《生物技術(shù)制藥》A卷答案

PAGEPAGE1《生物技術(shù)制藥》A卷答案一名詞解釋（每題4分，共10題，共40分）１.integratedbioreaction-separationtechnology生物反應(yīng)和產(chǎn)物分離偶聯(lián)技術(shù)根據(jù)生物反應(yīng)和產(chǎn)物特性，結(jié)合產(chǎn)物分離單元操作技術(shù)，及時(shí)的移去發(fā)酵液中的代謝物，一方面解除產(chǎn)物和副產(chǎn)物對發(fā)酵過程中細(xì)胞的生長或產(chǎn)物形成的抑制作用，提高發(fā)酵產(chǎn)量和生產(chǎn)效率，另一方面可以從復(fù)雜的分離系統(tǒng)中及時(shí)回收產(chǎn)物的操作技術(shù)。２.Metabolicengineering代謝工程指利用多基因重組技術(shù)有目的的對細(xì)胞代謝途徑進(jìn)行修飾，改造，改變細(xì)胞特性，并且與細(xì)胞的基因調(diào)控，代謝調(diào)控及生化工程相結(jié)合，為實(shí)現(xiàn)構(gòu)造新的代謝途徑，生產(chǎn)特定目的產(chǎn)物而發(fā)展起來的一個(gè)新的學(xué)科領(lǐng)域。其研究的目的在于構(gòu)建具有新代謝途徑，能生產(chǎn)特定目的產(chǎn)物或具有過量生產(chǎn)能力的工程菌，用于工業(yè)生產(chǎn)。根據(jù)具體微生物代謝特性可以采用不同的設(shè)計(jì)，可分為改變代謝，擴(kuò)展代謝途徑和構(gòu)建新的代謝途徑等三種。３.genglibrary基因文庫一個(gè)生物體的基因組DNA用限制性內(nèi)切酶部分酶切后，將酶切片段插入到載體DNA分子中，所有這些插入了基因組DNA片段的載體分子的集合體，將包含這個(gè)生物體的整個(gè)基因組，也就是構(gòu)成了這個(gè)生物體的基因文庫。將這些載體導(dǎo)入到受體細(xì)菌或細(xì)胞中，這樣每個(gè)細(xì)胞就包含了一個(gè)基因組DNA片段與載體重組DNA分子，經(jīng)過繁殖擴(kuò)增，許多細(xì)胞一起包含了該生物全部基因組序列，我們將這一個(gè)集合體叫做基因文庫。４.reversedphasechromatography,RPC反相色譜指利用溶質(zhì)分子中非極性基團(tuán)與非極性固定相之間相互作用力的大小，以及溶質(zhì)分子中極性基團(tuán)與流動相中極性分子之間在相反方向作用力的大小差異進(jìn)行分離的。反向色譜和疏水色譜的差異在于前者在有機(jī)相中進(jìn)行，蛋白質(zhì)經(jīng)過反相流動相與固定相有時(shí)會發(fā)生部分變性，而后者通常在水溶液中進(jìn)行，蛋白質(zhì)在分離過程中一般仍保持其天然構(gòu)象。５.bystandereffect旁觀者效應(yīng)在載體病毒中加入tk基因，并讓它在腫瘤細(xì)胞中特異性的表達(dá)該基因，在基因治療的同時(shí)，再輔以這類藥物治療，就可以大大提高加強(qiáng)病毒對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，而且由于死亡的細(xì)胞釋放的tk酶又能進(jìn)一步轉(zhuǎn)化藥物前體，因此可以將對細(xì)胞的殺傷效果擴(kuò)展到附近未被病毒感染的細(xì)胞，形成所謂的旁觀者效應(yīng)。６.phagedisplayantibodylibrarytechniques噬菌體抗體庫將抗體的基因插入到噬菌體或病毒編碼外殼蛋白質(zhì)的基因中，然后以融合蛋白質(zhì)的形式與噬菌體衣殼蛋白一起表達(dá)在噬菌體或病毒的表面，從而被特異的抗原篩選出來。是以絲狀噬菌體展示技術(shù)與抗體結(jié)合文庫技術(shù)向結(jié)合的技術(shù)。７.intrabody細(xì)胞內(nèi)抗體亦稱內(nèi)抗體，主要是指在細(xì)胞內(nèi)合成并作用于細(xì)胞內(nèi)組分的抗體。主要應(yīng)用為1分子功能的研究；2下調(diào)細(xì)胞因子受體的表達(dá)；3抑制細(xì)胞內(nèi)癌蛋白的活性；4抑制病毒的復(fù)制。因此有用于基因治療的前景，研究較多的是用細(xì)胞內(nèi)抗體抑制I型，其中抗gp120的Fab段和抗TatScFv已進(jìn)入臨床試用８.transgenicanimal轉(zhuǎn)基因動物采用基因工程技術(shù)把外源目的基因?qū)雱游锷臣?xì)胞、胚胎干細(xì)胞和早期胚胎，并在受體動物的染色體上穩(wěn)定整合，又經(jīng)過各種發(fā)育途徑能把外源目的基因穩(wěn)定地傳給子代，通過這項(xiàng)技術(shù)所獲得的動物即為轉(zhuǎn)基因動物。９.selectionbasedonphageinfectivity選擇性感染篩選把噬菌體感染能力的恢復(fù)與否來作為篩選手段叫做選擇性感染篩選。１０.monolayercellculture單層細(xì)胞培養(yǎng)法是將動物細(xì)胞組織塊中粘連在一起的細(xì)胞用酶法或物理分散法分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)計(jì)數(shù)、稀釋后，接種于無菌培養(yǎng)液中，37℃，5％CO2空氣下進(jìn)行原代培養(yǎng)，細(xì)胞即開始生長并逐漸形成單層。二填空題（每空1分，共20空，共20分）1產(chǎn)物產(chǎn)量PH值糖氨基氮菌絲形態(tài)2質(zhì)譜法3加入緩沖劑4貼壁依賴性細(xì)胞非貼壁依賴性細(xì)胞兼性貼壁細(xì)胞55’-3’聚合酶活性3’6抗生素7藥物濃度溫度濕度氧光照8大腸桿菌不能使人的促紅細(xì)胞生長素糖基化三選擇題（每題1分，共10題，共10分）1C2C3B4A5C6D7C8D9A10D四簡答題（每題10分，共3題，共30分）1分批發(fā)酵，補(bǔ)料分批發(fā)酵，半連續(xù)培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)的區(qū)別以及各自的優(yōu)缺點(diǎn)。答①分批發(fā)酵是將發(fā)酵培養(yǎng)基組分一次性投入發(fā)酵罐，經(jīng)滅菌，接種和發(fā)酵后，再一次性的將發(fā)酵液放出的一種間歇式發(fā)酵操作類型，又稱間歇式發(fā)酵。分批發(fā)酵是一種準(zhǔn)封閉系統(tǒng)，在發(fā)酵過程中出了控制溫度，不斷進(jìn)行通氣和加入酸堿溶液調(diào)節(jié)PH外，與外界沒有其他物料交換。這是目前最為廣泛使用的一種發(fā)酵方式。(2分）缺點(diǎn)：開始時(shí)基質(zhì)濃度很高，到后期產(chǎn)物濃度很高，對發(fā)酵不利。（1分）②補(bǔ)料-分批發(fā)酵：是在發(fā)酵過程中間歇或連續(xù)的以某種方式補(bǔ)入新鮮料液，克服由于養(yǎng)分不足，導(dǎo)致發(fā)酵過早結(jié)束的問題。優(yōu)點(diǎn)：由于只有料液的輸入，沒有輸出，因此發(fā)酵液的體積在增加。與分批發(fā)酵相比，通過向培養(yǎng)系統(tǒng)中補(bǔ)充物料，可以使培養(yǎng)液中的底物濃度較長時(shí)間的保持在一定的范圍內(nèi)，既保證了菌體細(xì)胞的生長需要，又不造成阻遏抑制等不良影響，從而達(dá)到提高產(chǎn)物濃度的得率的目的。（1分）缺點(diǎn):容易造成產(chǎn)物的積累，容易染菌，而且中間補(bǔ)料會造成發(fā)酵液的稀釋。（1分）③半連續(xù)培養(yǎng)：在補(bǔ)料分批培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加上間歇放掉部分發(fā)酵液進(jìn)入下游提取的發(fā)酵操作方式成為半連續(xù)發(fā)酵。這種培養(yǎng)方法的開始階段如同常規(guī)分批發(fā)酵，但在培養(yǎng)和發(fā)酵結(jié)束時(shí)，并不將發(fā)酵液全部放出，而僅放出其中一部分，同時(shí)補(bǔ)入同體積的新鮮培養(yǎng)基或必要的成分，再繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，如此可反復(fù)多次。（1分）優(yōu)點(diǎn)：不僅可以補(bǔ)充養(yǎng)分和前體，而且有害代謝物質(zhì)被稀釋，有利于產(chǎn)物的繼續(xù)合成。缺點(diǎn)：首先放掉發(fā)酵液的同時(shí)會損壞未被利用的營養(yǎng)物質(zhì)和正處于代謝活躍狀態(tài)的菌體細(xì)胞。其次中間補(bǔ)料會造成發(fā)酵液的稀釋，增加下游提取液的體積，再次，發(fā)酵液中一些由代謝產(chǎn)生的前體有可能丟失，造成發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)量的影響，此外染菌問題也是影響發(fā)酵過程能否進(jìn)行的重要因素。（1分）④連續(xù)培養(yǎng)：是當(dāng)發(fā)酵過程進(jìn)行到一定階段時(shí)一邊連續(xù)補(bǔ)充發(fā)酵培養(yǎng)液，一邊又以相同的流速放出發(fā)酵液，維持發(fā)酵液原來的體積的發(fā)酵方式，微生物在穩(wěn)定狀態(tài)下生長和代謝。優(yōu)點(diǎn)：與分批發(fā)酵相比，連續(xù)發(fā)酵使微生物的生長和代謝活動保持旺盛的穩(wěn)定狀態(tài)，從而使產(chǎn)率和產(chǎn)品質(zhì)量也相應(yīng)保持穩(wěn)定；能夠更有效的實(shí)現(xiàn)機(jī)械化和自動化，降低勞動強(qiáng)度；減少設(shè)備清洗，準(zhǔn)備和滅菌等非生產(chǎn)占用時(shí)間，提高設(shè)備利用率。(2分）缺點(diǎn)：首先由于是開放體系，加上發(fā)酵周期長，容易污染雜菌。其次生長周期連續(xù)發(fā)酵中，微生物易發(fā)生變異。再次，對設(shè)備。儀器及控制元件的技術(shù)要求較高；最后，粘性絲狀菌菌體容易附著在器壁上生長或發(fā)酵液內(nèi)結(jié)團(tuán)，帶來操作困難?？傊?，連續(xù)發(fā)酵營養(yǎng)物利用率低于單批培養(yǎng)，一般只能維持?jǐn)?shù)月至一年。（1分）2.酶分離純化的一般程序及其對應(yīng)的方法答1原材料的選擇和預(yù)處理為了使得分離純化過程容易進(jìn)行，減少生產(chǎn)成本，一般選擇含目的酶豐富的原料。同時(shí)也要考慮到原料的來源，取材方便經(jīng)濟(jì)等因素。從微生物發(fā)酵液中提取酶的第一個(gè)步驟是發(fā)酵液的預(yù)處理，即采用沉淀法，變性法，絮凝和凝聚等方法出去發(fā)酵液中的無機(jī)離子，雜蛋白等，及采用活性碳，離子交換樹脂等除去色素及其他一些物質(zhì)，以便后續(xù)各步操作。（4分）2酶的分離又稱初步純化或提取，一般采用鹽析，等電點(diǎn)沉淀，有機(jī)溶劑沉淀和離心分離等技術(shù)將目的酶與其他蛋白分離開來。采用的方法一般簡便，處理量大。（2分）3酶的精制