shù)為70%酒精和質(zhì)量分數(shù)為0.1%氯化汞溶液，所使用清洗液是無菌水。(3)培養(yǎng)過程：在早期，菊花組織培養(yǎng)需光照，月季花藥培養(yǎng)不需光照；而在后期均需光照。20/59【典例訓(xùn)練1】如圖是月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株兩種路徑，請據(jù)圖回答相關(guān)問題：(1)選取材料適當是否是成功誘導(dǎo)出花粉植株主要原因，普通來說選取_______期花粉可提升成功率。選擇花粉時，普通要經(jīng)過_______來確定花粉是否處于適當發(fā)育期，這時需要對花粉細胞核進行染色，慣用染色劑是____________。21/59(2)胚狀體與愈傷組織在結(jié)構(gòu)上主要區(qū)分在于愈傷組織細胞排列疏松無規(guī)則，是一個高度________薄壁細胞。胚狀體與__________發(fā)育形成胚有類似結(jié)構(gòu)，即含有胚芽、胚軸和胚根。(3)無菌技術(shù)也是成功誘導(dǎo)出花粉植株主要原因，請說明以下各項需要消毒，還是需要滅菌。需要滅菌：__________(填編號),需要消毒：___________(填編號)。①培養(yǎng)基，②培養(yǎng)皿，③接種環(huán)，④花蕾，⑤試驗操作者雙手，⑥三角錐形瓶。

22/59【解題指南】1.考查實質(zhì)：本題以月季花藥離體培養(yǎng)路徑為情境考查植物組織培養(yǎng)選材、過程及無菌技術(shù)。2.解題關(guān)鍵(1)月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株兩種路徑和胚狀體與愈傷組織在結(jié)構(gòu)上主要區(qū)分。(2)植物組織培養(yǎng)過程及其培養(yǎng)成功關(guān)鍵。.23/59【解析】(1)并不是任何時期花粉都能夠培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，只有花粉發(fā)育到一定時期對離體刺激才最敏感。對大多數(shù)植物而言，單核中期至晚期花粉最輕易形成花粉胚或花粉愈傷組織。在培養(yǎng)花藥之前，通慣用醋酸洋紅法制片鏡檢以確定花粉發(fā)育時期。(2)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株普通有兩種路徑：①花藥中花粉經(jīng)過胚狀體階段發(fā)育為植株；②花藥中花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再誘導(dǎo)其分化成植株。兩種路徑并無絕對界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素種類及其濃度配比。24/59(3)滅菌是用理化方法殺死環(huán)境中全部微生物細胞、芽孢和孢子。消毒是殺死物體表面病原微生物。在微生物培養(yǎng)過程中通常對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角錐形瓶進行滅菌處理；對花蕾、試驗操作者雙手進行消毒處理。答案：(1)單核鏡檢(顯微鏡觀察)醋酸洋紅(2)液泡化合子(3)①②③⑥④⑤25/59【互動探究】(1)圖中花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于哪些原因？提醒：培養(yǎng)基中激素種類及其濃度配比。(2)試管苗移栽到土壤中之前，通常要進行壯苗處理，應(yīng)怎樣壯苗？提醒：將試管苗移栽到經(jīng)消毒過蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，等幼苗長壯后再移栽到土壤中。26/59植物芳香油提取方法27/59提取方法水蒸氣蒸餾法壓榨法有機溶劑萃取法優(yōu)點不足簡單易行,便于分離生產(chǎn)成本低,易保持原料原有結(jié)構(gòu)和功效出油率高,易分離水中蒸餾會造成原料焦糊和有效成份水解等問題分離較為困難,出油率相對較低使用有機溶劑處理不妥會影響芳香油質(zhì)量28/59【高考警示鐘】水蒸氣蒸餾三種慣用方法原理相同，但原料位置不一樣(1)水中蒸餾：原料放于蒸餾容器水中，水完全浸沒原料。(2)水上蒸餾：容器中水上方有篩板，原料置于篩板上，水量以沸騰時不浸濕原料為宜。(3)水氣蒸餾：蒸餾容器下方有一排氣孔，連接外源水蒸氣，上方有篩板，上面放原料。三種方法中，水中蒸餾設(shè)備簡單，成本低，易操作，而水上蒸餾和水氣蒸餾時間短，出油率高。29/59【典例訓(xùn)練2】(·海南高考)許多植物含有天然香料，如薄荷葉中含有薄荷油?，F(xiàn)用薄荷葉提取薄荷油?；卮鹣铝袉栴}：(1)薄荷油是揮發(fā)性物質(zhì)，提取薄荷油時應(yīng)選取________(鮮、干)薄荷葉作原料，其原因是_______________________。(2)用萃取法提取薄荷油時，采取溶劑是______________，原理是__________________________。(3)用水蒸氣蒸餾法提取薄荷油時，在油水混合物中加入氯化鈉作用是_______。慣用于分離油層和水層器皿是_______。分離出油層中加入無水硫酸鈉作用是_______________，除去固體硫酸鈉慣用方法是_______________。30/59【解題指南】1.知識貯備(1)提取薄荷油選材要求和依據(jù)；(2)不一樣方法提取薄荷油原理、過程。2.解題關(guān)鍵：了解萃取法和水蒸氣蒸餾法在提取薄荷油中操作細節(jié)。【解析】(1)薄荷油易揮發(fā)，干燥過程中會使薄荷油揮發(fā)掉，所以選擇鮮薄荷葉作為原料。(2)薄荷油易溶于有機溶劑，所以萃取時所選取溶劑必須是有機溶劑，如酒精或石油醚、乙醚、戊烷等。31/59(3)增加鹽濃度，可使分層更顯著；分離油層和水層器皿普通選取分液漏斗；無水硫酸鈉是干燥劑，能夠用來吸收油層中水分；除去固體硫酸鈉最簡單方法是過濾。答案：(1)鮮薄荷油易揮發(fā)，干燥過程中會使薄荷油揮發(fā)掉(2)酒精或石油醚、乙醚、戊烷等薄荷油易溶于有機溶劑(3)增加鹽濃度，使分層更顯著分液漏斗吸收油層中水分過濾

32/59DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)1.DNA與蛋白質(zhì)在不一樣NaCl溶液中溶解度不一樣2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液溶解規(guī)律DNA溶解析出蛋白質(zhì)部分發(fā)生鹽析沉淀溶解NaCl溶液從2mol/L降低過程中，溶解度逐步增大33/592.比較細胞內(nèi)DNA復(fù)制與體外DNA擴增(PCR)項目DNA復(fù)制PCR擴增不同點場所能量酶是否有轉(zhuǎn)錄特點循環(huán)次數(shù)細胞內(nèi)細胞外ATP提供能量不需ATP提供能量解旋酶、DNA聚合酶耐高溫TaqDNA聚合酶伴有轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生引物無轉(zhuǎn)錄,需加入兩種引物邊解旋邊復(fù)制,半保留復(fù)制體外快速擴增受生物體本身控制30屢次34/59項目DNA復(fù)制PCR擴增不同點緩沖液設(shè)備相同點原料復(fù)制原理模板引物不需要需要人為控制無嚴格控制溫度改變溫控設(shè)備四種脫氧核苷酸嚴格遵照堿基互補配對標準DNA為模板都需要與模板相結(jié)合引物35/593.分離DNA、PCR技術(shù)、分離蛋白質(zhì)三者比較分離DNAPCR技術(shù)分離蛋白質(zhì)試驗原理DNA在不一樣濃度NaCl溶液中溶解度不一樣，且不溶于冷酒精利用DNA熱變性原理體外擴增DNA依據(jù)相對分子質(zhì)量大小不一樣來分離蛋白質(zhì)試驗過程選取材料→破碎細胞釋放DNA→除雜→DNA析出與判定變性→復(fù)性→延伸樣品處理→凝膠色譜操作試驗結(jié)果取得較純凈DNA取得大量DNA相對分子質(zhì)量不一樣蛋白質(zhì)得以分離試驗意義為DNA研究打下基礎(chǔ)處理了DNA研究中材料不足問題為蛋白質(zhì)研究和利用提供了原材料36/59【高考警示鐘】比較瓊脂糖凝膠電泳和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(1)從載體上看，利用瓊脂糖凝膠作為載體是瓊脂糖凝膠電泳，利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠作為載體是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。(2)從依據(jù)上看，利用了分子帶電性質(zhì)差異和分子大小是瓊脂糖凝膠電泳，僅利用了分子大小是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。37/59(3)從優(yōu)點上看，瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，樣品不需處理，電泳圖譜清楚，分辨率高，重復(fù)性好；SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳消除了凈電荷對遷移率影響，使電泳遷移率完全取決于分子大小。38/59【互動探究】(1)題(1)中變性、復(fù)性、延伸需要溫度分別是多少？提醒：95℃左右、55℃左右、72℃左右。分析：當溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈，稱之為變性；當溫度下降到50℃左右時，兩種引物經(jīng)過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合；當溫度上升到72℃左右時，溶液中四種脫氧核苷酸在TaqDNA聚合酶作用下，依據(jù)堿基互補配對標準合成新DNA鏈，稱為延伸。39/59(2)PCR普通要經(jīng)過三十屢次循環(huán)，從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)產(chǎn)物也作為模板參加反應(yīng)，由引物A延伸而成DNA單鏈作為模板時將怎樣延伸？提醒：與引物B結(jié)合進行DNA子鏈延伸。分析：當引物A延伸而成單鏈作模板時，此單鏈引物端為5′端，所以與它互補子鏈應(yīng)從另一端開始合成，即由引物B結(jié)合延伸子鏈。

40/591.用多倍體育種方法培育三倍體無子西瓜，每年都要制種，很麻煩。某活動小組同學(xué)們想到了利用植物組織培養(yǎng)方法來處理此難題。請回答與此試驗相關(guān)問題。(1)此方法依據(jù)原理是________。選取適當外植體作為起始材料，并要對外植體進行_______(填“滅菌”或“消毒”)。(2)超凈工作臺是植物組織培養(yǎng)主要設(shè)備，在使用前能夠用________進行消毒，接種前還要用________擦拭工作臺。41/59(3)離體組織和細胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件要求相對特殊，需要配制適宜培養(yǎng)基。慣用一個培養(yǎng)基是________，其主要成份包含：________、________、________。還經(jīng)常需要添加________。對培養(yǎng)基應(yīng)采取________方法滅菌。需要環(huán)境條件有適宜_____________________。(4)假如外植體選取材料為莖段，插入培養(yǎng)基時應(yīng)注意____。培養(yǎng)一段時間后，會經(jīng)過_________形成愈傷組織，愈傷組織細胞特點是_____________。

42/59【解析】(1)依據(jù)題中信息，能夠判斷出此方法為植物組織培養(yǎng)，所以依據(jù)原理是植物細胞全能性。選取適當外植體作為起始材料，并要對外植體進行消毒。(2)超凈工作臺在使用前能夠用紫外線進行消毒，接種前還要用70%酒精擦拭工作臺。(3)離體組織和細胞培養(yǎng)時，慣用一個培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其主要成份包含大量元素、微量元素、有機物，還經(jīng)常需要添加植物激素。對培養(yǎng)基應(yīng)采取高壓蒸汽滅菌法滅菌。需要環(huán)境條件有適宜溫度、pH、光照。43/59(4)假如外植體選取材料為莖段，插入培養(yǎng)基時應(yīng)注意方向不能倒插。培養(yǎng)一段時間后，會經(jīng)過細胞分裂形成愈傷組織，愈傷組織細胞特點是排列疏松而無規(guī)則。答案：(1)植物細胞全能性消毒(2)紫外線70%酒精(3)MS培養(yǎng)基大量元素微量元素有機物植物激素高壓蒸汽滅菌溫度、pH、光照(4)方向不能倒插細胞分裂(脫分化或去分化)排列疏松而無規(guī)則(或高度液泡化呈無定形狀態(tài)薄壁細胞)44/592.生物組織中存在各種有機物，不一樣有機物其提取與判定方法不盡相同。依據(jù)所學(xué)知識，請回答以下問題：(1)在香料工業(yè)提取“液體黃金”玫瑰油中，要求不含有任何添加劑或化學(xué)原料，其提取方法主要是________；玫瑰精油提取需大量原料，通常采取________技術(shù)實現(xiàn)玫瑰快速繁殖。(2)橘皮精油含有誘人橘香味，是食品、化裝品和香水配料優(yōu)質(zhì)原料，含有很高經(jīng)濟價值，主要經(jīng)過________法提取。45/59(3)用萃取法提取胡蘿卜素，萃取效率主要取決于_______，同時還受原料顆粒大小、含水量等條件影響；在對新鮮胡蘿卜進行干燥時，要注意控制________，不然會引發(fā)胡蘿卜素分解；提取胡蘿卜素粗品可經(jīng)過________法進行判定。(4)凝膠色譜法是依據(jù)________________分離蛋白質(zhì)有效方法，電泳分離法是依據(jù)各種物質(zhì)分子__________________不一樣，使待分離樣品中各分子遷移速度不一樣而實現(xiàn)分子分離。46/59【解析】本題主要考查植物有效成份提取方法。(1)依據(jù)玫瑰精油特點，其提取方法普通采取水蒸氣蒸餾法，采取植物組織培養(yǎng)方法能夠到達快速繁殖目標。(2)橘皮精油提取普通采取壓榨法。(3)用萃取法提取胡蘿卜素時，萃取效率主要取決于萃取劑性質(zhì)和使用量，同時受到原料顆粒大小、緊密程度、含水量、萃取溫度和時間等條件影響。在試驗操作中，對胡蘿卜進行干燥時要注意控制溫度和時間，溫度太高、時間太長，胡蘿卜素會分解。提取胡蘿卜素粗品可經(jīng)過紙層析法進行判定。(4)凝膠色譜法是依據(jù)相對分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量大經(jīng)過旅程短，先流出。47/59電泳分離法是依據(jù)各種物質(zhì)帶電性質(zhì)差異、分子大小和形狀不一樣，造成其在電場中遷移速度不一樣而實現(xiàn)分子分離。答案：(1)水蒸氣蒸餾法植物組織培養(yǎng)(2)壓榨(3)萃取劑性質(zhì)和使用量溫度和時間紙層析(4)相對分子質(zhì)量大小帶電性質(zhì)差異、分子大小和形狀48/593.PCR(多聚酶鏈式反應(yīng))技術(shù)是一項在生物體外復(fù)制特定DNA片段核酸合成技術(shù)，下列圖表示合成過程，請據(jù)圖分析回答：(1)A過程高溫使DNA變性解旋，對該過程原理敘述，正確是_________________。A.該過程用到耐高溫解旋酶破壞氫鍵B.該過程用到限制酶破壞磷酸二酯鍵C.該過程不需要解旋酶作用D.該過程與人體細胞過程完全相同49/59(2)C過程要用到酶是________。這種酶在高溫下仍保持活性，所以在PCR擴增時能夠________加入。PCR反應(yīng)除提供酶外，還需要滿足基本條件有：____________________。(3)假如把模板DNA兩條鏈用15N標識，游離脫氧核苷酸不做標識，控制“95℃～55℃～72℃”溫度循環(huán)3次，則在形成子代DNA中含有15N標識DNA占__________________。(4)假如模板DNA分子共有a個堿基對，其中含有胞嘧啶m個，則該DNA復(fù)制10次，需要加入胸腺嘧啶脫氧核苷酸________個。

50/59(5)PCR中由堿基錯配引發(fā)變異屬于_________。假設(shè)對一個DNA進行擴增，第一次循環(huán)時某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯配，則擴增若干次后檢測所用DNA擴增片段，與原DNA對應(yīng)片段相同占_____________?！窘馕觥?1)高溫所起作用類似于解旋酶，使雙鏈DNA變?yōu)閱捂湣?2)C過程為PCR技術(shù)延伸階段，當系統(tǒng)溫度上升至72℃左右時，溶液中四種脫氧核苷酸在TaqDNA聚合酶作用下合成新DNA鏈。TaqDNA聚合酶是耐熱，高溫下不變性，所以一次性加入即可。PCR即為體外DNA復(fù)制，所需條件與體內(nèi)DNA復(fù)制基本相同，都需要模板、原料、能量、酶，只不過為了便51/59于控制DNA復(fù)制過程經(jīng)過設(shè)置高溫解旋代替了解旋酶作用，省掉了解旋酶作用過程中所需能量供給，同時，加入了與模板鏈相結(jié)合引物作為子鏈延伸起點，省掉了切除引物過程，使PCR過程更簡練。(3)PCR技術(shù)遵照半保留復(fù)制特點。經(jīng)過三次循環(huán)，共產(chǎn)生23個DNA分子，其中有2個DNA分子含有15N標識。(4)在一個雙鏈DNA分子中，(C+T)占堿基總數(shù)二分之一，故T數(shù)目為a-m，復(fù)制10次，相當于新增加了(210-1)個DNA分子，故需補充T數(shù)目為(210-1)(a-m)。(5)基因中堿基對改變屬于基因突變。對一個DNA進行擴增，第一次循環(huán)時某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯配，以后按正常配對方式進52/59行擴