伊血安顆粒止血、正氣止痛作用的研究

伊血安顆粒止血、正氣止痛作用的研究

易立安顆粒（原名“復方”婦女血康顆粒）是廣西瑤族人民治療婦女血崩的配方。以瑤族藥物滇黔艾納香為君藥，以母字草、延胡索、甘草等為原料，用于生產黃棕色到棕色的藥物。它具有活血、止血、益氣止痛的功效。用于血液抑郁癥的治療，產后惡露和流產后子宮出血。這是廣西萬壽堂制藥有限公司開發(fā)的三種中藥。本文對伊血安顆粒促凝血作用、鎮(zhèn)痛作用、雌激素樣作用等進行了藥效學初步研究。1材料和方法1.1動物、藥品與儀器伊血安顆粒,廣西萬壽堂藥業(yè)有限公司,批號950616;己烯雌酚注射液,上海第九制藥廠,2mg·mL-1,批號950308-111;縮宮素注射液,廣州明興制藥廠,批號940225-1;100%生化湯,廣西藥檢所藥理室煎制(生化湯組方藥材當歸、川芎、桃仁、炮姜、甘草(炙)的飲片皆購自廣西藥材站)。組織凝血活酶,廣西藥檢所藥理室制備。其余試劑為自制。昆明種小鼠,普通級,廣西中醫(yī)藥研究所動物室提供。SD系大白鼠,普通級,廣西中醫(yī)藥研究所動物室提供。日本大耳白兔,普通級,廣西藥檢所動物室提供。豚鼠,普通級,雌性,無孕,廣西生物制品廠動物車間提供。動物雌雄分籠群養(yǎng)(兔單養(yǎng)),每籠5～6只,自由飲水進食,喂固體飼料(兔及豚鼠加喂適量青菜)。室溫25～27℃(空調),相對濕度60%～75%。SPA-4型多功能血小板聚集儀,上?？七_測試儀器廠產品;XWTD-204臺式自動平衡記錄儀,上海大華儀表廠產品;T2型張力傳感器,上海醫(yī)科大學藥理教研室提供;MP120-2型電子天平(1/1000g),上海第二天平儀器廠產品。2實驗方法和結果2.1各組小鼠出血時間的比較取小鼠72只(雌雄各半,體重18～22g),隨機均分為6組。4個組給受試藥物,陽性對照組給生化湯,空白對照組給常水,劑量見表1,ig1次/d,給藥體積為20mL·kg-1,連續(xù)5d。末次給藥后50min,將小鼠置固定器內,用剪尾法測定出血時間。結果見表1。結果可見,伊血安兩個較大劑量組的出血時間均短于空白對照,差異有顯著性意義。提示本品有縮短小鼠出血時間的作用。2.2凝血時間測定結果取小鼠60只(雌雄各半,體重18～22g),分組、給藥同2.1。末次給藥后1h,分別用毛細玻管法和玻片法測定凝血時間。結果見表2。毛細玻管法測定結果,伊血安3個較大劑量組的凝血時間均短于空白對照組;玻片法測定結果,伊血安大劑量組的凝血時間短于空白對照組;差異有顯著性意義。提示本品有縮短小鼠凝血時間的作用。2.3各組凝血酶原時間的比較取兔40只(雌雄兼用,體重2.5～3.0kg),隨機分為5組。3個組給受試藥物,陽性對照組給生化湯,空白對照組給常水,劑量見表3,ig1次/d,給藥體積為10mL·kg-1,連續(xù)3d。末次給藥后1h,經耳動脈采血,按9∶1與109mmol·L-1枸櫞酸鈉混合,離心后取血漿按文獻方法測定凝血酶原時間(每個標本測定3次,取均值)。結果見表3。伊血安3個劑量組的凝血酶原時間均短于空白對照組,差異有非常顯著性意義。提示本品有縮短兔凝血酶原時間的作用。2.4優(yōu)高爾夫球場溶解時間測定動物、分組、給藥均同2.3。末次給藥后1h,經耳動脈采血,按9∶1與109mmol·L-1枸櫞酸鈉混合,離心分離出無血小板血漿。將無血小板血漿0.5mL、蒸餾水9mL、1%醋酸0.1mL加入離心管中,混勻后置4℃冰箱中10min,離心取優(yōu)球蛋白,加硼砂緩沖液0.5mL,攪拌1min使其溶解,置37℃水浴中,2min后加入0.025mol·L-1氯化鈣0.5mL,待凝固后再置37℃水浴中,每10min觀察1次,記錄各管完全溶解所需時間(優(yōu)球蛋白溶解時間)。結果見表4?？梢?伊血安兩個較大劑量組的優(yōu)球蛋白溶解時間均長于空白對照組,差異有顯著性意義。提示本品有延長優(yōu)蛋白溶解時間的作用。2.5血小板功能檢測取大鼠40只(雌雄兼用,體重135～165g),分組、給藥同2.3,劑量見表5,ig1次/d,給藥體積為20mL·kg-1,連續(xù)7d。末次給藥后30min,戊巴比妥鈉ig40mg·kg-1麻醉后經腹主動脈采血(接觸血小板的器具均硅化后使用),按9∶1與109mmol·L-1枸櫞酸鈉混合于試管中,以500r·min-1離心2min后吸取上層富含血小板血漿(PRP),余下血漿再經3000r·min-1離心10min后,吸取上層貧血血小板血漿(PPP)。計PRP中血小板數,以PPP調PRP使血小板數在60～70萬/μL。以血小板聚集儀按比濁法測定血小板聚集性(聚集誘導劑為ADP-Adr混合液),每分鐘觀察1次,記錄最大聚集百分率和最大聚集時間。結果見表5。結果可見,伊血安3個劑量組的血小板最大聚集率均稍大于空白對照組,而血小板最大聚集時間均小于空白對照組,但差異無顯著性意義,提示本品有增強大鼠血小板聚集性的作用趨勢。2.6伊血安對精子張力、收縮波幅、頻率的影響取雌性無孕豚鼠32只(體重250～350g),隨機均分為4組。實驗前24h均sc已烯雌酚注射液4mg·kg-1以提高其子宮對藥物的敏感性。各鼠分別ip烏拉坦1g·kg-1麻醉后,仰臥固定于恒溫手術臺上,手術開腹,作十二指腸插管供給藥用;分離一側子宮,剝離其周圍組織,子宮兩端分別縫線固定于特制的玻璃罩兩端,宮體中央縫線連接張力傳感器(加1g負荷),以記錄儀記錄其張力變化。待描記曲線穩(wěn)定30min后,記錄一段曲線作為藥前值,隨即經十二指腸給藥:高,低劑量組分別按33.6g·kg-1、16.8g·kg-1給受試藥物,陽性對照組給生化湯10.0g·kg-1,空白對照組給等體積生理鹽水,均為10mL·kg-1。記錄藥后60min內的曲線變化,計算藥后提高百分率。結果見表6～8?？梢?伊血安兩個劑量組的子宮張力、收縮波幅及頻率提高百分率均明顯大于空白對照組,差異有顯著性意義。提示本品對豚鼠在體子宮有明顯的興奮作用,使其張力明顯提高、收縮力明顯增強、收縮頻率明顯加快,但在實驗劑量下未見引起強直性收縮。2.7血斑吸收時間取兔24只雌雄各半,體重(2.2～3.0kg),各兔均作耳背皮下血斑造型:將自身血液分別注入兩耳背皮下無血管處,每處0.1mL,形成皮下血丘,輕壓血丘后形成皮下血斑。隨后測量各兔耳血斑的最大直徑,并隨機分4組及給藥:兩個組給受試藥物,陽性對照組給生化湯,空白對照組給常水,劑量見表7,ig1次/d,給藥體積為10mL·kg-1,直至血斑完全吸收。以血斑直徑縮小12、血斑完全消失的時間分別作為血斑50%、100%吸收時間。結果見表9。結果可見,伊血安兩個劑量組的血斑吸收時間均與空白對照組相近,差異無顯著性意義。提示本品對兔耳皮下血斑的吸收無明顯影響。2.8給藥后小鼠的扭體次數取雌性小鼠50只(體重18～21g),分組、給藥同2.3劑量見表10,ig1次/d,給藥體積均為20mL·kg-1,連續(xù)3d。末次給藥后1h,每鼠均ip縮宮素以誘發(fā)宮縮痛。記錄各鼠ip縮宮素后20min內的扭體次數。結果見表10。結果可見,伊血安大劑量組的扭體次數比空白組減少78.0%,差異有顯著性意義。提示本品對縮宮素誘發(fā)小鼠痛經模型有一定的鎮(zhèn)痛作用。2.9扭體次數測定取小鼠50只(雌雄各半,體重18～22g),分組、給藥同2.3,劑量見表11,給藥體積均為20mL·kg-1,連續(xù)ig5d。末次給藥后1h,各鼠均ip0.6%醋酸溶液0.2mL,記錄各鼠10min內的扭體次數。結果見表11。結果可見,伊血安3個劑量組的扭體次數均少于空白組,差異有顯著性意義。提示本品對小鼠腹膜醋酸致痛有一定的鎮(zhèn)痛作用。2.10伊血安對小鼠精子系數的影響取幼齡雌性小鼠60只(24～27日齡,體重10～12g),隨機均分為5組。3個組給受試藥物ig,1次/d,連續(xù)5d;陽性對照組給已烯雌酚注射液,d1、d3各im1次;空白對照組給常水,劑量見表12。末次給藥后禁飼24h,稱體重,處死小鼠,剖取子宮于電子天平上稱重,換算成子宮系數。結果見表12。結果可見,伊血安3個劑量組的子宮系數均與空白對照組相近,差異均無顯著性意義。提示本品對幼齡小鼠子宮重量無明顯影響。3凝血過程的激活和延長藥物的應用綜上試驗結果表明,本品有明顯的促凝血、縮宮、鎮(zhèn)痛作用,其促凝血作用又