3種濃度對(duì)春蘭宋梅大花蕓蘭株原球莖增殖和分化的影響

3種濃度對(duì)春蘭宋梅大花蕓蘭株原球莖增殖和分化的影響

長(zhǎng)期以來(lái)，蘭花的繁殖主要是自然的，繁殖新品種的效率很低。自植物組織培養(yǎng)技術(shù)成功應(yīng)用于蘭花種子的無(wú)菌培養(yǎng)以來(lái)，蘭屬植物的人工雜交、品種和江西蘭的人工雜交，可以顯著提高育種效率。人工雜交蘭花的后代是通過(guò)人工雜交獲得的。根據(jù)組織繁殖技術(shù)，菲比植物系統(tǒng)的培養(yǎng)形成了菲比植物系統(tǒng)。根據(jù)這些品種的形狀、花色和氣味，可以作為新品種進(jìn)行推廣和繁殖。目前，蘭屬植物主要在芳香蘭花和大花插蘭等外來(lái)植物中進(jìn)行，并取得了巨大成功。然而，春蘭、愛(ài)蘭等中國(guó)蘭花的繁殖并很少。中國(guó)蘭花如春蘭、大花插蘭等具有悠久的栽培歷史和深厚的文化內(nèi)涵。它的花朵優(yōu)雅，口感清新，深受人們喜愛(ài)。然而，中國(guó)蘭花和其他外國(guó)蘭花也存在缺陷。它們的花形小，顏色不漂亮。在中國(guó)蘭花的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中，花朵和外國(guó)蘭花是美麗的，而蘭花是美麗的。這些新品種深受公眾喜愛(ài)，有著廣闊的市場(chǎng)前景。蘭花種子無(wú)菌培養(yǎng)或莖尖組織培養(yǎng)都必須先形成原球莖或類原球莖,通過(guò)原球莖或類原球莖的增殖與分化才能形成蘭花小植株.植物激素對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、發(fā)育等一系列的生理變化和形態(tài)建成起著控制作用,對(duì)蘭花原球莖的增殖與分化也有重要影響.6-BA是廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)的一種細(xì)胞分裂素,多數(shù)研究結(jié)果表明6-BA能促進(jìn)不同蘭花原球莖的增殖與分化.但也有研究認(rèn)為6-BA并不能促大花蕙蘭等原球莖的增殖與分化,或者在不同的培養(yǎng)基中有不同表現(xiàn).6-BA對(duì)春蘭(Cymbidiumgoeringii)×大花蕙蘭(C.hybridium)種間雜種原球莖增殖與分化的作用未見(jiàn)報(bào)道.1材料和方法1.1原球莖增殖為教材以春蘭(C.goeringii)傳統(tǒng)品種“宋梅”為母本,以大花蕙蘭(C.hybridium)“粉姬”為父本,雜交獲得的一個(gè)株系的原球莖(由同一顆種子形成的的原球莖增殖而來(lái))為實(shí)驗(yàn)材料.1.2培養(yǎng)基接種情況實(shí)驗(yàn)共設(shè)4組:對(duì)照組(0mg組):1/2MS基本培養(yǎng)基第1組(1mg組):1/2MS基本培養(yǎng)基+1mg6-BA/L第2組(2mg組):1/2MS基本培養(yǎng)基+2mg6-BA/L第3組(4mg組):1/2MS基本培養(yǎng)基+4mg6-BA/L將各組培養(yǎng)基分裝于50ml三角燒瓶,每瓶20ml.每瓶接種10個(gè)4mm3原球莖塊,每組重復(fù)接種8瓶,4組共計(jì)32瓶.1.3培訓(xùn)將接種后的培養(yǎng)瓶放入溫室培養(yǎng).溫度為25±2℃,光照周期12h/d.1.4數(shù)據(jù)的測(cè)量與統(tǒng)計(jì)分析培養(yǎng)一個(gè)月后,測(cè)量統(tǒng)計(jì)每個(gè)培養(yǎng)瓶中原球莖相關(guān)項(xiàng)目的數(shù)據(jù).1.4.1原球莖鮮重的測(cè)定將培養(yǎng)瓶中的10塊原球莖取出,用水洗去原球莖上殘留的培養(yǎng)基,再用吸水紙吸干殘留水分,在精確度為0.1mg的電子天平上稱出每瓶中原球莖的鮮重,求出每組每瓶原球莖鮮重的平均值.原球莖鮮重與原球莖的生長(zhǎng)和增殖有關(guān).1.4.2原球莖個(gè)數(shù)增殖目測(cè)計(jì)數(shù)每個(gè)培養(yǎng)瓶中的10塊接種物培養(yǎng)一個(gè)月后所形成的原球莖總個(gè)數(shù),求出每組每瓶原球莖數(shù)目的平均值.每瓶原球莖數(shù)目的平均值可以作為原球莖個(gè)數(shù)增殖的指標(biāo).1.4.3葉芽分化根的分化指標(biāo)原球莖的分化包括葉芽的分化和根的分化.目測(cè)計(jì)數(shù)每個(gè)培養(yǎng)瓶中形成的葉芽與根的數(shù)目,求出每組每瓶葉芽數(shù)與根數(shù)的平均值,每瓶葉芽數(shù)與根數(shù)的平均值可作為原球莖葉芽和根的分化量的指標(biāo).每組每瓶葉芽的平均數(shù)與原球莖數(shù)目的平均數(shù)的比值作為葉芽分化率的指標(biāo),每組每瓶根的平均數(shù)與葉芽平均數(shù)的比值作為根的分化率的指標(biāo).1.4.4葉芽與根的平均長(zhǎng)度測(cè)量每個(gè)葉芽與根的長(zhǎng)度,計(jì)算出每個(gè)培養(yǎng)瓶中葉芽與根的平均長(zhǎng)度,由此再計(jì)算出每組葉芽與根的平均長(zhǎng)度.葉芽與根的平均長(zhǎng)度可作為其生長(zhǎng)速度的指標(biāo).1.4.5離散度分析與平均數(shù)量之間的多重比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析,并采用SSR法對(duì)各組間差異顯著性進(jìn)行多重比較.2結(jié)果與分析2.16-ba對(duì)原球莖鮮重的影響不同濃度6-BA對(duì)春蘭與大花蕙蘭雜種原球莖鮮重和個(gè)數(shù)的增殖,對(duì)葉芽和根的分化與生長(zhǎng)的影響,以及各組間差異顯著性(α=0.01)見(jiàn)表1.由表1可知,三個(gè)不同6-BA濃度組原球莖鮮重均比對(duì)照組大,1mg組、2mg組、4mg組比對(duì)照組分別大10.3%、37.2%、35.9%,2mg組、4mg組原球莖鮮重比1mg組大,2mg組與4mg組的原球莖鮮重接近.方差分析和多重比較的結(jié)果表明,2mg組、4mg組原球莖鮮重與1mg組相比有顯著差異,與對(duì)照組相比有極顯著差異,但對(duì)照組與1mg組間以及2mg組與4mg組間沒(méi)有顯著差異,表明一定范圍內(nèi)6-BA濃度的增加有利于雜種原球莖鮮重增加.原球莖鮮重的增加既與原球莖個(gè)數(shù)的增殖有關(guān),也與單個(gè)原球莖的生長(zhǎng)有關(guān).由表1可知,三個(gè)不同6-BA濃度組原球莖個(gè)數(shù)的平均數(shù)都大于對(duì)照組,1mg組、2mg組、4mg組比對(duì)照組分別大140%、243%、255%,2mg組、4mg組原球莖數(shù)大于1mg組,2mg組與4mg組的原球莖數(shù)接近.方差分析和多重比較的結(jié)果表明三個(gè)不同6-BA濃度組原球莖增殖數(shù)均極顯著高于對(duì)照組,4mg組、2mg組的增殖數(shù)顯著高于1mg組,但2mg組與4mg組間無(wú)顯著差異,說(shuō)明一定范圍內(nèi),增加培養(yǎng)基中6-BA的濃度有利于原球莖數(shù)量增殖.6-BA在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)原球莖鮮重和數(shù)目增殖都有促進(jìn)作用,但原球莖鮮重增加的幅度遠(yuǎn)小于數(shù)目增殖的幅度.如1mg組比對(duì)照組原球莖鮮重只增加了10.3%,而原球莖數(shù)增加了140%,4mg組比對(duì)照組原球莖鮮重只增加了35.9%,而原球莖數(shù)增加了255%,這表明有6-BA存在時(shí)原球莖的數(shù)目多但個(gè)體較小.2.26葉芽分化量ld由表1可知,三個(gè)不同6-BA濃度組原球莖葉芽分化量的平均數(shù)都大于對(duì)照組,1mg組、2mg組、4mg組比對(duì)照組分別大143%、217%、259%.方差分析顯示,1mg組、2mg組、4mg組原球莖的葉芽分化量均極顯著高于對(duì)照組,且2mg組、4mg組極顯著高于1mg組,但2mg組、4mg組之間無(wú)顯著差異,表明6-BA在一定濃度范圍內(nèi)明顯促進(jìn)原球莖葉芽分化量的增加.從表1也可看出,葉芽分化量與原球莖數(shù)目有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系,表明葉芽分化量的增加是以原球莖數(shù)目的增加為基礎(chǔ)的.但三個(gè)不同6-BA濃度組與對(duì)照組之間,以及三個(gè)不同6-BA濃度組之間,葉芽分化率(葉芽數(shù)與原球莖數(shù)的比值)的差異并不明顯,均在39%左右(見(jiàn)表1).由表1可知,1mg組、2mg組和4mg組葉芽長(zhǎng)度的平均數(shù)都小于對(duì)照組,且隨著6-BA濃度的增加而遞減,4mg組的葉芽呈明顯的矮縮狀.方差分析顯示各組之間均達(dá)極顯著差異,說(shuō)明6-BA抑制葉芽生長(zhǎng),濃度越高抑制作用越大.2.36a、c、ba抑制了根的分化由表1可知,1mg組、2mg組、4mg組每瓶中根分化量的平均數(shù)都小于對(duì)照組,方差分析顯示三個(gè)濃度組與對(duì)照組相比均達(dá)極顯著差異,但三個(gè)濃度組之間沒(méi)有顯著差異,說(shuō)明較低濃度的6-BA就嚴(yán)重抑制了根的分化.如果從根的分化率(根數(shù)與葉芽數(shù)與比值)來(lái)看,6-BA抑制根的分化作用更為明顯:對(duì)照組平均每瓶葉芽10.75個(gè),根9.75條,分化率達(dá)90.7%,即平均每個(gè)葉芽基本有一條根,多數(shù)是完整的小苗;而三個(gè)不同6-BA濃度組平均每瓶幾十個(gè)葉芽共只有約1條根,根分化率均只在3%左右,多數(shù)是無(wú)根的葉芽.由表1可知,1mg組、2mg組和4mg組根的平均長(zhǎng)度都小于對(duì)照組,說(shuō)明6-BA也抑制根的生長(zhǎng).方差分析顯示三個(gè)濃度組與對(duì)照組相比均達(dá)極顯著差異,但三個(gè)濃度組之間沒(méi)有顯著差異,說(shuō)明較低濃度的6-BA就嚴(yán)重抑制了根的生長(zhǎng).3-ba對(duì)原球莖生長(zhǎng)、生長(zhǎng)、生長(zhǎng)的抑制作用6-BA是一種細(xì)胞分裂素類的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,已知有促進(jìn)植物離體組織細(xì)胞分裂和體積增大、促進(jìn)愈傷組織不定芽分化、抑制莖的伸長(zhǎng)和根的分化等多種生理作用.上述結(jié)果表明,一定濃度范圍內(nèi)的6-BA對(duì)春蘭與大花蕙蘭雜種原球莖的鮮重增加、個(gè)數(shù)增殖、葉芽分化量的增加有促進(jìn)作用,但對(duì)葉芽生長(zhǎng)、根的分化與生長(zhǎng)有抑制作用,基本反映了6-BA的生理作用特點(diǎn).在不含6-BA的對(duì)照組中,雖然原球莖與葉芽的數(shù)量比三個(gè)不同6-BA濃度組少,但其原球莖的個(gè)體較大,葉芽多數(shù)形成有根的完整小苗,葉芽和根的長(zhǎng)度也明顯大于三個(gè)不同6-BA濃度組.表明春蘭與大花蕙蘭雜種原球莖在不含外加6-BA的條件下也能正常分化成苗,而且苗的生長(zhǎng)速度更快、質(zhì)量更好.因此在蘭花原球莖的培養(yǎng)過(guò)程,是否添加6-BA等細(xì)胞分裂素,可視培養(yǎng)目的而定.如果為了蘭花的雜交育種,我們希望盡早得到更多不同基因型的雜交苗群體,以便盡早從中篩選到符合育種目標(biāo)