鈣指示劑分光光度法測定微量鈣

目錄一試驗部分……………(1--2)1.1重要儀器和試劑1.2試驗措施二試驗成果與討論……（2-4）2.1繪制吸取曲線選擇測定波長2.2有色配合物穩(wěn)定性試驗2.3溶液酸度的影響2.4顯色劑的用量2.5配合物的構(gòu)成2.6工作曲線2.7共存離子的影響及干擾的消除三樣品分析………（4-16）1.化學(xué)試劑：<1>硫酸鈉<2>氯化鉀<3>氯化鈉<4>硝酸鈉2.水樣的分析<1>工業(yè)水<2>自來水四結(jié)論…………(17)五參照文獻(xiàn)……………（17）六道謝…………………（23）鈣指示劑分光光度法測定微量鈣[摘要]：研究了鈣指示劑與鈣離子作用的顯色體系，試驗了影響該顯色體系的敏捷度和穩(wěn)定性的各項原因，確定了最佳操作條件，試驗表明，在pH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液介質(zhì)中，鈣與3ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的鈣指示劑反應(yīng)10min后顯色完全且到達(dá)穩(wěn)定，配合物所形成的配位比為1:1,最大吸取波長λ為620nm，措施的表觀摩爾吸光系數(shù)ε為2.15X10l/(mol*cm)，在此波長及最佳操作條件下，鈣含量在0~1.5μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)符合比爾定律。在試驗了13種常見共存離子干擾的基礎(chǔ)上對水樣及化學(xué)試劑硝酸鈉、氯化鉀、氯化鈉、硫酸鈉，中微量鈣的測定，回收率在98.0%~100%之間，成果滿意。［關(guān)鍵詞］：鈣指示劑；分光光度法；鈣的測定CalciumindicatorspectrophotometricmethoddeterminationmicrocalciumAbstract：Hasstudiedthecalciumindicatorandthecalciumionfunctioncoloredsystem,experimentedhasaffectedthiscoloredsystem'ssensitivityandthestableeachfactor,haddeterminedthebestoperatingcondition,theexperimentindicatedthatinpHwasin5.4ethanoicacid-sodiumacetatecushionmedium,thecalciumandthecalciumindicatorformedthecomplexcompoundcoordinatecomparedtowas1:1,inthewavelengthwas620nm,thesystemapparentmolarabsorptionabsorptivityis2.15X10000l/(mol*cm),underthiswavelengthandthebestoperatingcondition,thecalciumcontentconformedtotheBilllawin0～1.5μg/mlmassconcentrationscope.Inexperiments13kindofcommoncoexistenceiondisturbanceinthefoundationtothewatersampleandthechemicalreagentnitrateofsoda,thepotassiumchloride,thesodiumchloride,thesodiumsulfate,themicrocalcium'sdetermination,theresultissatisfied.Keyword：calciumindicator；Calciumdetermination；Spectrophotometricmethod鈣對細(xì)胞的新陳代謝等生命活動起主導(dǎo)調(diào)控作用，科學(xué)已經(jīng)證明這說法。1、鈣是生命進(jìn)化之源：10億年前有軟體動物，后來通過鈣的積聚，4億年前出現(xiàn)魚類。近代人壽命增長很快，但基因的進(jìn)化比較慢，對現(xiàn)代病的控制基因未能體現(xiàn)，癌癥控制基因尚未形成。鈣是形成生命階梯進(jìn)化關(guān)鍵性物質(zhì)，是生命進(jìn)化之源。同樣是基因進(jìn)化之源。2、鈣離子參與人體所有生命活動。3、是人體的物質(zhì)基礎(chǔ)，不管是硬件還是軟件，鈣是不可缺乏的重要成分。4、是細(xì)胞的物質(zhì)基礎(chǔ)，不管是細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核均具有鈣，線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)都具有豐富的鈣。5、是基因的物質(zhì)基礎(chǔ)，有鈣結(jié)合蛋白基因，鈣泵基因等。6、是信號系統(tǒng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，人體內(nèi)信號、信息、調(diào)控、密碼均與鈣振蕩有關(guān)。7、細(xì)胞內(nèi)鈣的物質(zhì)波，給基因增長能量，變化基因內(nèi)環(huán)境，使基因的復(fù)制、調(diào)控、修復(fù)功能正常化。99%的鈣分布在骨骼和牙齒中，是構(gòu)成機(jī)體組織的重要成分，并使骨骼有一定的硬度，起著支撐身體的作用。1%的鈣分布在血液、細(xì)胞間液及軟組織中，具有維持腦及心臟功能正常，承擔(dān)所有正常細(xì)胞生理狀況的調(diào)整及分泌激素、凝固血液等作用，細(xì)胞沒有鈣便不能生存。鈣在人體中的作用如下：1.維持細(xì)胞的生存和功能。細(xì)胞分裂繁殖，數(shù)目漸增，與單細(xì)胞漸漸變化功能，都需要鈣的參與。鈣自細(xì)胞外進(jìn)入，喚醒細(xì)胞開始工作，否則細(xì)胞一直保持睡眠狀態(tài)。鈣進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)出電波，和充斥全身的神經(jīng)纖維，形成人體情報網(wǎng)絡(luò)，信息的輸入通過鈣的活動才傳到身體各部位。內(nèi)分泌腺細(xì)胞分泌激素時也必需由鈣離子通過血液，到器官中傳遞信息。細(xì)胞的單個功能和互相聯(lián)絡(luò)的網(wǎng)絡(luò)都不能缺乏鈣，甚至老化、疾病、死亡都可以用鈣的平衡闡明。充足攝入鈣質(zhì)，細(xì)胞才能保持健康活躍，人也才能蓬勃和有朝氣。2．減少神經(jīng)細(xì)胞的興奮性，因此說鈣是一種天然的鎮(zhèn)靜劑。缺鈣會導(dǎo)致神經(jīng)性偏頭痛（占女性的10%--20%）、煩躁不安、失眠。對嬰兒會引起夜驚、夜啼、盜汗。缺鈣還會誘發(fā)小朋友的多動癥。

3．強(qiáng)化神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)功能。例如說你的手碰到一杯水，尤其熱，很快就放下，這中間就有一種神經(jīng)系統(tǒng)的運(yùn)作過程：感受器（皮膚）—傳人神經(jīng)—中樞神經(jīng)—傳出神經(jīng)—效應(yīng)器（肌肉）。其中感受和沖動怎樣傳遞給神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞又怎樣傳出去?這中間有一種物質(zhì)叫做神經(jīng)遞質(zhì)。鈣有助于神經(jīng)遞質(zhì)的產(chǎn)生和釋放。

4．減少（調(diào)整）細(xì)胞和毛細(xì)血管的通透性。缺鈣易導(dǎo)致過敏，水腫等。

5．增進(jìn)體內(nèi)多種酶的活動。缺鈣時，腺細(xì)胞的分泌作用減弱。鈣還是酶的激活劑。6．鈣有鎮(zhèn)靜作用，當(dāng)體液中鈣濃度減少時，神經(jīng)和肌肉的興奮性增高，肌肉出現(xiàn)自發(fā)性收縮，嚴(yán)重時出現(xiàn)抽搐，當(dāng)體液中鈣濃度增長時，則克制神經(jīng)和肌肉的興奮性。7．鈣對維持體內(nèi)酸堿平衡，維持和調(diào)整體內(nèi)許多生化過程是必需的，它能增進(jìn)體內(nèi)多種酶的活動，是多種酶激活劑,如脂肪酶、淀粉酶等均受鈣離子的調(diào)整。當(dāng)體內(nèi)鈣缺乏時蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物不能充足運(yùn)用，導(dǎo)致營養(yǎng)不良、厭食、便秘、發(fā)育緩慢、免疫功能下降。

8．鈣為一種凝血因子，在凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟笗r起到催化作用，然后凝血酶使纖維蛋白原聚合為纖維蛋白使血液凝固。鈣與磷脂結(jié)合，維持細(xì)胞膜的完整性和通透性。鈣離子能使體液正常通過細(xì)胞膜，一般用來緩和由于過敏等癥所引起的細(xì)胞膜滲透壓的變化。平常生活中，假如鈣攝入局限性，人體就會出現(xiàn)生理性鈣透支，導(dǎo)致血鈣水平下降。當(dāng)血鈣水平下降到一定閾值時，就會促使甲狀旁腺分泌甲狀旁腺素。甲狀旁腺素具有破骨作用，即骨骼中的鈣離子被反抽出來，藉以維持血鈣水平。在缺鈣初期，缺鈣程度比較輕的時候，只是發(fā)生可逆性生理功能異常，如心臟出現(xiàn)室性早博、情緒不穩(wěn)定、睡眠質(zhì)量下降等反應(yīng)。持續(xù)的低血鈣，尤其是中年后來，人體長期處在負(fù)鈣平衡狀態(tài)，導(dǎo)致甲狀旁腺分泌亢進(jìn)，首當(dāng)其沖的是骨骼，由于骨骼中的鈣離子持續(xù)大量釋出，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)增生。另首先，在甲狀旁腺持續(xù)升高的狀況下，由于甲狀旁腺素具有促使細(xì)胞膜上鈣通道啟動而關(guān)不住，以及阻抑鈣泵，使鈣泵功能減弱，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣含量升高。持續(xù)的細(xì)胞內(nèi)高鈣，激發(fā)細(xì)胞像失控的野馬，無節(jié)制亢進(jìn)，導(dǎo)致細(xì)胞能量耗竭。與此同步，代謝廢物又得不到及時消除，便會構(gòu)成自身傷害，致使細(xì)胞趨向反常的鈣化衰亡。由于缺鈣，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)增生、小朋友佝僂病、手足抽搐癥以及高血壓、腎結(jié)石、結(jié)腸癌、老年癡呆等疾病的發(fā)生。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，缺鈣會導(dǎo)致人體生理障礙，進(jìn)而引起一系列嚴(yán)重疾病。這里我們列舉某些與缺鈣有關(guān)的重要疾?。?/p>

高血壓缺鈣會導(dǎo)致反常的鈣內(nèi)流，導(dǎo)致鈣在血管內(nèi)壁細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞內(nèi)反常積貯，引起血管收縮，血管外周阻力增大，血壓異常升高。持續(xù)的鈣內(nèi)流，促使血管壁彈性纖維和內(nèi)皮細(xì)胞鈣化、變性、甚至出現(xiàn)襲痕、斷裂。外周阻力深入增大，血壓持續(xù)升高。由于血管內(nèi)壁損傷，脂類通透性增大，血脂浸入血管壁的損傷處，導(dǎo)致膽固醇和其他脂類物質(zhì)在血管壁上沉積。血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)損傷而分泌內(nèi)皮素和某些激活因子，引起血小板和白細(xì)胞在血管壁上粘附、匯集。血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，又激活賠償性生理反應(yīng)，促使血管平滑肌和成纖維細(xì)胞反常增生和內(nèi)膜下移位，致使動脈管壁增厚、變硬，于是層層疊疊、大大小小的動脈粥樣硬化形成了。研究表明，對于某些高血壓病人來說，不用藥物而是增長鈣制劑的量，有助于控制高血壓。美國南加利福尼亞大學(xué)醫(yī)學(xué)院的防止醫(yī)學(xué)副專家杰姆斯·德威爾對國家記錄中心為期的調(diào)查成果進(jìn)行計算，發(fā)現(xiàn)每天用鈣量為1300毫克的人比每天用鈣量為300毫克的人患高血壓的比例低12％。

冠心病許多研究表明，鈣離子還能減少血中膽固醇的濃度，從而起到保護(hù)心臟的作用。有人觀測，讓膽固醇含量較高的男子食用含鈣量低的食物10天（每天410毫克鈣），檢查他們膽固醇含量；然后再讓他們吃含鈣量高的食物（每天2200毫克鈣）。成果高鈣食物能減少膽固醇總量6％，其中低密度脂蛋白減少11％，而對人體有益的高密度脂蛋白數(shù)量則保持不變。專家認(rèn)為，長時期嚴(yán)重缺鈣會引起冠心病。

尿路結(jié)石數(shù)年來，醫(yī)生告訴腎結(jié)石病人限制食用鈣，理由是鈣為結(jié)石的一種重要成分。不過，美國哈佛大學(xué)的醫(yī)學(xué)專家通過數(shù)年研究后發(fā)現(xiàn)，這也許是人類在認(rèn)識上的一種大錯誤。他們提出，減少腎結(jié)石危險的措施恰恰是增長鈣攝入量。大家懂得，飲食中，尤其是蔬菜中具有大量草酸鹽，一般狀況下，草酸鹽在腸道內(nèi)與鈣結(jié)合成草酸鈣，隨糞便排出。假如飲食中鈣的攝入局限性，就會使多出草酸鹽，經(jīng)腸腔吸取而進(jìn)入血液，最終由腎臟提出。假如人體長期處在負(fù)鈣平衡狀態(tài)，腎臟細(xì)胞不可防止會出現(xiàn)細(xì)胞反常鈣內(nèi)流損傷，腎臟回吸取功能減退，尿鈣排出增多。高鈣尿液與尿中草酸鹽結(jié)合，形成大大小小草酸鈣結(jié)石。假如不忌鈣，而是采用補(bǔ)鈣措施，尤其是補(bǔ)充水溶性鈣劑，那么，在胃腸道中鈣離子與飲食中草酸鹽合成草酸鈣，隨糞便排出。此外，補(bǔ)充足量的鈣可扭轉(zhuǎn)負(fù)鈣平衡，腎臟回吸取功能正常，尿鈣排出減少，結(jié)石的也許性也減少。

結(jié)（直）腸癌高脂飲食會過度刺激膽汁的分泌，過量的脂肪酸和膽汁酸是引起結(jié)（直）腸細(xì)胞癌變的觸發(fā)劑。有研究證明，患有結(jié)腸直腸癌的病人，血清膽汁酸的含量比正常人高出1倍左右，而癌變細(xì)胞中膽汁酸含量比正常細(xì)胞高3倍以上。假如用高膽汁酸的飼料喂小白鼠，結(jié)（直）腸癌的發(fā)生率明顯增長。假如補(bǔ)充足量的碳酸鈣，鈣離子與脂肪酸和膽汁酸結(jié)合，形成不溶性脂肪酸鈣和膽汁酸鈣，隨糞便排出，從而消除癌變的觸發(fā)因子，就能阻抑腸細(xì)胞癌變。

手足搐搦癥這種疾病是因嬰幼兒體內(nèi)缺乏維生素D而使腸道對鈣、磷的吸取發(fā)生障礙。此外由于甲狀旁腺未能及時分泌更多甲狀旁腺素，以致血鈣減少，引起神經(jīng)肌肉的興奮性增高，出現(xiàn)全身驚厥、手足痙攣和喉痙攣，常伴發(fā)陣發(fā)性呼吸暫停和短時間窒息，引起缺血缺氧性腦損傷。據(jù)醫(yī)學(xué)觀測，大腦神經(jīng)對缺血缺氧最為敏感，窒息10秒鐘，神經(jīng)功能開始出現(xiàn)障礙；窒息數(shù)分鐘，就會出現(xiàn)血管神經(jīng)不可逆轉(zhuǎn)的損傷，輕則影響孩子智力，重則導(dǎo)致低能、癡呆。因此，做好手足搐搦癥的防止工作是十分重要的，不管是母乳喂養(yǎng)還是人工喂養(yǎng)的孩子，都必須補(bǔ)充足夠量的鈣。除了補(bǔ)鈣外，還要增長戶外活動，多曬太陽和補(bǔ)充適量維生素D，以防止手足搐搦癥的發(fā)生。

骨質(zhì)疏松人體長期缺鈣而引起負(fù)鈣平衡的另一種嚴(yán)重后果——骨質(zhì)疏松。諸多研究表明，增長鈣的攝入量對骨質(zhì)損耗有著重要減緩作用，在減少由骨質(zhì)疏松引起的骨折率方面也有著重要作用，尤其在食用鈣的同步服用維生素D，效果尤其明顯。諸多專家認(rèn)為，補(bǔ)鈣應(yīng)在青春期就開始，這時候骨質(zhì)正在形成，效果會更好。

鈣離子廣泛存在于自然界中，人體血清中鈣離子濃度是重要的生理指標(biāo)之一，許多疾病都與血清中鈣離子濃度有關(guān)。1883年Ringer發(fā)現(xiàn)鈣離子是引起心臟收縮不可缺乏的原因以來,人們就逐漸認(rèn)識到，鈣離子在生物體中的功能,尤其是在細(xì)胞中的功能。因此迅速精確地測定血清中鈣離子濃度具有十分重要的臨床分析意義與理論價值。目前測定鈣離子濃度大體有如下幾種措施：1.分光光度法。2.Clark法采用草酸直接沉淀鈣離子,然后用原則高錳酸鉀溶液滴定。3.Roweyu于1929年報道的光度法,是一種先用磷酸鹽沉淀,然后進(jìn)行比色測定的措施。4.原子吸取和火焰分光光度法。5.熒光光度法,是用熒光鈣試劑或類似的熒光化合物測定血清中鈣離子濃度的措施。6.離子選擇電極法。本文研究了分光光度法測定水和化學(xué)試劑中微量鈣離子濃度的措施。水和化學(xué)試劑中微量鈣含量的測定在許多工業(yè)部門都是很重要和常常性的，目前已經(jīng)有的措施較多，但仍不能滿足實(shí)際需求，如EDTA絡(luò)合滴定法和重量法等敏捷度均較低；離子選擇性電極所用的硬度電極性能不穩(wěn)定且使用壽命短不受歡迎；原子吸取光譜法儀器價格較高不便普及，具有較高敏捷度的分光光度法研究了鈣指示劑與鈣的顯色反應(yīng)，確定了該措施測定水和化學(xué)試劑中鈣的最佳條件后，用于化學(xué)試劑中微量鈣和合成的有機(jī)磷水處理劑對工業(yè)循環(huán)水處理后的鈣測定，可得到很好成果，與EDTA絡(luò)合滴定法比較，成果一致，對于空白鈣低的樣品，顯示出較高的敏捷度。試驗成果表明,在pH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖介質(zhì)中，鈣指示劑與鈣生成藍(lán)色1：1的配合物，在波長λ為620nm，體系表觀摩爾吸光系數(shù)ε為2.15X10l/(mol*cm)，在此波長及最佳操作條件下，鈣含量在0～1.5μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)符合比爾定律?？梢姶舜胧┯糜谖⒘库}的測定,具有穩(wěn)定性好、敏捷度和精確度高、試劑和儀器廉價、操作簡便迅速,成果令人滿意等長處一、試驗部分1.1重要儀器和試劑（1）721型分光光度計一臺；（2）PHS—10B型酸度計（上海第三分析儀器廠）；（3）pH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；（4）0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑：稱取0.10g鈣指示劑〔2-羥基-1-(2-羥基-4-磺酸-1-萘偶氮)-3-萘甲酸〕(C21H14N2O7S)或其鈉鹽與100g在（5）100.0μg/ml鈣儲備液：精確稱取經(jīng)2h在120攝氏度烘干的基準(zhǔn)AR級碳酸鈣0.2497g于小燒杯中，加少許去離子水潤濕，緩慢加入3mol/l鹽酸使之完全溶解，煮沸除去二氧化碳，冷卻后轉(zhuǎn)入容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻。（6）10.00μg/ml鈣原則溶液：移取100.0μg/ml鈣儲備液10.00ml于100ml容量瓶中，并用去離子水稀釋至刻度，搖勻。1.2試驗措施于100ml的潔凈容量瓶中，依次加入10.00μg/ml鈣原則溶液10.00ml，3ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用水稀釋至刻線，搖勻，放置10min，用1cm吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定顯色液的吸光度。二、試驗成果與討論2.1繪制吸取曲線選擇測定波長取兩個100ml潔凈的容量瓶，移取10.00μg/ml鈣原則溶液10.00ml于其中一種100ml容量瓶中，然后在兩個容量瓶中依次加入3ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻，放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為550-660nm之間，每隔10nm測定一次吸光度，在峰值附近每隔2nm測定一次吸光度。以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)確定最大吸取波長。鈣的吸取曲線λ550560570580590600610616A0.2390.2740.2900.3310.3740.4430.4970.518λ618620622624630640650660A0.5250.5280.5260.5220.5000.4510.4020.361吸光度與波長的表（1）由以上的數(shù)據(jù)與曲線可知，顯色體系的最大吸取峰在620nm處。2.2有色配合物穩(wěn)定性試驗取兩個100ml潔凈的容量瓶，移取10.00μg/ml鈣原則溶液10.00ml于其中一種100ml容量瓶中，然后在兩個容量瓶中依次加入3ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻，放置5min，立即用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定吸光度，后來隔10、20、30、60、420min各測定一次吸光度。t/min510203060420A0.5250.5280.5280.5280.5270.527吸光度與顯色時間表（2）體系在室溫下很快顯色，放置5min后可顯色完全并到達(dá)穩(wěn)定，本試驗用放置10min后測定，顯色完全后體系至少可穩(wěn)定7h。2.3溶液酸度的影響取11個100ml潔凈的容量瓶，各加入10.00μg/ml鈣原則溶液10.00ml，然后依次加入3ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑，5mlpH為3.6、4.0、4.4、4.8、5.0、5.2、5.4、5.8、6.2、6.6、7.0、7.4的不一樣酸度的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。編號1＃2＃3＃4＃5＃6＃pH3.64.04.44.85.05.2A0.2010.3250.4300.5020.5200.525編號7＃8＃9＃10＃11＃12＃pH5.45.86.26.67.07.4A0.5300.5380.5440.4820.3630.223吸光度與pH表（3）由表可知，溶液的pH在3.6~7.4之間逐漸，但在pH=4.80~6.20范圍內(nèi)吸光度最大且穩(wěn)定，試驗本試驗用pH為5.40的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液控制酸度，用量在5ml左右可把pH控制在合適范圍。2.4顯色劑的用量取5個100ml潔凈的容量瓶，各加入10.00μg/ml鈣原則溶液10.00ml，然后依次加入0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。編號1＃2＃3＃4＃5＃6＃V/ml01.02.03.04.05.0A00.2640.4960.5280.5280.528吸光度與顯色劑的用量表（4）因此：對顯色劑用量為0,1.0,2.0,3.0，4.0，5.0mL時進(jìn)行了試驗，試驗表明：0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）鈣指示劑用量在2.0—5.0ml內(nèi)吸光度最大且穩(wěn)定，試驗選用3ml2.5配合物的構(gòu)成取5個100ml潔凈的容量瓶，各加入10.00μg/ml鈣原則溶液5.00ml，然后依次加入含鈣的質(zhì)量為25、50、75、100、125μg的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。m/μg255075100125A0.1320.2480.2670.2670.267吸光度與配合物的構(gòu)成的表（5）因此：配合物的構(gòu)成由摩爾比法可測得配合物中鈣與鈣指示劑的絡(luò)合比為1：1。2.6工作曲線取7個100ml潔凈的容量瓶，各加入10.00μg/ml鈣原則溶液0、3.00、6.00、9.00、12.00、15.00、18.00ml，然后依次加入3ml0.1%的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。編號1＃2＃3＃4＃5＃6＃7＃V/ml0.003.006.009.0012.0015.0018.00A00.1610.3200.4770.6330.7900.95工作曲線表（6）因此在選定試驗條件下，鈣含量在0~1.5μg/ml內(nèi)符合比爾定律。從工作曲線計算出摩爾吸光系數(shù)ε=2.15X10l2.7共存離子的影響及干擾的消除測定50ug/100mL鈣,成果表明:相對誤差不超過±5%時，下列13種共存離子不干擾鈣測定的容許量(以g計)為:鉀離子(8),鈉離子(8),二價鐵離子(0.0002)，鋁離子(0.0002),二價銅離子(0.0004)，鋅離子(0.0004)，二價錳離子(0.0004)，鋇離子(0.0004)，三價鐵離子(0.0004)，二價鎂離子(0.00012),氯離子(12),硝酸根離子(8),溴離子(4)。試驗常用的干擾克制劑EDTA,、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、三乙醇胺,8-羥基喹啉、硫代硫酸鈉等。對銅干擾的克制效果，成果表明，加人檸檬酸可以消除銅的干擾，并對其他元素?zé)o影響，同步三乙醇胺可以消除鐵、鋁的干擾。三、樣品分析1.化學(xué)試劑：<1>硫酸鈉：精確稱取10.0000g硫酸鈉，用少許蒸餾水溶解后，定容于100mL容量瓶中.依次加入3ml0.1%的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。由工作曲線計算出試液中鈣含量，樣品分析成果見表（7試樣 硫酸鈉測定成果/(μg/g)7.107.097.107.097.10平均值/(μg/g)7.10相對平均偏差/(%)0.056加入量（μg）100.0測得量（μg）99.1回收率99.1原子吸取光譜/(μg/g)7.00硫酸鈉的測定數(shù)據(jù)表（7）<2>氯化鉀：精確稱取5.0000g氯化鉀，用少許蒸餾水溶解后，定容于100mL容量瓶中.依次加入3ml0.1%的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。由工作曲線計算出試液中鈣含量，樣品分析成果見表（試樣氯化鉀測定成果/(μg/g)13.9813.8814.0814.1214.08平均值/(μg/g)14.03相對平均偏差/(%)0.56加入量（μg）100.0測得量（μg）99.4回收率99.4原子吸取光譜/(μg/g)14.03氯化鉀的測定數(shù)據(jù)表（8）<3>氯化鈉：精確稱取15.0000g氯化鈉，用少許蒸餾水溶解后，定容于100mL容量瓶中.依次加入3ml0.1%的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。由工作曲線計算出試液中鈣含量，樣品分析成果見表試樣氯化鈉測定成果/(μg/g)4.204.144.174.194.14平均值/(μg/g)4.17相對平均偏差/(%)0.53加入量（μg）100.0測得量（μg）97.8回收率97.8原子吸取光譜/(μg/g)4.18氯化鈉的測定數(shù)據(jù)表（9）<4>硝酸鈉：精確稱取10.0000g硝酸鈉，用少許蒸餾水溶解后，定容于100mL容量瓶中.依次加入3ml0.1%的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。試樣硝酸鈉測定成果/(μg/g)8.128.158.198.128.17平均值/(μg/g)8.15相對平均偏差/(%)0.29加入量（μg）100.0測得量（μg）99.6回收率99.6原子吸取光譜/(μg/g)8.14硝酸鈉的測定數(shù)據(jù)表（10）由以上四種化學(xué)試劑數(shù)據(jù)可知，本法測定成果與原子吸取光譜法相一致，五次測定相對原則偏差小干2%，措施加標(biāo)回收率在98%~100%之間。2.水樣的分析：<1>工業(yè)水：精確移取2.00mL工業(yè)水樣品于100mL容量瓶中，依次加入3ml0.1%的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。由工作曲線計算出試液中鈣含量，樣品分析成果見表1試樣工業(yè)水測定成果/(μg/g)39.1739.1639.1739.1839.16平均值/(μg/g)39.17相對平均偏差/(%)0.015加入量（μg）100.0測得量（μg）99.5回收率99.5EDTA法(μg/g)39.18工業(yè)水的測定數(shù)據(jù)表（11）<2>自來水：精確移取2.00mL自來水樣品于100mL容量瓶中，依次加入3ml0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的鈣指示劑，5mlpH為5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用去離子水稀釋至刻線，搖勻。放置10min，用1cm的吸取池，以試劑空白溶液為參比溶液，在波長為620nm處測定各溶液吸光度。由工作曲線計算出試液中鈣含量