芳酸及其酯類藥物的分析課件

芳酸及其酯類藥物的分析

典型藥物鑒別試驗(yàn)含量測(cè)定

返回主目錄雜質(zhì)檢查基本要求芳酸及其酯類藥物的分析典型藥物鑒1基本要求

一、掌握水揚(yáng)酸類、苯甲酸類藥物的鑒別和含量測(cè)定的基本原理與方法。二、熟悉其他方酸類藥物鑒別和含量測(cè)定的基本原理與方法。。三、了解本類藥物的體內(nèi)分析方法。返回基本要求一、掌握水揚(yáng)酸類、苯甲酸2

一、水揚(yáng)酸類

（一）典型藥物結(jié)構(gòu)第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸（salycylicacid）第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸（saly3阿司匹林（aspirin)阿司匹林（aspirin)4

對(duì)氨基水楊酸鈉（sodiumaminosalicylate)對(duì)氨基水楊酸鈉5雙水楊酯（salsalate)雙水楊酯（salsalate)6貝諾酯（benorilate)貝諾酯（benorilate)7

1.酸性

SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、雙水楊酯均有酸性。

2.溶解性:

均為固體，有一定溶點(diǎn)。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

3.UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。

4.芳伯氨基和酚羥基特性：5.水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應(yīng)檢查水楊酸,對(duì)氨基水楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對(duì)氨基酚。（二）主要理化性質(zhì)1.酸性SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.48

（一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicacid）二、苯甲酸類（一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicaci9羥苯乙酯(ethylparoben)羥苯乙酯(ethylparoben)10丙磺舒(probenecid)丙磺舒(probenecid)11甲芬那酸(mefenamicacid)甲芬那酸(mefenamicacid)12（二）主要理化性質(zhì)

1.溶解性:

均為固體，有一定溶點(diǎn)。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

2.UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。

3.具有酚羥基特性：

4.分解反應(yīng)特性：苯甲酸鈉分解為苯甲酸；丙磺舒分解為SO2

5.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游離的羧基，可用NaOH直接滴定測(cè)定其含量。（二）主要理化性質(zhì)1.溶解性:均為固體，有一定溶點(diǎn)13三、其他芳酸類

(一)典型藥物結(jié)構(gòu)氯貝丁酯（clofibrate）三、其他芳酸類氯貝丁酯（clofibrate）14布洛芬（ibuprofen）布洛芬（ibuprofen）15

(二)主要理化性質(zhì)

1.溶解性：水中不溶，有機(jī)溶劑溶解，氯貝丁酯為液體；布洛芬為固體，有一定熔點(diǎn)。

2.UV和IR特征吸收光譜：基于分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和特征基團(tuán)。返回(二)主要理化性質(zhì)返16

一、與三氯化鐵反應(yīng)

含有酚羥基藥物可與FeCl3反應(yīng)；能與FeCl3反應(yīng)不一定含酚羥基.第二節(jié)鑒別試驗(yàn)Ar-OH+FeCl3紫堇色鐵配位化合物pH4~6一、與三氯化鐵反應(yīng)第二節(jié)鑒別試驗(yàn)Ar-OH+171.直接反應(yīng)

SA在中性或弱酸性條件下，與FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl31.直接反應(yīng)赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl18

丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH5.0~6.0中與FeCl3生成米黃色布洛芬與高氯酸羥胺，N，N’-雙環(huán)基己羧二亞胺及高氯酸鐵反應(yīng)，即顯紫色[JP（14）方法]?；诜肿又?COOH的結(jié)構(gòu)。2.水解或分解后與三氯化鐵反應(yīng)ASA水解成SA后與FeCl3

反應(yīng)，成紫堇色丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH5.0~6.0中19二、重氮化-偶合反應(yīng)

凡是分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物均可反應(yīng)。二、重氮化-偶合反應(yīng)20

1.直接反應(yīng)

對(duì)氨基水楊酸鈉

2.水解后反應(yīng)

貝諾酯具有潛在芳伯氨基

3.甲芬那酸與對(duì)-硝基苯重氮鹽在NaOH介質(zhì)中偶合產(chǎn)生橙紅色。1.直接反應(yīng)對(duì)氨基水楊酸鈉21

+K2Cr2O7

深藍(lán)色

棕綠色甲芬那酸+H2SO4

黃色

綠色熒光[JP(14)△三、氧化反應(yīng)△三、氧化反應(yīng)22

1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為156℃～161℃。

2.雙水楊酯水解生成SA：SA的mp為158℃。

3.氯貝丁酯堿水解后與鹽酸羥胺生成異羥肟酸鹽，在弱酸條件下再與三氯化鐵反應(yīng)生成紫色的異羥肟酸鐵。四、水解反應(yīng)1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為23

1.苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物，可用于鑒別。

2.丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO3,經(jīng)硝酸氧化成Na2SO4。

3.丙磺舒加熱分解，生成SO2氣體，有臭味五、分解產(chǎn)物反應(yīng)五、分解產(chǎn)物反應(yīng)24

1.測(cè)定λmax；λmin。

例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備0.25mg/ml；λmax；265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。

2.在λmax處測(cè)定一定濃度供試液的吸收度A。

例如：羥苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

3.在λmax處測(cè)定供試液的百分吸收系數(shù)。

例如：貝諾酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

六、紫外吸收光譜法六、紫外吸收光譜法25

4.在規(guī)定的波長測(cè)定吸收度比值（即雙波長吸收度比值法）

例如：對(duì)氨基水楊酸鈉10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56

再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30

4.在規(guī)定的波長測(cè)定吸收度比值（即雙波長吸收26七、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收?qǐng)D譜3700~2900cm-1

N-H、

O-H1660cm-1

C=O1610,15701480,1440

C=C775cm-1

Ar-H七、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收?qǐng)D譜3700~2900cm27返回3700~2900cm-1

N-H、

O-H1640cm-1

N-H1580cm-11500cm-1

C=C1300cm-1

C-N1188cm-1

C-O對(duì)氨基水楊酸鈉的紅外吸收?qǐng)D譜返回3700~2900cm-1N-H、O-H128第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)的檢查

1.溶液的澄清度

主要檢查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水楊酸苯酯；乙酰水楊酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液應(yīng)澄清。

2.游離水楊酸檢查

利用SA可與FeCl3呈色，用比色法檢查。

3.易炭化物檢查

主要檢查ASA中能被硫酸炭化顯色的低分子有機(jī)雜質(zhì)。采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法檢查。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)的檢查29

主要檢查成品藥物中可能殘留的間氨基酚。間氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要嚴(yán)格控制。

雙向滴定法：利用間氨基酚溶于乙醚，取3.0g樣品用乙醚提取0.02mol/LHCl測(cè)定方法滴定V＜0.3ml。

HPLC法：采用內(nèi)標(biāo)法，以磺胺作內(nèi)標(biāo)（USP）

二、對(duì)氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查二、對(duì)氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查30三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP收載的方法，由于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不清，故采用TLC法中的供試品自身對(duì)照法：固定相：GF254C18化學(xué)鍵合硅膠展開劑：甲醇-水-冰醋酸反相TLC法三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP收載的方法，由于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不31

甲芬那酸是以鄰-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下縮合而成，因此成品藥物中要檢查銅鹽及有關(guān)物質(zhì)。分光光度法：利用Cu2+與Na-DDC呈色后測(cè)定A

1.銅鹽檢查法

原子吸收分光光度法：BP（2000）

2.有關(guān)物質(zhì)的檢查主要檢查的是酰胺、二甲基苯胺和鄰氯苯甲酸各國藥典均采用TLC法中的自身高低濃度對(duì)照法。四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查32五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查

主要檢查成品藥物中殘留的對(duì)氯酚原料和揮發(fā)性雜質(zhì)GC-FID法HPLC法：以對(duì)-羥乙基酚作內(nèi)標(biāo)，用正相HPLC2.揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查方法

GC法1.對(duì)氯酚檢查返回五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查

主要檢查成品藥物中殘留的對(duì)氯酚33

一、酸堿滴定法（一）直接滴定法

基于本類藥物-COOH；可用堿直接滴定，如ASA的含量測(cè)定，其原理如下：第四節(jié)

含量測(cè)定1.原理：2.條件：在中性乙醇中，以酚酞作指示劑；摩爾比為1:1。3.應(yīng)用：多國藥典用于雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測(cè)定；USP和BP還用于甲芬那酸的測(cè)定。一、酸堿滴定法第四節(jié)含量測(cè)定1.原理：2.條34（二）水解后剩余滴定法

1.ASA含量測(cè)定原理：條件：水溶液

（二）水解后剩余滴定法原理：條件：水溶液35具體試驗(yàn)：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當(dāng)于ASA消耗

硫酸的ml數(shù)ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%具體試驗(yàn)：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當(dāng)于A362.羥苯乙酯的含量測(cè)定2.羥苯乙酯的含量測(cè)定37（三）兩步滴定法

1.ASA片的含量測(cè)定第一步為中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解產(chǎn)物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性穩(wěn)定劑+NaOH中性鹽第二步為水解與測(cè)定（三）兩步滴定法

1.ASA片的含量測(cè)定第一步為中和AS38

2.氯貝丁酯含量測(cè)定

第一步：中和酸性雜質(zhì)

第二步：水解與測(cè)定

2.氯貝丁酯含量測(cè)定39二、亞硝酸鈉滴定法

對(duì)氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在HCl中與NaNO2發(fā)生重氮化反應(yīng)Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O

因此可用亞硝酸鈉滴定法測(cè)定其含量，此法在下章重點(diǎn)討論。二、亞硝酸鈉滴定法對(duì)氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在40三、雙相滴定法

是指在水相和有機(jī)相中的滴定。如苯甲酸鈉的含量測(cè)定：

生成的苯甲酸不溶于水，終點(diǎn)pH突躍不明顯，不易觀察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚將滴定中產(chǎn)生的苯甲酸萃取入醚層。因此用雙相滴定可使反應(yīng)完全終點(diǎn)明顯。三、雙相滴定法

是指在水相和有機(jī)相41（一）直接紫外分光光度法

丙磺舒片的測(cè)定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系數(shù)法。

BP(1998)再鹽酸-乙醇,采用百分吸收系數(shù)法.

USP(24)用氯仿提取后，采用對(duì)照品比較法。四、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法四、紫外分光光度法42（二）離子交換-紫外分光光度法

氯貝丁酯及其制劑Ch.P(2000)采用酸堿滴定法；當(dāng)含有酸性雜質(zhì)對(duì)氯酚時(shí)，可采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質(zhì)后，在甲醇溶液中，226nm波長處，采用對(duì)照品比較法。

具體計(jì)算：W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)（二）離子交換-紫外分光光度法氯貝丁酯及其制劑43（三）柱分配色譜-紫外分光光度法

USP(24)采用此法同時(shí)測(cè)定ASA膠囊中ASA和SA。

1.SA的限量測(cè)定

色譜柱的制備；對(duì)照品溶液的制備；供試品溶液的制備。（三）柱分配色譜-紫外分光光度法USP44供試品液：CHCl3液洗脫液1：CHCl3洗脫液2：HAC-

乙醚硅藻土，F(xiàn)eCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供試品液：CHCl3-HCl液洗脫液1：HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脫液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-雜質(zhì)先洗脫2-SA后洗脫

max=306nmAu＜As1-雜質(zhì)先洗脫2-ASA后洗脫

max=280nmASA(mg)=C(Au/As)供試品液：CHCl3液洗脫液1：CHCl3硅藻土，F(xiàn)eCl345