第二章 基因工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用

第二章基因工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用第一節(jié)基因工程概述一、基因工程的定義二、基因工程的發(fā)展簡(jiǎn)史一、基因工程的定義二、基因工程的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）遺傳物質(zhì)的研究（二）基因工程的誕生和發(fā)展（一）遺傳物質(zhì)的研究（二）基因工程的誕生和發(fā)展第二節(jié)基因工程工具酶一、限制性內(nèi)切核酸酶二、DNA甲基化酶三、連接酶四、DNA聚合酶五、堿性磷酸酯酶六、T4多聚核苷酸激酶七、S1核酸酶八、反向轉(zhuǎn)錄酶一、限制性內(nèi)切核酸酶（一）限制性內(nèi)切酶的命名（二）限制性內(nèi)切酶種類（三）限制性內(nèi)切酶的基本特性（一）限制性內(nèi)切酶的命名（二）限制性內(nèi)切酶種類1.Ⅰ類限制性內(nèi)切酶2.Ⅱ類限制性內(nèi)切酶3.Ⅲ類限制性內(nèi)切酶1.Ⅰ類限制性內(nèi)切酶2.Ⅱ類限制性內(nèi)切酶3.Ⅲ類限制性內(nèi)切酶（三）限制性內(nèi)切酶的基本特性1.識(shí)別特定序列2.切割方式1.識(shí)別特定序列2.切割方式二、DNA甲基化酶三、連接酶四、DNA聚合酶（一）大腸桿菌DNA聚合酶（二）大腸桿菌Klenow片段（一）大腸桿菌DNA聚合酶（二）大腸桿菌Klenow片段五、堿性磷酸酯酶六、T4多聚核苷酸激酶七、S1核酸酶八、反向轉(zhuǎn)錄酶第三節(jié)基因工程載體及其選擇一、大腸桿菌載體二、酵母載體三、植物載體四、動(dòng)物載體一、大腸桿菌載體（一）質(zhì)粒載體（二）噬菌體（三）柯斯質(zhì)粒載體（一）質(zhì)粒載體（二）噬菌體（三）柯斯質(zhì)粒載體二、酵母載體（一）整合型載體（YIP）（二）復(fù)制型載體（YRP）（三）附加體型載體（YEP）（一）整合型載體（YIP）（二）復(fù)制型載體（YRP）（三）附加體型載體（YEP）三、植物載體四、動(dòng)物載體第四節(jié)目的基因的制備一、基因組文庫(kù)法二、cDNA文庫(kù)法三、化學(xué)合成法四、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）一、基因組文庫(kù)法二、cDNA文庫(kù)法三、化學(xué)合成法四、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）第五節(jié)基因的克隆與檢測(cè)一、基因的克隆二、重組克隆的篩選與鑒定一、基因的克隆（一）基因與載體的連接（二）重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（一）基因與載體的連接1.黏性末端連接2.平末端連接3.人工加尾連接4.人工接頭連接1.黏性末端連接2.平末端連接3.人工加尾連接4.人工接頭連接（二）重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞1.生物學(xué)方法2.物理學(xué)方法3.化學(xué)方法1.生物學(xué)方法2.物理學(xué)方法3.化學(xué)方法二、重組克隆的篩選與鑒定（一）利用表型特征進(jìn)行篩選（二）重組DNA電泳檢測(cè)（三）內(nèi)切酶圖譜鑒定（四）利用核酸雜交進(jìn)行鑒定（五）利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)鑒定（六）免疫沉淀檢測(cè)法（七）DNA序列分析（一）利用表型特征進(jìn)行篩選1.抗藥性標(biāo)志的篩選2.β-半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選3.利用噬菌斑的形成進(jìn)行篩選1.抗藥性標(biāo)志的篩選2.β-半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選3.利用噬菌斑的形成進(jìn)行篩選（二）重組DNA電泳檢測(cè)（三）內(nèi)切酶圖譜鑒定（四）利用核酸雜交進(jìn)行鑒定（五）利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)鑒定(六)免疫沉淀檢測(cè)法（七）DNA序列分析第六節(jié)外源基因的表達(dá)一、外源基因正確表達(dá)的條件二、外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)三、影響外源基因在原核細(xì)胞中高效表達(dá)的因素四、外源基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)一、外源基因正確表達(dá)的條件（一）啟動(dòng)子（二）S-D序列（三）起始密碼子（四）終止子（五）表達(dá)產(chǎn)物的后加工（一）啟動(dòng)子（二）S-D序列（三）起始密碼子（四）終止子（五）表達(dá)產(chǎn)物的后加工二、外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)三、影響外源基因在原核細(xì)胞中高效表達(dá)的因素（一）啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)對(duì)表達(dá)效率的影響（二）載體的選擇（三）S-D序列與起始密碼子之間的距離（四）轉(zhuǎn)譯起始相關(guān)序列對(duì)表達(dá)效率的影響（五）轉(zhuǎn)錄終止區(qū)對(duì)外源基因表達(dá)效率的影響（六）基因拷貝數(shù)對(duì)表達(dá)效率的影響（七）翻譯后的蛋白修飾與基因表達(dá)的關(guān)系（八）提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性（九）培養(yǎng)條件的控制對(duì)表達(dá)效率的影響（一）啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)對(duì)表達(dá)效率的影響（二）載體的選擇（三）S-D序列與起始密碼子之間的距離（四）轉(zhuǎn)譯起始相關(guān)序列對(duì)表達(dá)效率的影響（五）轉(zhuǎn)錄終止區(qū)對(duì)外源基因表達(dá)效率的影響（六）基因拷貝數(shù)對(duì)表達(dá)效率的影響（七）翻譯后的蛋白修飾與基因表達(dá)的關(guān)系（八）提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性（九）培養(yǎng)條件的控制對(duì)表達(dá)效率的影響四、外源基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)